9. Bakterioloogiline meetod nakkushaiguste diagnoosimiseks
Mikrobioloogilise diagnostika peamine meetod ja mikrobioloogia "kuldstandard" on bakterioloogiline meetod.
Bakterioloogilise meetodi eesmärk seisneb patogeeni puhaskultuuri eraldamises uuritavast materjalist, puhaskultuuri kogumises ja selle kultuuri identifitseerimises omaduste kogumi järgi: morfoloogilised, toonilised, kultuurilised, biokeemilised, antigeensed, patogeensuse ja toksilisustegurite olemasolu ning selle tundlikkuse määramises. antimikroobsetele ravimitele ja bakteriofaagidele.
Bakterioloogiline uurimismeetod hõlmab:
1. uuritava materjali inokuleerimine toitekeskkonnas
2. puhaskultuurisolatsioon
3. mikroorganismide tuvastamine (liiki kuuluvuse määramine).
Aeroobsete ja anaeroobsete bakterite puhaste kultuuride eraldamine ja tuvastamine hõlmab järgmisi uuringuid:
I etapp (töö kohaliku materjaliga)
Eesmärk: isoleeritud kolooniate saamine
1. Esialgne mikroskoopia annab ligikaudse ülevaate mikrofloorast
2. Uurimistööks materjali ettevalmistamine
3. Külvamine tihedale toitainekeskkonnale isoleeritud kolooniate saamiseks
4. Inkubeerimine optimaalsel temperatuuril, kõige sagedamini 37°C, 18-24 tundi
II etapp
Eesmärk: puhta kultuuri saamine
1. Kolooniate makroskoopiline uurimine läbiva ja peegeldunud valguses (kolooniate suuruse, kuju, värvi, läbipaistvuse, konsistentsi, struktuuri, kontuuri, pinna iseloomustus).
2. Isoleeritud kolooniate mikroskoopiline uurimine
3. Aerotolerantsuse testimine (et kinnitada rangete anaeroobide olemasolu uuritavas materjalis).
4. Teatud liigile iseloomulike kolooniate külvamine puhaskultuuri akumulatsioonisöötmele või valikulisele söötmele ja inkubeerimine optimaalsetes tingimustes.
III etapp
Eesmärk: isoleeritud puhaskultuuri tuvastamine
1. Isoleeritud kultuuri identifitseerimiseks bioloogiliste omaduste kompleksi järgi uuritakse järgmist:
morfoloogia ja toonilised omadused
kultuurilised omadused (kasvu iseloom toitainekeskkonnas)
biokeemilised omadused (mikroorganismide ensümaatiline aktiivsus)
seroloogilised omadused (antigeensed)
virulentsed omadused (võime toota patogeensusfaktoreid: toksiine, ensüüme, kaitse- ja agressioonifaktoreid)
patogeensus loomadele
faagi lüüsitavus (tundlikkus diagnostiliste bakteriofaagide suhtes)
tundlikkus antibiootikumide suhtes
muud individuaalsed omadused
IV etapp (järeldus)
Uuritud omaduste järgi tehakse järeldus isoleeritud kultuuri kohta
Uurimise esimene etapp. Patoloogilise materjali uurimine algab mikroskoopiaga. Värvitud natiivse materjali mikroskoopia võimaldab ligikaudselt kindlaks teha uuritava objekti mikroobse maastiku koostist, mõningaid mikroorganismide morfoloogilisi tunnuseid. Loodusliku materjali mikroskoopia tulemused määravad suures osas edasise uurimistöö käigu ja seejärel võrreldakse neid toitekeskkonnas inokuleerimisel saadud andmetega.
Kui proovis on piisav patogeensete mikroorganismide sisaldus, külvatakse tihedale toitekeskkonnale (isoleeritud kolooniate saamiseks). Kui uuritavas materjalis on vähe baktereid, viiakse nakatamine läbi vedelale toitainerikastuskeskkonnale. Toitekeskkonnad valitakse vastavalt mikroorganismide vajadustele.
Mikroorganismide kasvatamine on võimalik ainult siis, kui luuakse optimaalsed tingimused nende elutegevuseks ja järgitakse reegleid, mis välistavad uuritava materjali saastumise (juhuslik saastumine võõraste mikroobidega). Katseklaasis, kolvis või Petri tassis võib luua kunstlikud tingimused, mis välistavad kultuuri saastumise teiste liikidega. Kõik nõud ja toitainekeskkond peavad olema steriilsed ning pärast mikroobse materjali inokuleerimist kaitstud välise saastumise eest, mis saavutatakse korkide või metallkorkide ja kaante abil. Manipulatsioonid katsematerjaliga tuleks läbi viia alkoholilambi leegi tsoonis, et välistada materjali saastumine väliskeskkonnast, samuti järgida ohutusnõudeid.
Materjali inokuleerimine toitainekeskkonnale tuleks teha hiljemalt 2 tunni jooksul alates nende kogumise hetkest.
Uurimise teine etapp. Kolooniate uurimine ja puhaskultuuride isoleerimine. Pärast päeva inkubeerimist kasvavad plaatidel kolooniad ja esimesel käigul on kasv pidev ja järgmisel - isoleeritud kolooniad. Koloonia on sama liigi mikroobide kogum, mis on kasvanud ühest rakust. Kuna materjal on enamasti mikroobide segu, kasvab mitut tüüpi kolooniaid. Erinevad kolooniad märgitakse pliiatsiga, joonistades need põhja küljelt ringiga ja uurides neid (tabel 11). Kõigepealt uurige palja silmaga kolooniaid: makroskoopilisi märke. Tassi vaadeldakse (avamata) alt läbiva valguse käes, märgitakse kolooniate läbipaistvus (läbipaistev, kui valgust kinni ei püüa; poolläbipaistev, kui valgust osaliselt kinni ei püüa; läbipaistmatu, kui valgus kolooniat ei läbi), mõõta (mm) kolooniate suurust. Seejärel uurivad nad kolooniaid kaane küljelt, märgivad kuju (tavaline ümmargune, ebakorrapärane, tasane, kumer), pinna olemust (sile, läikiv, tuhm, kare, kortsus, märg, kuiv, limane), värvi (värvitu, värviline).
Tabel 11. Kolooniate uurimise skeem
|
Võimalikud kolooniaomadused |
||
|
Lame, kumer, kuplikujuline, surutud, ümmargune, rosetikujuline, tähekujuline |
||
|
Suurus, mm |
Suur (4-5 mm), keskmine (2-4 mm), väike (1-2 mm), kääbus (< 1 мм) |
|
|
Pinna loodus |
Sile (S-kujuline), kare (R-kujuline), limane (M-kujuline), triibuline, konarlik, matt, läikiv |
|
|
Värvitu, värvitud |
||
|
Läbipaistvus |
Läbipaistev, läbipaistmatu, poolläbipaistev |
|
|
Servade olemus |
Sile, sakiline, narmastega, kiuline, kammjas |
|
|
Sisemine struktuur |
Homogeenne, teraline, heterogeenne |
|
|
Järjepidevus |
Viskoosne, limane, murenev |
|
|
Emulgeerimine veetilgas |
Hea halb |
Märkus: 5-7 punkti uuritakse mikroskoobi väikese suurendusega.
Kolooniate erinevust näete veelgi paremini, kui neid sisse suumite. Selleks asetatakse suletud anum tagurpidi objektilauale, kondensaator lastakse veidi alla, kasutatakse väikest objektiivi suurendust (x8), tassi liigutades uuritakse kolooniates mikroskoopilisi märke: serva olemust ( sile, laineline, sakiline, kammjas), struktuur (homogeenne, teraline, kiuline, homogeenne või erinev keskelt ja perifeeriast).
Järgmisena uuritakse kolooniate mikroobirakkude morfoloogiat. Selleks tehakse iga märgistatud koloonia osast määrded, mis on värvitud Grami järgi. Kolooniate võtmisel pöörake tähelepanu konsistentsile (kuiv, kui koloonia mureneb ja seda võetakse vaevaliselt; pehme, kui seda võetakse kergesti silmuse peale; limane, kui koloonia ulatub silmuseni; kõva, kui koloonia osa ei võta silmus, ainult kogu koloonia saab eemaldada) .
Määrdude vaatamisel tehakse kindlaks, et kolooniat esindab ühte tüüpi mikroobid, mistõttu saab eraldada puhtaid bakterikultuure. Selleks tehakse uuritud kolooniatest uuesti külvamine kald-agarile. Kolooniatest ülekandmisel tuleb jälgida, et võtta täpselt ettenähtud kolooniad, puudutamata läheduses asuvate kolooniate silmust. Katseklaasid märgistatakse ja inkubeeritakse termostaadis 37 °C juures 24 tundi.
Uurimise kolmas etapp. Isoleeritud kultuuri tuvastamine. Mikroobide identifitseerimine - materjalist eraldatud kultuuri süstemaatilise asukoha määramine liigi ja variandini. Identifitseerimise usaldusväärsuse esimene tingimus on kultuuri tingimusteta puhtus. Mikroobide tuvastamiseks kasutatakse märkide komplekti: morfoloogiline (kuju, suurus, lipu olemasolu, kapslid, eosed, suhteline asend määrdumises), tintoriaalne (seos Grami peitsi või muude meetoditega), keemiline (guaniini + tsütosiini suhe veres). DNA molekul), kultuuriline (toitainete vajadus, kultiveerimistingimused, kasvu kiirus ja iseloom erinevatel toitainetel), ensümaatiline (erinevate ainete lõhustamine vahe- ja lõpp-produktide moodustumisega), seroloogiline (antigeenne struktuur, spetsiifilisus), bioloogiline (virulentsus). loomadele toksigeensus , allergeensus, antibiootikumide toime jne).
Biokeemiliseks diferentseerumiseks bakterite võime kääritada süsivesikuid koos vahe- ja lõppsaadused, võime lagundada valke ja peptoone ning uurida redoksensüüme.
Sahharolüütiliste ensüümide uurimiseks inokuleeritakse isoleeritud kultuurid katseklaasidesse poolvedela söötmega, mis sisaldab laktoosi, glükoosi ja muid süsivesikuid ja polüoole. Poolvedelal söötmel inokuleeritakse söötme sügavusele süstimisega. Süstimisega külvamisel hoitakse katseklaasi koos söötmega nurga all, kork eemaldatakse ja katseklaasi serv põletatakse. Materjal võetakse steriilse silmusega ja toitekeskkonna kolonn torgatakse sellega peaaegu põhjani.
Proteolüütiliste ensüümide määramiseks inokuleeritakse isoleeritud kultuur peptoonveega või MPB-ga. Selleks võtavad nad inokulatsiooniga katseklaasi endale lähemale ja katseklaasi koos söötmega endast kaugemale. Mõlemad katseklaasid avatakse korraga, püüdes kinni nende korgid väikese sõrme ja peopesa servaga, katsutite servad põletatakse, kaltsineeritud jahutatud silmusega püütakse veidi kultuuri ja kantakse teise katseklaasi, tritureeritakse vedelas keskkonnas katseklaasi seinale ja pestakse söötmega maha.
Külvamisel ja ümberkülvimisel tuleks tähelepanu pöörata steriilsuse reeglite järgimisele, et mitte saastada oma põllukultuure kõrvalise mikroflooraga ega saastada keskkonda. Katseklaasid märgistatakse ja asetatakse termostaadi inkubeerimiseks 37 °C juures ööpäevaks.
Järeldus
Tulemuste arvestus. Uurimistöö järeldus. Identifitseerimise tulemusi võetakse arvesse ning saadud andmete kogumikust, juhendis (Bergy juhend, 1994-1996) kirjeldatud tüübitüvede klassifikatsiooni ja tunnuste alusel määratakse isoleeritud kultuuride tüüp.
| " |
4.2. BIOLOOGILISED JA MIKROBIOLOOGILISED TEGURID
Kõhutüüfuse ja paratüüfuse A, B ja C bakterioloogiline diagnoos
Tutvustamise kuupäev: alates heakskiitmise hetkest
1. ARENDATUD: FGUN St. Petersburg NIIEM neid. Rospotrebnadzori Pasteur (L.A. Kaftyreva, Z.N. Matvejeva, G.F. Trifonova); Föderaalse Tervise ja Sotsiaalarengu Agentuuri (A.G. Boytsov) GOUVPO "I.I. Mechnikovi nimeline Peterburi riiklik meditsiiniakadeemia".
3. KINNITATUD Tarbijaõiguste kaitse ja inimeste heaolu järelevalve föderaalse talituse juhi, Vene Föderatsiooni riikliku sanitaararsti peaarst G. G. Oništšenko poolt 29. detsember 2007 0100/13745-07-34
4. TUTVUSTATUD heakskiitmise hetkest.
5. ESIMEST KORDA TUTVUSTATUD.
1 kasutusala
1 kasutusala
1.1. Juhendis on sätestatud kõhutüüfuse ja paratüüfuse A, B ja C bakterioloogilise diagnoosimise põhiprintsiibid ja tunnused; sisaldab kaasaegset teavet patogeenide bioloogiliste omaduste, antibakteriaalsete ravimite resistentsuse, nende eraldamise toitainete ja tüüfuse ja paratüüfuse patogeenide eristamise tunnuste kohta teistest salmonella seroloogilistest variantidest.
2. Lühendite loetelu
ABP - antibakteriaalne ravim
BCA - vismuti sulfiitagar
MPU - meditsiini- ja ennetusasutus
MIC – minimaalne inhibeeriv kontsentratsioon
P - vahepealne
U - stabiilne
H - tundlik
RIF - immunofluorestsentsreaktsioon
KNS - kesknärvisüsteem
Tabelites:
"+" - positiivne reaktsioon esimesel päeval;
"-" - negatiivne reaktsioon 4-20 päeva;
"(+)" - hilinenud positiivne reaktsioon 2-20 päeva;
d - mitmesugused ensümaatilised reaktsioonid.
Võimalik on diferentseerumine ensümaatilisteks variantideks.
3. Üldsätted
3.1. Kõhutüüfus ja paratüüfus A, B ja C on antroponootilised sooleinfektsioonid, mida põhjustavad Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi B ja Salmonella Paratyphi C. harva - paratüüfus C.
3.2. Haigustele on iseloomulikud peensoole lümfisüsteemi haavandilised kahjustused, baktereemia, palavik, tsükliline kliiniline kulg koos raske joobeseisundiga, roosiline lööve kehanahal, hepato- ja splenomegaalia. Kõhukinnisus on sagedasem kui kõhulahtisus. Peyeri niudesoole plaastrite haavandumine põhjustab ligikaudu 1% juhtudest sooleverejooksu ja sooleperforatsiooni, millel on patsiendile kõige kahjulikumad tagajärjed.
3.3. Kõhutüüfuse ja paratüüfuse A, B ja C diagnoos tehakse haiguse kliiniliste tunnuste alusel, võttes arvesse epidemioloogilist anamneesi ja kõikehõlmava laboriuuringu andmeid, mis hõlmavad klassikalisi bakterioloogilisi ja seroloogilisi meetodeid. Bakterioloogiline diagnostika on esmatähtis, sest sel juhul on võimalik saada kõige täielikum teave patogeeni bioloogiliste omaduste, sealhulgas selle tundlikkuse kohta antibakteriaalsete ravimite suhtes.
3.4. Antimikroobsete ravimite kasutamine kõhutüüfuse ja paratüüfuse etiotroopseks raviks vähendas ühelt poolt suremust 10-20%-lt alla 1%-le ja teiselt poolt raskendas laboratoorset diagnoosimist, kuna. sageli võetakse materjali proovid laboriuuringuteks pärast antibiootikumravi algust. See asjaolu sunnib hoolikamalt lähenema uurimismaterjali valikule, uuritava materjali võtmisele, uurimistehnikale.
3.5. Kõhutüüfuse epidemioloogia kaasaegne tunnus on selle haiguse endeemsetelt territooriumidelt, lähi- ja kaugematest riikidest nakatumise sageduse järsk tõus, samuti Venemaa elanike nakatumine nendesse riikidesse lahkumisel ja riigisisene rändeprotsessis. Teiseks tunnuseks on suure epidemioloogilise riskiga kontingendi olemasolu kindla elukohata isikute näol, kelle seas on registreeritud kõrge kõhutüüfuse esinemissagedus.
3.6. Need juhised koostati selleks, et ühtlustada kõhutüüfuse ja paratüüfuse A, B ja C bakterioloogilise diagnoosimise meetodeid ning laboriuuringu tulemuste õiget tõlgendamist, võttes arvesse kliiniku tänapäevaseid eripärasid, ravi ja epidemioloogiline olukord konkreetsetes piirkondades.
4. Näidustused bakterioloogiliseks diagnostikaks
Näidustus bioloogilise materjali bakterioloogiliseks uurimiseks tüüfuse ja paratüüfuse A, B ja C patogeenide esinemise suhtes on vajadus uurida:
4.1) kõhutüüfuse kahtlusega, samuti 5 või enama päeva kestva teadmata etioloogiaga palavikuga patsiendid;
4.2) isikud, kes olid kokku puutunud kõhutüüfuse ja paratüüfuse A, B, C haigetega;
4.3) teatud kutsealade, tööstusharude ja organisatsioonide töötajad tööle lubamisel ja epidemioloogiliste näidustuste järgi;
4.4) isikud enne haiglasse ja spetsialiseeritud sanatooriumisse vastuvõttu vastavalt kliinilistele ja epidemioloogilistele näidustustele;
4.5) statsionaarsele ravile registreeritud isikud psühho-neuroloogilise (psühhosomaatilise) profiiliga haiglates (osakondades), hooldekodudes, krooniliste psüühikahäirete ja kesknärvisüsteemi kahjustustega inimeste internaatkoolides ning muud tüüpi ööpäevaringselt suletud asutustes. jää;
4.6) kõhutüüfuse ja paratüüfusega patsiendid pärast haiguse kliiniliste sümptomite kadumist enne haiglast väljakirjutamist;
4.7) isikud, kes on ambulatoorsel vaatlusel haigestunud kõhutüüfusesse ja paratüüfusesse;
4.8) kroonilised bakterikandjad, mis tuvastatakse teatud kutsealade, tööstusharude ja organisatsioonide töötajate hulgas nendesse ettevõtetesse ja rajatistesse tööle asumisel;
4.9) lõikematerjal kõhutüüfuse ja paratüüfuse kahtluse korral.
5. Meetodi logistika
5.1. Standardsed katse- ja abiseadmed, mikrobioloogialaborite mõõteriistad.
5.2. Toitesöötmed, diagnostilised seerumid ja keemilised reaktiivid kõhutüüfuse ja paratüüfuse A, B ja C tekitajate kasvatamiseks, isoleerimiseks, identifitseerimiseks ja antibakteriaalsete ravimite suhtes tundlikkuse määramiseks.
5.3. Kõhutüüfuse ja paratüüfuse haiguste laboratoorseks diagnoosimiseks ning bakterikandjate tuvastamiseks tuleks kasutada Vene Föderatsiooni territooriumil vastavalt kehtestatud korrale kasutamiseks lubatud toitaineid ja reaktiive.
6. Kõhutüüfuse ja paratüüfuse laboratoorne diagnostika
6.1. Bakterioloogilise meetodi põhimõte põhineb elusate mikroorganismide tuvastamisel erinevates bioloogilistes substraatides (veri, uriin, väljaheited, sapp, luuüdi, roseool) sõltuvalt haiguse staadiumist. Selleks külvatakse teatud kogus bioloogilist materjali spetsiaalsele toitainekeskkonnale, millele järgneb inkubeerimine termostaadis ning S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B ja S. Paratyphi iseloomulike mikroorganismide kasvanud kolooniate tuvastamine. C, vastavalt kultuurilistele ja ensümaatilistele omadustele ning antigeensetele omadustele.
6.2. Ainult bakterioloogiline uuring võib anda täpse etioloogilise diagnoosi ja kontrollida organismi vabanemist patogeenist. Seoses kõhutüüfuse ja paratüüfuse diferentsiaaldiagnostikaga on ainsaks meetodiks bioloogilise materjali laboratoorne uuring patogeeni isoleerimisega ja selle identifitseerimine seroloogilise variandi tasemele, sest nakkusprotsessi kliiniline kulg ei võimalda alati neid nosoloogilisi vorme eristada.
7. Bakterioloogiline uuring
7.1. Kõhutüüfuse ja paratüüfuse A, B ja C tekitajate eraldamine toimub sama biomaterjalide bakterioloogilise uurimise skeemi järgi.
7.2. Kõhutüüfuse ja paratüüfuse haiguste laboratoorsete uuringute jaoks materjali kogumise kord on määratud SP 3.1.1.2137-06.
7.3. Biomaterjalide kogumise ja mikrobioloogilistesse laboritesse transportimise tehnikat on kirjeldatud dokumendis MU 4.2.2039-05.
7.4. Kõhutüüfuse ja paratüüfuse diagnoosimiseks mõeldud bakterioloogilise uuringu materjal on:
veri;
väljaheited;
uriin;
Patogeene saab eraldada ka:
roseool;
luuüdi;
rinnapiim.
Bakterioloogiliste uuringute materjal bakterikandjate tuvastamiseks vastavalt SP 3.1.1.2137-06 on:
väljaheited;
uriin;
sapi (kaksteistsõrmiksoole sisu).
7.5. Diagnoosi selgitamiseks viiakse läbi läbilõikematerjali uuring.
7.6. Laboratoorseteks uuringuteks bioloogilise materjali kogumine toimub enne etiotroopse ravi algust: meditsiinitöötaja poolt, kes kahtlustab tüüfuse-paratüüfuse infektsiooni; grupi- ja haiguspuhangu haigestumuse korral - Rospotrebnadzori asutuste spetsialistide ja meditsiiniasutuste personali poolt. Haiglasse sattunud patsientidelt võetakse materjal bakterioloogiliseks uuringuks haigla erakorralise meditsiini osakonnas.
7.7. Patsientide või kandjatega (kontaktidega) suhelnud isikutelt koguvad materjali tervishoiuasutuste ja muude organisatsioonide ja asutuste meditsiinitöötajad patsientide tuvastamise kohas.
7.8. Laboratoorsete uuringute jaoks mõeldud biomaterjaliga kaasneb spetsiaalne suund. Materjali edastamine katseisikute endi poolt ei ole lubatud. Kui materjali õigeaegne kohaletoimetamine on võimatu, kasutatakse säilitusaineid ja transpordivahendeid (tabel 1).
8. Bakterioloogiline vereanalüüs
Vereanalüüsi näidustuseks on tüüfuse-paratüüfuse haiguste kahtlus või teadmata päritoluga palavikuline seisund (tundmatu päritoluga palavik), mida täheldatakse 5 või enam päeva (SP 3.1.1.2137-06).
Vere ja toitaine söötme suhe peaks olema 1:10-1:60. Iseseisvalt võetud vereproovide arvu ja võtmise aja määrab raviarst vastavalt MU 4.2.2039-05 teadmata päritoluga palavikule või vastavalt ENSV Tervishoiuministeeriumi MU 04-723/3 ( 1984) tüüfuse-paratüüfuse kahtluse korral. Antibakteriaalseid ravimeid saavatel patsientidel tuleb proove koguda vahetult enne ravimi järgmise annuse manustamist (vastuvõtmist).
Palaviku korral on optimaalne võtta verd kehatemperatuuri tõusu taustal (kuid mitte temperatuuri tipphetkel!). Toitekeskkonnale külvatakse otse patsiendi voodi kõrvale.
Tüüfuse-paratüüfuse haiguste kahtluse korral võib verekultuuriks kasutada Rapoport söödet, 20% sapipuljongit, liha-peptooni puljongit 1% glükoosi lisandiga (100 ml viaalides). Varem kasutatud verekultuurid steriilses destilleeritud (kraanivees). Siiski on eelistatav kasutada spetsiaalset verekultuuri söödet.
Palaviku kõrgusel külvatud vere kogus võib olla 10 ml, hiljem - kuni 20 ml (lastel - kuni 5 ml).
Üle 5 päeva kestva tundmatu päritoluga palaviku puhul tuleks reeglina uurida mitut vereproovi. Vereproovide võtmine veenist toimub vastavalt MU 4.2.2039-05. See on vajalik tõelise baktereemia eristamiseks juhuslikust veresaastumisest veenipunktsiooni ajal (proovi saastumise tõenäosus juhusliku rasu- või higinäärme punktsiooni tõttu on 3%). Sel juhul kasutatakse verekultuuri jaoks kahte söödet: 1) aeroobide ja fakultatiivsete anaeroobide söödet ja 2) kohustuslike anaeroobide söödet (näiteks "topelt" sööde + tioglükooli sööde vastavalt tervishoiuministeeriumi korraldusele NSV Liidu 12.04.85 N 535) või universaalne andmekandja aeroobide ja anaeroobide jaoks.
Eelistatav on kasutada Venemaal kasutamiseks heaks kiidetud tööstuslikult toodetud kandjaid.
Põllukultuure inkubeeritakse 37 °C juures 10 päeva igapäevase vaatlusega. Sel juhul on "topelt" söötmega viaalid kallutatud, pestes söötme tihedat osa.
Kasvumärkide puudumisel 10. päeval antakse eitav vastus.
Kui esineb kasvumärke (hägusus, Rapoport söötme punetus, nähtavate kolooniate ilmumine "topelt" söötme tihedale osale), külvatakse paralleelselt polüsüsivesiku söötmele ja tihedale söötmele Petri tassidel ( vereagar teadmata päritoluga palaviku korral ja Endo sööde tüüfuse paratüüfuse kahtluse korral).
Otsene külvamine polüsüsivesikute söötmele viiakse läbi uuringu aja lühendamiseks, lähtudes eeldusest, et vere kasvatamisel täheldatakse suure tõenäosusega patogeeni monokultuuri kasvu. Selle eelduse kontrollimiseks ja puhaskultuuri eraldamiseks üksikute kolooniate jagamise teel on vajalik paralleelne külvamine Endo söötmele või vereagarile.
Kui nendel söötmetel täheldatakse monokultuuri kasvu, võib arvesse võtta polüsüsivesiku söötme biokeemilisi omadusi. Kultuuri puhtuse kontrollimiseks on vaja mikroskoopiat teha Gramiga värvitud polüsüsivesiku söötmest. Selles etapis on võimalik seadistada ka klaasil aglutinatsioonireaktsioon vastavate aglutineerivate O- ja H-salmonella seerumitega ning anda eelvastus.
Kõhutüüfuse ja paratüüfuse kahtlusega patsientide vere bakterioloogilise uuringu skeem on näidatud joonisel 1.
Joonis 1. Kõhutüüfuse ja paratüüfuse kahtlusega patsientide vere bakterioloogilise uuringu skeem
Joonis 1. Kõhutüüfuse ja paratüüfuse kahtlusega patsientide vere bakterioloogilise uuringu skeem
Teadmata päritolu palavikuga patsientide vere bakterioloogilise uuringu skeem on näidatud joonisel 2.
Joonis 2. Teadmata päritolu palavikuga patsientide vere bakterioloogilise uuringu skeem
Joonis 2. Teadmata päritolu palavikuga patsientide vere bakterioloogilise uuringu skeem
Kultuuri edasist identifitseerimist kultuurilis-morfoloogiliste, ensümaatiliste omaduste ja seroloogiliste tunnuste järgi kirjeldatakse lähemalt vastavates osades.
9. Väljaheidete bakterioloogiline uuring
Väljaheiteproovid võetakse kohe pärast roojamist desinfitseeritud ja põhjalikult pestud anumast, mille põhjale on asetatud paks puhas paber. Materjal kogutakse steriilse anuma kaane külge kinnitatud lusika-spaatliga. Spaatliga anuma puudumisel kasutatakse materjali võtmiseks mis tahes steriilset instrumenti (steriilset puidust spaatlit, traatsilmust, lusikat jne). Patoloogiliste lisandite olemasolul on vaja valida lima, mäda, helbeid sisaldavad, kuid verevabad alad. Vedela väljaheite proovid võetakse suletud reservuaariga steriilse plastmassist Pasteur pipetiga.
Võetud materjali maht peab olema vähemalt 2 g Optimaalne materjal on võtta materjal kaunistatud tooli puhul - pähkli koguses; lahtise väljaheite korral peaks selle kiht konteineris olema vähemalt 1,5-2,0 cm Steriilsesse anumasse pandud materjal toimetatakse laborisse 2 tunni jooksul.
Kui materjali ei ole võimalik 2 tunni jooksul laborisse toimetada, kogutakse see säilitusainesse (transpordisüsteem koos söötmega). Materjali maht ei tohi ületada söötme mahtu.
Väljaheide tuleb söötmes hoolikalt homogeniseerida. Proove võib hoida enne uuringu algust päevasel ajal külmkapis (4–6 °C).
Tüüfuse ja paratüüfuse A, B ja C, samuti teiste ägedate sooleinfektsioonide patogeenide isoleerimiseks kasutatavad transpordisöötmed ja säilitusained on toodud tabelis 1.
Tabel 1
Väljaheidete transpordiks kõige sagedamini kasutatavad transpordivahendid ja säilitusained
|
Keskkonna nimi |
Pakub säilivust |
|
Kolmapäeval Carrie Blair |
kõik enteropatogeenid, sealhulgas kampülobakterid |
|
Kolmapäev Ames |
kõik enterobakterid |
|
Kolmapäev Stewart |
salmonella ja shigella |
|
glütseriini segu |
kõik enterobakterid, välja arvatud yersinia; eelistatud shigella jaoks |
|
fosfaatpuhvri segu |
kõik enterobakterid |
|
boraadi puhverlahus |
kõik enterobakterid |
|
soolalahus |
kõik enterobakterid, sealhulgas kampülobakterid |
Otse pärasoolest rektaalse tampooni abil kogutud väljaheiteproove kasutatakse eelkõige diagnoosi objektiviseerimiseks (MU 4.2.2039-05). Materjali võtavad parameedikud. Spetsiaalne sond määrdumise võtmiseks on reeglina osa transpordisüsteemist. Oluline on märkida, et transpordikeskkonna sattumine pärasoole limaskestale on vastuvõetamatu! Seetõttu tuleks rektaalset tampooni sukeldada transpordivahendisse alles pärast materjali võtmist. Patsiendil palutakse lamada külili, puusad on mao poole tõmmatud ja tuharad peopesade abil lahku. Tampoonisond sisestatakse pärakusse 4-5 cm sügavusele ja seda õrnalt ümber telje pöörates kogutakse pärakrüptidest materjali. Eemaldage ettevaatlikult tampoonisond ja kastke see transpordivahendisse. Tampooni transportimine ilma kandjata ei ole lubatud.
Laboris tehakse väljaheiteproovide inokuleerimine otse tihedale diferentsiaaldiagnostilisele toitekeskkonnale ja paralleelselt rikastussöötmele.
Väljaheidete bakterioloogilise uuringu skeem on näidatud joonisel 3.
Joonis 3. Väljaheidete bakterioloogilise uuringu skeem
Joonis 3. Väljaheidete bakterioloogilise uuringu skeem
Looduslikust väljaheitest valmistatakse suspensioon 0,9% naatriumkloriidi lahuses vahekorras 1:5-1:10, jäetakse 30 minutiks, et suured osakesed settiksid. Pärast seda inokuleeritakse üks tilk supernatanti tiheda toitekeskkonnaga anumatesse ja 1 ml suspensiooni inokuleeritakse rikastussöötmesse (materjali ja söötme suhe peaks olema 1:5).
Säilitusaines (transpordisöötmes) laborisse toimetatud väljaheited tuleb enne nakatamist söötmes hoolikalt homogeniseerida, misjärel inokuleeritakse materjal otse tahkele söötmele ja rikastussöötmele samades vahekordades nagu looduslikud väljaheited.
Rektaalse tampooniga kogutud väljaheiteproove uuritakse sarnaselt säilitusaines manustatud väljaheitega. Tuleb meeles pidada, et rektaalne tampoon sisaldab vähem mikroorganisme võrreldes natiivse väljaheitega, seega tuleks inokulaadi annust suurendada.
S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B ja S. Paratyphi C maksimaalne tuvastamine väljaheites saavutatakse rikastussöötme abil, kuigi haiguse ägeda perioodi patsientidel eraldatakse patogeen sageli otsese inokuleerimisega. Rikastuskeskkonnale inokuleerimine paralleelselt otsese inokuleerimisega on kohustuslik!
Kõiki inokulatsioone inkubeeritakse diferentsiaaldiagnostilisel söötmel temperatuuril 37 °C 18-24 tundi, vismutsulfiitagaril 24-48 tundi.24 tunni pärast külvatakse rikastussöötmest tahkele söötmele (vismut-sulfiitagar või Endo). keskmine). Nendele patogeenidele iseloomulikud kolooniad, mis on kasvanud tihedal söötmel, sõelutakse välja polüsüsivesikute söötmel.
Tuleb märkida, et materjali levitamise tehnika tiheda söötmega plaadi pinnale peaks tagama tüüpilist tüüpi isoleeritud kolooniate kasvu, mida saab kasutada mikroorganismi kultuuriliste omaduste visuaalseks hindamiseks.
Vismuti sulfiitagar (BCA) on eelistatud meetod S. Typhi eraldamiseks. Tüüpilised S. Typhi kolooniad on mustad ja ümbritsetud musta või pruuni metallilise läikega servaga. S. Typhi ei põhjusta aga sageli ICA iseloomulikku mustamist, kui toimub rikkalik kasv, seega tuleks plaadid nakatada, et võimaldada üksiku koloonia kasvu.
Väljaheiteproove saab nakatada Vene Föderatsioonis kasutamiseks heaks kiidetud enterobakterite standardsele selektiivsöötmele. Siiski on S. tymhi isoleerimiseks eelistatud meetod vismutsulfiitagar. Kultuuride edasist identifitseerimist ensümaatiliste omaduste ja seroloogiliste omaduste järgi kirjeldatakse lähemalt asjakohastes jaotistes.
10. Uriini bakterioloogiline uuring
Uriini külvi tehakse diagnoosimiseks alates haiguse esimestest päevadest kuni patsiendi väljakirjutamiseni, samuti bakterikandja tuvastamiseks. Kuna haigusetekitaja tüüfuse ja paratüüfuse eritumine uriiniga toimub perioodiliselt ja lühiajaliselt, tuleb uriinianalüüse korrata 5-7-päevaste intervallidega.
Peaksite rangelt järgima uriini kogumise üldreegleid, mis on sätestatud MU 4.2.2039-05. Olenemata uriini saamise meetodist tuleb see laborisse toimetada 2 tunni jooksul.Äärmuslikel juhtudel võib uriini hoida üle öö külmkapis.
Tuleb meeles pidada, et olenevalt uriini keemilisest koostisest võivad selles olevad bakterid nii ladustamise ajal surra kui ka paljuneda.
Materjali säilivusaja pikenemine võib muuta tulemuse tõlgendamise äärmiselt keeruliseks.
Uriini (või tsentrifuugimise järgse setete) otsenakatamine toimub ilma eelneva rikastamiseta vastavalt ENSV Tervishoiuministeeriumi korraldusele N 535 salmonella, sealhulgas tüüfuse ja paratüüfuse patogeenide jaoks soovitatud tihedale diferentsiaaldiagnostika söötmele. Samal ajal inokuleeritakse natiivne uriin kahekordse kontsentratsiooniga rikastussöötmesse vahekorras 1:1 või uriini sete inokuleeritakse normaalse kontsentratsiooniga söötmesse. Inokulatsioonid asetatakse 18–24 tunniks termostaadi temperatuurile 37 °C ja seejärel inokuleeritakse rikastuskeskkond tihedale diferentsiaaldiagnostika söötmele. Tahkel söötmel kasvatatud kolooniad identifitseeritakse kultuurilis-ensümaatiliste ja seroloogiliste omaduste järgi.
11. Sapi (kaksteistsõrmiksoole sisu) bakterioloogiline uuring
Sapp kogutakse kolme steriilsesse katseklaasi või steriilsesse ühekordsesse anumasse eraldi portsjonitena A, B, C vastavalt MU 4.2.2039-05 ja toimetatakse laborisse.
Viige läbi iga portsjoni (A, B, C) uuring eraldi või valmistage kolmest osast koosnev segu. Proove inokuleeritakse:
tihedatel diferentsiaaldiagnostika kandjatel (ICA, Endo, EMS jne) koguses 0,5 ml;
katseklaasis (pudelis) toitainepuljongiga vahekorras 1:10. Sappi pole vaja rikastussöötmele pookida, kuna sapp ise on hea kasvulava tüüfuse ja paratüüfuse patogeenidele.
Inokuleeritud söödet inkubeeritakse sapijääkidega 37 °C juures.
18-24 tunni pärast uuritakse inokulatsioone tihedal toitainekeskkonnal (24 ja 48 tunni pärast võetakse arvesse kasvutulemusi ICA-l) ning kahtlaste kolooniate uuesti külvamine polüsüsivesikute söötmele.
Toitepuljongist tehakse seemned tihedale diferentsiaaldiagnostika söötmele.
Ülejäänud sapist tehakse otsekülvi negatiivse tulemuse korral korduvad külvid tihedale diferentsiaaldiagnostilisele söötmele 18-24 tunni pärast ning 3., 5., 7. ja 10. päeval.
Kasvanud mikroorganismid identifitseeritakse kultuurilis-morfoloogiliste, ensümaatiliste ja seroloogiliste omaduste järgi.
12. Roseola materjali bakterioloogiline uurimine
Bakterioloogiline uuring ("kraapimine" roseooliga) viiakse läbi täpselt määratletud roseooli juuresolekul. Materjal kogutakse aseptiliselt. Selleks töödeldakse roseooli kohal olevat nahapiirkonda 70% etüülalkoholiga, seejärel pühitakse steriilse 0,9% naatriumkloriidi lahusega niisutatud vatitupsuga ja kuivatatakse steriilse tampooniga.
Uurimistöö materjal (koevedelik) saadakse roosisoola kohal oleva naha skalpelliga skarifitseerimisel. Kahjustatud nahale kantakse 1-2 tilka sapipuljongit või isotoonilist naatriumkloriidi lahust, segatakse väljaulatuva koevedelikuga ja kogutakse Pasteuri pipeti või sarnase ühekordselt kasutatava steriilse seadmega katseklaasi koos ühe vedela rikastusvahendiga (sapiga). puljong, Rapoport sööde jne). Laboris hoitakse inokuleerimist 37 °C juures 18-24 tundi, millele järgneb nakatamine tihedale diferentsiaaldiagnostika söötmele (Endo, EMS, ICA).
13. Luuüdi bakterioloogiline uuring
Teatavasti on kõhutüüfuse diagnoosi laboratoorse kinnituse korral kõige efektiivsem luuüdi bakterioloogiline uuring (tekitaja pookimine 90-95%). Isegi patsientidel, kellel on kerge ja kustutatud kõhutüüfuse vorm, mida on raske kliiniliselt ära tunda, samuti antimikroobsete ravimite võtmise taustal on müelokultuuride inokuleerimine oluliselt kõrgem kui verekultuuride puhul.
Kuid praktikas tehakse luuüdi bakterioloogilist uuringut väga harva, ainult spetsiaalsete kliiniliste näidustuste korral, kui puuduvad muud laboratoorsed andmed, mis kinnitavad kõhutüüfuse või paratüüfuse diagnoosi, tk. see invasiivne protseduur on üsna traumaatiline. Uurimismaterjalide proovide võtmine toimub ainult haiglas vastava spetsialisti juuresolekul.
Materjal bakterioloogiliseks uurimiseks (aspiraat) koguses 0,50-0,75 ml saadakse aseptiliselt rinnaku (käepideme või keha) punktsiooniga ja inokuleeritakse katseklaasi ühe rikastussöötmega (sapipuljong, Rapoport sööde jne).
Kui aspiraati ei ole võimalik kohe pärast punktsioonimist rikastussöötmesse nakata, kogutakse see steriilsesse katsutisse ja saadetakse kohe laborisse, kus teostatakse inokuleerimine rikastussöötmesse. Laboris inkubeeritakse inokulatsioone 37 °C juures 18–24 tundi, millele järgneb nakatamine tihedale diferentsiaaldiagnostika söötmele.
Täiendavad uuringud viiakse läbi, nagu ka muu bioloogilise materjali bakterioloogilisel uurimisel.
14. Toitekeskkond ja reaktiivid
Toitainete loetelu sooleinfektsioonide patogeenide, eriti enterobakterite isoleerimiseks ja tuvastamiseks on ulatuslik ja täieneb pidevalt. Konkreetsete keskkondade valiku määravad suuresti kohalikud majandustingimused ja traditsioonid. Siiski tuleks juhinduda mitmest põhiprintsiibist.
14.1. Kultuurisöötme kirjeldus peaks näitama, et seda saab kasutada mitte ainult Salmonella, vaid ka Salmonella Typhi ja S. Paratyphi A, B ja C tuvastamiseks.
14.2. Eelistada tuleks mainekate tootjate dehüdreeritud söödet otse laboris valmistatud söötmele.
14.3. Iga laboris oleva söötme partii tuleb kontrollida katsetüvedega (sisemine kvaliteedikontroll).
14.4. Kõhutüüfuse ja paratüüfuse haiguste laboratoorseks diagnoosimiseks ning bakterikandjate tuvastamiseks tuleks kasutada Vene Föderatsiooni territooriumil vastavalt kehtestatud korrale kasutamiseks lubatud toitaineid ja reaktiive.
15. Ensümaatiliste omaduste uurimise meetodid
Praeguseks on Enterobacteriaceae perekonna mikroorganismide, sealhulgas tüüfuse ja paratüüfuse patogeenide ensümaatilise aktiivsuse uurimiseks välja töötatud, toodetud ja registreeritud erinevaid kodu- ja välismaiseid diagnostilisi testsüsteeme (lihtsaimast klassikalisest Hiss söötmest katseklaasides ja plaatides kuni automaatsete analüsaatoriteni) . Kui testsüsteemid võimaldavad tuvastada mikroorganismi perekonna tasemel ja tuvastada tüvede ensümaatilise aktiivsuse tunnuseid, siis saab neid kasutada tüüfuse ja paratüüfuse patogeenide tuvastamiseks. Katsesüsteemidega töötamise protseduur on üksikasjalikult kirjeldatud kasutusjuhendis ja seda tuleks rangelt järgida.
16. Patogeenide bioloogilised omadused
Kõhutüüfuse ja paratüüfide A, B ja C tekitajad kuuluvad perekonda Enterobacteriaceae, perekonda Salmonella, enterica liigid, alamliiki I (enterica) ning neil on sellele alamliigile, liigile, perekonnale ja perekonnale iseloomulikud morfoloogilised, kultuurilised ja ensümaatilised omadused.
Perekonna Salmonella liigid enterica esindajad on ajalooliselt välja kujunenud olukorra, kus serovarid ei tähistatud mitte antigeense valemiga, nagu teiste bakterite puhul, vaid haiguste nimetuste (inimeste või loomade), riigi, linna või tänava järgi, kus need eraldati, jne. Nende liiginimede arvestamine on viga, sest neil puudub taksonoomiline staatus. Levinumate Salmonella serovaride nimetused on aga nii tuttavad, et neid on peaaegu võimatu asendada antigeensete valemitega. Seetõttu kasutatakse tänapäevases Kaufman-White skeemis Salmonella enterica alamliigi I tähistamisel liiginimetuse asemel serovari nimetust, kuid see kirjutatakse suure algustähega.
Seega on kõhutüüfuse ja paratüüfuse põhjustajate täisnimetused järgmised:
Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi;
Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi A;
Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi B;
Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi C
Tavapraktikas on võimalik kasutada nimede lühendatud versioone:
Salmonella ser. Typhi või Salmonella Typhi või S. Typhi;
Salmonella ser. Paratyphi A või Salmonella Paratyphi A või S. Paratyphi A;
Salmonella ser. Paratyphi B või Salmonella Paratyphi B või S. Paratyphi B;
Salmonella ser. Paratyphi C või Salmonella Paratyphi C või S. Paratyphi C
16.1. Kultuurilised ja morfoloogilised omadused
Liikuvad gramnegatiivsed vardad ei moodusta eoseid ja kapsleid, fakultatiivsed anaeroobid kasvavad hästi tavalisel toitekeskkonnal.
Lihtsa toitainegariga - kolooniad on kergelt kumerad, sileda serva ja sileda pinnaga, niisked, läikega üle 1 mm.
Diferentsiaaldiagnostika söötmetel (mis sisaldab diferentseeriva ainena laktoosi) - läbipaistev, värvitu või sinakas ning mõnikord roosakas või kolooniakeskkonna värvus (Endo, Ploskirev, EMS ja muud sarnased söötmed).
SS-arapel keskmise värvi kolooniad musta keskpunktiga.
Vismut-sulfitsöötmel on S. Typhi, S. Paratyphi B isoleeritud kolooniad mustad, iseloomuliku metallilise läikega, kolooniaalune sööde on värvitud mustaks. S. Paratyphi A kolooniad on rohekad, söötme värvuselt heledad, õrnad.
S. Paratyphi B (paratüüfuse B põhjustaja) tüved liha-peptoonagaril võivad moodustada piki kolooniate perifeeriat kõrgendatud limaskesta. Limaskesta areneb 2-5 päeva, kui põllukultuure hoitakse toatemperatuuril. See sümptom ei ole püsiv ja diagnostiline.
16.2. Ensümaatilised omadused
Ensümaatiliste omaduste uuring viiakse läbi seoses salmonella ja teiste enterobakterite tuvastamisel ja uurimisel kasutatavate süsivesikute, mitmehüdroksüülsete alkoholide, aminohapete ja muude orgaaniliste ühenditega. Praktilistes laborites kasutatakse soolebakterite perekonda kuuluvate põhiperekondade tuvastamiseks reeglina väikest arvu teste. Salmonella ensümaatiliste omaduste omadused, sealhulgas kõhutüüfuse ja paratüüfuse A, B ja C tekitajad, on esitatud tabelis 2.
tabel 2
Kõhutüüfuse ja paratüüfuse A, B, C patogeenide ensümaatilised omadused
|
substraat |
S. Paratyphi A |
||||
|
Glükoos (gaas) |
Bakterioloogiline meetod hõlmab patsiendilt materjali bakterioskoopiat, patogeeni puhaskultuuri eraldamist ja selle tuvastamist antibiootikumide ja keemiaravi ravimite tundlikkuse määramisega.
Materjali valik bakterioskoopiline uurimine sõltub haiguse väidetavast etioloogiast, haiguse staadiumist, võttes arvesse selle patogeneesi, patogeeni bioloogilisi omadusi ja muid tegureid.
1. Nakkushaiguste korral esineb koos baktereemiaga (tüüfus, salmonelloosi generaliseerunud ja septilised vormid); mis tahes etioloogiaga sepsisega, mida ei põhjusta mitte ainult püogeenne kooki mikrofloora, Pseudomonas aeruginosa, vaid ka selle haruldasemad patogeenid (Serratia Salinaria, mittekäärivad bakterid, anaeroobid, L-vorm streptokokk (Suknevi meetod) ja muud mikroorganismid). juhtudel põllukultuuridele spetsiaalsel toitainekeskkonnal. Tuleb rõhutada, et verest eraldatud patogeenide esinemissageduse ja spektri edukus ja muud patsiendi bioloogilised saladused sõltuvad bakterioloogialabori töötajate eruditsioonist, uudishimulikkusest, visadusest ja visadusest.
2. Tserebrospinaalvedelik (mädane meningiit; tuberkuloosne meningiit pikaajalise kultiveerimisega (rohkem kui kuu) tuberkuloosibakterite isoleerimiseks spetsiaalsel toitainekeskkonnal).
3. Röga (äge kopsupõletik ja trahheobronhiit, tuberkuloos, läkaköha, katk, kõhutüüfuse haruldased vormid (pneumotüüf), legionelloos, respiratoorne mükoplasmoos ja klamüüdia).
4. Lima, mäda mandlitest (streptokoki ja stafülokoki tonsilliit).
5. Katte ja lima mandlitest, kurgust ja ninast, eritis konjunktiivist, suguelunditest (difteeria).
6. Nina limaskesta kraapimine (pidalitõbi).
7. Eritumine ninast ja orofarünksist (sinuiit, ozeena, rinoskleroom).
8. Tursevedelik, kahjustatud lihaste tükid, nekrootilised kuded (anaeroobsed infektsioonid); haavaeritis (botulism; vajadusel teetanus).
9. Suurenenud lümfisõlmede punkt (tuberkuloos, toksoplasmoos).
10 Karbunkuli sisu ja mädanenud lümfisõlmede punkt (katk, tulareemia, septikopeemia, siberi katk).
Bakterioloogilised uuringud eriti ohtlike infektsioonide (katk, tulareemia, brutselloos, koolera (mille puhul uuritakse ainult väljaheiteid (!)) korral viiakse läbi erirežiimiga laborites, mis välistavad oma töötajate eneseinfektsiooni võimaluse bakterikultuuridega töötamisel ja patogeenide levik väljaspool neid laboreid.
Seroloogilised uuringud. Need toodi kliinikusse mõnevõrra hiljem kui R. Kochi pakutud bakterioloogiline meetod. 1896. aastal avastas F. Vidal, et 1. haigusnädala lõpuks omandas kõhutüüfusehaigete vereseerum võime aglutineerida kõhutüüfuse tekitajat tüüfuse batsilli (Vidali positiivne reaktsioon). Nakkushaiguste polümikroobse etioloogia tõttu hakkasid nad pärast Vidali avastamist kasutama ka seerumi aglutiniinide tiitrite määramist mitut tüüpi patoloogilisest materjalist eraldatud bakteritele (autovidaalne reaktsioon) ja kontrollima nende dünaamikat sõltuvalt haiguse staadiumist. haigus. Ühe isoleeritud bakteritüübi kõrgeimad aglutiniinide tiitrid viitavad selle suuremale etioloogilisele osalemisele haiguse arengus.
Juba alguses Vidali reaktsiooni rakendused kliinikus täheldati, et aglutiniinide puudumisel veres võivad tekkida kõige raskemad vormid, näiteks kõhutüüfus (negatiivne Vidali reaktsioon), mis näitab selle meetodi suhtelist diagnostilist väärtust nii kõhutüüfuse kui ka tüüfuse korral. muud nakkushaigused. Hiljem asendati see tundlikumate seroloogiliste meetoditega. Kuid Vidali avastuse prioriteetne väärtus jääb igaveseks.
Praegu seroloogiliseks diagnoosimiseks bakteriaalsete infektsioonide korral kasutatakse tundlikumaid meetodeid, kui bakteriaalne antigeen adsorbeerub erütrotsüütide pinnale (erütrotsüütide diagnostika1). Nii töötati välja põhimõtteliselt uued seroloogilised testid: otsene (TPHA) ja kaudne hemaglutinatsioon (RIHA). Neid kasutatakse laialdaselt paljude bakteriaalsete, viiruslike ja muude infektsioonide (tüüfus, salmonelloos, šigelloos, brutselloos, tulareemia jne) seroloogiliseks diagnoosimiseks. Sademereaktsioon säilitab oma diagnostilise väärtuse teatud haiguste puhul (botulism ja siberi katk – Ascoli reaktsioon selle diagnoosimiseks loomadel). Serodiagnostikas kasutatakse praegu laialdaselt prantsuse teadlaste Bordet ja Zhangu (süüfilis, gonorröa, brutselloos, toksoplasmoos, tuberkuloos, pidalitõbi, malleus) 1901. aastal välja pakutud komplemendi sidumise reaktsiooni (RCC). RSK-l on suurim tähtsus viirusnakkuste (gripp, muud ägedad hingamisteede viirusnakkused, herpes, entsefaliit, mumps, psittakoos jne), aga ka paljude riketsiooside serodiagnostikas.
TUNNI EESMÄRK: tea mikroorganismide kasvatamise põhimõtted, toitekeskkonnad, nende klassifikatsioon; mikrobioloogias ja meditsiinis kasutatavad steriliseerimis- ja desinfitseerimismeetodid; nakkushaiguste diagnoosimise bakterioloogilise meetodi etapid.
suutma kasutada seadmeid bakterite (aeroobid ja anaeroobid) kultiveerimiseks, valida vastavalt konkreetsetele ülesannetele vahendid, steriliseerimise ja desinfitseerimise viis, viia läbi nakkushaiguste diagnoosimise bakterioloogilise meetodi 1. etapp (katsematerjali inokuleerimine tihedale ja vedelale pinnale). toitainekeskkond aeroobsete mikroorganismide puhaskultuuride eraldamiseks).
1. Küsimused iseõppimiseks:
1. Toitekeskkonna koostis ja nõuded
2. Toitekeskkonna klassifikatsioon
3. Aseptiline ja antiseptiline
4. Desinfitseerimine, meetodid ja desinfitseerimise efektiivsuse kontroll
5. Steriliseerimine, meetodid, seadmed ja steriliseerimise viisid
6. Steriliseerimise efektiivsuse määramise meetodid
7. Liik, tüvi, koloonia, mikroorganismide puhaskultuur
8. Mikroorganismide puhaskultuuride eraldamise meetodid
9. Bakterioloogiline meetod nakkushaiguste diagnoosimiseks. Aeroobide eraldamise bakterioloogilise meetodi 1. etapi eesmärk ja järjestus
10. Mikroorganismide inokuleerimise tehnika vedelale ja tahkele toitekeskkonnale
11. Anaeroobsete mikroorganismide kasvatamise tunnused. Anaeroobsete bakterite kasvatamiseks kasutatavad seadmed ja seadmed
2. Turvaküsimused:
1) Kirjutage välja nõuded toitekeskkonnale
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
2) Kirjutage välja toitekeskkonna klassifikatsioon
a) konsistentsi järgi (näidetega märkige agar-agari kontsentratsioon): _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
b) vastavalt sihtotstarbele (defineeri, too näiteid)
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
3) Kirjutage välja steriliseerimismeetodid
a) kõrgete temperatuuride kasutamine ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
b) ilma kõrgeid temperatuure kasutamata _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4) Loetlege steriliseerimiseks vajalikud seadmed ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
5) Kirjuta vihikusse a) steriliseerimisrežiimi kontrollimise meetodid
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
b) söötme steriilsuse jälgimise meetodid ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
c) instrumentide, sidemete, õmblusmaterjali jms steriilsuse kontrollimise meetodid. ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
6) Loetlege kõik aeroobide kasvatamise meetodid
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
7) Loetlege kõik anaeroobide kasvatamise meetodid
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
8) Uurige bakterioloogilise diagnostika meetodi skeemi, nimetage meetodi etapid
Kirjutage välja bakterioloogilise uurimismeetodi eesmärk ja skeem
BAKTERIOLOOGILISE MEETODI EESMÄRK
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
BAKTERIOLOOGILISE MEETODI SKEEM
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tutvuge toitainesöötmega ja täitke tabel "Toitekeskkond".
Täitke tabel "Steriliseerimise põhimeetodid"
| Steriliseerimise meetod | Varustus | Steriliseerimisrežiim: temperatuur, rõhk, ühekordne või fraktsionaalne (mitu korda) jne. | Töökindlus: täielik steriliseerimine või elujõulised mikroorganismid (eosed, viirused) jäävad alles | Steriliseeritavad materjalid |
| 1. Süütamine | ||||
| 2. Keetmine | ||||
| 3. Auruga steriliseerimine rõhu all oleva auruga | ||||
| 4. Auruga steriliseerimine voolava auruga | ||||
| 5. Õhu steriliseerimine (kuiv kuumus) | ||||
| 6. Pastöriseerimine | ||||
| 7. Ioniseeriv kiirgus | ||||
| 8. UV-kiirgus | ||||
| 9. Filtreerimine | ||||
| 10. Gaasi steriliseerimine | ||||
| 11. Keemilised lahused |
alustekst
Toitekeskkonna koostis ja nõuded
Toitekeskkonnad on vajalikud mikroorganismide puhaskultuuride saamiseks, nende morfoloogia ja füsioloogia tunnuste uurimiseks, samuti mikroorganismide säilitamiseks puhaskultuuride kujul labori- ja tootmistingimustes.
Toitekeskkond peab vastama järgmistele nõuetele:
1. Toiteväärtus (täisküllus) - mikroobide elutegevuseks vajalike tegurite sisaldus - süsiniku, lämmastiku, väävli allikad, energiaallikad, vajalikud anorgaanilised ioonid mikroorganismidele imendumiseks kättesaadaval kujul.
2. 0,85% NaCl tekitatud isotoonilisus (soolade kontsentratsioon toitainekeskkonnas peaks vastama nende kontsentratsioonile mikroobirakus).
3. Mitmete biokeemiliste parameetrite optimaalsed väärtused: vesinikioonide kontsentratsioon (pH vahemik 4,5-8,5, tavaliselt 7,2-7,4), redokspotentsiaal (Eh anaeroobide puhul - madal 0,0120-0,060 V, aeroobide puhul - kõrge üle 0,080 V), osmootne rõhk.
4. Piisava õhuniiskuse (tiheda keskkonna puhul vähemalt 60%), kuna mikroobid toituvad difusiooni- ja osmoosiseadustest.
5. Teatav viskoossus (ainete difusiooniks kõige optimaalsem).
6. Läbipaistvus, et visualiseerida bakterite kasvu.
7. Steriilsus.
Kultuurisöötme komponendid
Valgud on mikroorganismide lämmastikuallikaks, kuid enamik mikroobe ei suuda omastada natiivset valku, seetõttu kasutatakse valgu happelise ja ensümaatilise lõhustamise saadusi: peptoon, kaseiin. Kunstliku toitekeskkonna algkomponentideks on lihavesi, alusele lisatakse ka kaseiini happelist ja ensümaatilist hüdrolüsaati, peptooni ning naatriumkloriidi. Lihavesi sisaldab mineraalaineid, süsivesikuid, vitamiine. Toiduhappekaseiin on piimatööstuse jäätmed, sisaldab täielikku aminohapete komplekti ja seda iseloomustab kõrge toiteväärtus. Peptoon on valkude mittetäieliku seedimise saadus, mis saadakse liha- või kalatoodete või piimakaseiini tootmise jääkainete ensümaatilisel või happelisel hüdrolüüsil. See sisaldab väheses koguses albumoose, peptoone ja aminohapete polüpeptiide, nende koostis sõltub valgu lõhustumise sügavusest. Peptoon on helekollane pulber, vees hästi lahustuv, kuumutamisel ei hüübi. Seda kasutatakse lämmastiku ja süsiniku allikana.
Tihe toitainekeskkond valmistatakse vedelatest, lisades hermeetiku. Agar-agarit kasutatakse tavaliselt hermeetikuna. Agar-agar - toode, mis saadakse merevetikatest, on kollakas pulber või plaadid, sisaldab suure molekulmassiga polüsahhariide, ei lagune enamiku mikroorganismide poolt, ei hävi autoklaavimisel, ei muuda söötme toiteväärtust, ei inhibeeri mikroobide kasvu. See on võimeline moodustama geele vees, sulades temperatuuril 100 ° C ja tihenedes temperatuuril 45 ° C ja alla selle, mida mikroorganismid ei kasuta toitaine substraadina. Mitmed sulamis- ja tahkumistsüklid ei mõjuta agari võimet moodustada geeli, seega saab agarisöötme mitu korda steriliseerida.
Toitekeskkonna koostis sisaldab ka verd, seerumit, anorgaanilisi sooli. Kõik toitainekeskkonnad sisaldavad reeglina 0,5% naatriumkloriidi, mis vastab keskkonna isoosmootsetele tingimustele, mis on mikroobide eluks optimaalsed. Mineraalelementide ülesanne mikroobide ainevahetuses on peamiselt erinevate ensüümide aktiveerimine. Lisaks osalevad anorgaanilised ioonid (peamiselt Na + ja K +) ainete transportimisel läbi rakumembraanide, valgusünteesi reguleerimises.
Taastavad ained. Anaeroobsete mikroorganismide kasvatamiseks mõeldud söötmetele lisatakse redutseerivaid aineid, et alandada redokspotentsiaali (Eh) ja tasakaalustada seda optimaalsel tasemel. Eh on lahuse elektronide annetamise või vastuvõtmise võime mõõt. Anaeroobide kasvatamisel kasutatakse redutseerivate ainetena tavaliselt naatriumtioglükolaati (0,1%), tsüsteiini (0,1%), askorbiinhapet (0,1%).
Süsivesikud, mitmehüdroksüülsed alkoholid, indikaatorid. Süsivesikud on enamiku heterotroofsete mikroorganismide jaoks parim süsinikuallikas. Need on osa diferentsiaaldiagnostikast, mis on loodud mikroobide biokeemiliste omaduste määramiseks.
Toitekeskkonna koostis sisaldab lisaks süsivesikutele ja mitmehüdroksüülsetele alkoholidele mitmesuguseid näitajad, enamasti happe-aluseline. Söötme värvuse muutus mikroorganismide inokuleerimise ajal näitab happe või leelise moodustumist mikroorganismide ensümaatilise aktiivsuse käigus. Indikaatoritena kasutatakse tavaliselt neutraalpunast, bromotümoolsinist, Kongo punast, rosoolhappe ja vesisinise segu (BP), Andrede indikaatorit.
Värvained. Bakterioloogilises praktikas kasutatakse laialdaselt värvainete võimet kergesti ja pöörduvalt muutuda värvilisest vormist redutseeritud (värvitu) vormiks, eelkõige selleks, et eristada laktoosi lagundavad bakterid laktoosnegatiivsetest. Selle protsessi tulemusena moodustavad laktoospositiivsed bakterid söötmel värvilisi kolooniaid, laktoosnegatiivsed aga on värvitud. Kõige sagedamini kasutatavad värvained, mis on toitainekeskkonna osa, on aluseline fukssiin, metüleensinine ja eosiin.
Inhibiitorid. Patogeensete bakterite esinemise uurimisel on vaja pärssida kaasneva mikrofloora kasvu. Sel eesmärgil kasutatakse erinevaid inhibiitoreid. Gramnegatiivsete mikroorganismide inhibiitoritena sisaldab söötme koostis naatrium- ja kaaliumtetrationaati, kaaliumtelluriiti, talliumatsetaati, talliumsulfaati, naatriumseleniiti. Grampositiivsete mikroobide kasvu pärssimiseks kasutatakse aniliinvärve: briljantrohelist, kristallvioletset, etüülvioletti, aniliinsinist. Sapp ja sapisoolad on osa patogeensete enterobakterite kasvatamiseks mõeldud selektiivsöötmest. Ploskirevi söötme osaks on sapi leeliselise hüdrolüüsi tulemusena saadud sapphapete segu. Välismaal kasutatakse selektiivse söötme osana üksikute sapphapete, peamiselt naatriumdeoksükolaadi, sooli.
Kuiv toitainekeskkond. Toitekeskkonna valmistamine on bakterioloogialabori töö üks kriitilisemaid valdkondi. Sellega seoses toodab biotööstus mikroorganismide kasvatamiseks erinevatel eesmärkidel standardset konserveeritud kuivtoitekeskkonda. Need on hügroskoopsed pulbrid, mille niiskusesisaldus on kuni 10%. Valmistage kandja ette vastavalt etiketil olevatele juhistele. Koostise püsivus, söötme standardsus, töö lihtsus ja mugavus, transportimise ja ladustamise lihtsus on kuiva toitainekeskkonna suured eelised. Pärast sobiva pH määramist sööde keedetakse, filtreeritakse, selitatakse, valatakse viaalidesse, katseklaasidesse ja steriliseeritakse. Arvestada tuleb sellega, et pärast steriliseerimist muutub keskkond happelisemaks.
Bakterioskoopilise meetodi olemus: mikroobide tuvastamine uuritavas materjalis; nende morfoloogiliste ja tooniliste omaduste uurimine, asukoha olemus bakterioloogilises äigepreparaadis vaateväljas.
Täitmise tehnika. Patsiendilt saadud materjali uuritakse visuaalselt, valitakse osa, milles haiguse põhjustaja (lima tükid, mädased punnid) on suurima tõenäosusega tuvastatav. Seda kantakse slaidile (mõnikord materjal eelemulgeeritakse soolalahuses, harvem tsentrifuugitakse). Tilk jaotatakse üle klaasi, kuivatatakse ja fikseeritakse. Pärast seda määritakse määrdumine ja preparaati vaadatakse mikroskoobi all. Tavaliselt on määrdumine grammivärviga. Mõnikord kasutatakse kõige õrnemalt üht lihtsat värvimismeetodit, seejärel värvitakse preparaat ühe värvainega (näiteks meningokokkinfektsiooni, koolera diagnoosimisel).
Vajadusel kasutatakse spetsiaalseid kompleksvärvimismeetodeid, näiteks Burri-Ginsi meetodit kapslite mikroorganismide tuvastamiseks või Ziehl-Neelseni meetodit happekindlate bakterite esinemise tuvastamiseks. Mõnel juhul (eriti mikroorganismide motoorse aktiivsuse uurimisel) valmistatakse "rippuva tilga" ja "purustatud tilga" preparaate ning mikroskoobitakse värvimata baktereid.
Bakterioskoopilise meetodi eelised: teostamise lihtsus, kiire tulemuste saavutamise võimalus, tehniline ja majanduslik juurdepääsetavus.
Meetodi puudused: mikroorganismide tüübi määramiseks ei piisa sageli selle morfoloogiliste omaduste määramisest, kuna need on sugulasliikide esindajatel identsed. Lisaks muutuvad iseloomuliku morfoloogiaga bakterid sageli, eriti antibiootikumide toimel, ja muutuvad tundmatuks; lõpuks võib patogeenide kontsentratsioon uuritavas materjalis olla äärmiselt madal ja siis on neid raske avastada.
Eespool öeldut silmas pidades kasutatakse bakterioskoopilist meetodit harva ainsa ja lõpliku viisina haiguse etioloogia kindlakstegemiseks. Sagedamini kasutatakse seda suunava, esialgsena ja mõne nakkushaiguse diagnoosimisel ei pakuta seda üldse.
Kuidas mõista orienteerumist ja eeltööd? See kehtib arsti ja bakterioloogi kohta. Arst, saades esialgse vastuse (positiivne või negatiivne), kasutab saadud teavet suuremal või vähemal määral edasistes uuringutes kuni bakterioloogilise diagnostika meetodi lõpptulemuse saamiseni. Pärast ligikaudse teabe saamist kahtlustatava patogeeni, selle kontsentratsiooni kasutatud materjalis ja kaasneva mikrofloora olemasolu kohta määrab bakterioloog materjali töötlemise ja patogeeni puhaskultuuri eraldamise meetodid, valib toitesöötme järgnevaks kasvatamiseks.
Bakterioloogiline meetod
Meetodi olemus seisneb mikroobi - patogeeni puhaskultuuri eraldamises patoloogilisest materjalist, selle morfoloogiliste, tooniliste, kultuuriliste, biokeemiliste, seroloogiliste omaduste üksikasjalik uurimine eesmärgiga patogeeni hiljem identifitseerida. Bakterioloogilise uurimismeetodi rakendamisel eristatakse 4 etappi.
A. Võttes arvesse bakterioskoopilise uurimise käigus saadud andmeid, valitakse välja kõige tõhusam toitainekeskkond, millel on suurima tõenäosusega võimalik saada väidetavate mikroobide - patogeenide - kultuuri kasvu. .
B. Katsematerjali külvatakse mitmele toitekeskkonnale: vedel ja tahke, universaalne, valik-selektiivne, diferentsiaaldiagnostika. Samal ajal toimub külv tiheda toitainekeskkonnaga Petri tassidele löögiga bakterioloogilise silmusega, et tagada üksteisest eraldatud mikroobide kolooniate kasvu (võite kasutada ka Drygalsky meetodit või mõnda muud mikroorganismide kultuuride eraldamise meetod).
A. Uuritakse toitainekeskkonnas kasvatatud mikroorganismide kultuurilisi omadusi; valitakse välja kahtlased kolooniad. Tuleb rõhutada, et kahtlaste kolooniate valimine on töö kõige olulisem ja raskem etapp. See põhineb eelkõige mikroobikolooniate iseloomulike tunnuste määramisel, kuid sageli ei võimalda see eristada üksikute liikide mikroobikolooniaid ning lisaks on vaja uurida kahtlaste kolooniate äigepreparaadi mikroobide morfoloogiat, mikroorganismide kasvuomadusi. diferentsiaaldiagnostika kandjad jne. Bakterite puhaskultuuride eraldamist ja nende uurimist saab läbi viia eelokuleerimisega vedelatele akumulatsioonisöötmetele, kuid sel juhul kulub täiendav uurimisaega.
B. Kahtlastest kolooniatest valmistatakse bakterioloogiline äigepreparaadi, mis värvitakse grammi järgi ja mikroskoopiliselt (mikroorganismide identsus mikroskoopilise uurimise käigus 1. etapis uuritutega tuvastatakse). C. Ülejäänud kahtlasest kolooniast kantakse kultuur kaldus liha-peptoonagarile (võib kasutada ka muud toitainekeskkonda, millel on oodata isoleeritud mikroorganismide head kasvu). Eesmärgiks on mikroobi – haiguse väidetava põhjustaja – puhaskultuuri kuhjumine, sest. uuringu järgmises etapis on vaja palju mikroobset massi.
Kavandatavat patogeeni uuritakse sahharolüütiliste omaduste (pookimine toimub kirjul söötmel, Olkenitsky, Resseli söötmetel jne), proteolüütilise aktiivsuse (inokuleerimine želatiinile, piimale Tukajevi järgi, indooli ja vesiniksulfiidi moodustumise määramine kasvu ajal liha-peptoonpuljong). Uuritakse isoleeritud kultuuride tundlikkust antibiootikumide suhtes (sagedamini standardsete paberketaste meetodil, harvemini seerialahjenduste meetodil). Serotüpiseerimine viiakse läbi aglutinatsioonireaktsioonis klaasil koos rühma- ja tüüpiliste diagnostiliste seerumitega; faagi tüpiseerimine standardsete diagnostiliste bakteriofaagidega. Mõnel juhul uuritakse tuvastamiseks bakterite patogeensuse tegureid.
Arvesse võetakse läbiviidud uuringute tulemusi. Mikroorganismides tuvastatud omaduste (morfoloogilised, toonilised, kultuurilised, biokeemilised, seroloogilised jne) võrdluse põhjal tehakse kindlaks mikroobid. Lõplik vastus antakse koos bakterioloogilise uuringu tulemustega, mis näitavad patogeeni tüüpi (mõnikord selle serotüüpi, biovari, faagitüüpi) ja tundlikkust antibiootikumide suhtes.
Üsna sageli eelneb vastuse väljastamisele usaldusväärsete tulemuste saamiseks bioloogilised, allergoloogilised või muud uurimismeetodid.
Bakterioloogilise diagnostika meetodi eelised: uurimistulemuste kõrge usaldusväärsus; võimalus saada täiendavaid andmeid isoleeritud patogeenide tundlikkuse kohta antibiootikumide suhtes; epidemioloogiliste uuringute läbiviimise võimalus.
Meetodi puuduste juurde võib hõlmata uuringu kestust (vähemalt 4-5 päeva), samuti selle kasutamise võimatust juhtudel, kui patogeenid (nt riketsia, klamüüdia) ei kasva kunstlikul toitainekeskkonnal.
bioloogiline meetod
Mõnel juhul kasutatakse nakkushaiguste diagnoosimise optimeerimiseks bioloogilist meetodit (biotesti), mis hõlmab laboriloomade nakatamist. Sel juhul võivad teadlasel olla erinevad eesmärgid:
Haiguse kliinilise ja patoanatoomilise pildi reprodutseerimine (näiteks teetanuse, leptospiroosi diagnoosimisel);
Patogeeni puhaskultuuri eraldamine lühikese aja jooksul (pneumokokkinfektsiooni diagnoosimisel);
Patogeeni virulentsuse ja patogeensuse määramine (tuberkuloosi diagnoosimisel);
Toksiinide tüübi ja tüübi määramine (botulismi diagnoosimisel)
Nakkushaiguste diagnoosimiseks kasutatakse erinevaid loomi. Nende valiku määrab liikide vastuvõtlikkus erinevatele etioloogilistele teguritele. Näiteks on hiired vastuvõtlikud pneumokokkinfektsioonile, siberi katkule, teetanusele; merisead - tuberkuloosi, brutselloosi, tulareemia patogeenidele; küülikud - stafülokokkidele, streptokokkidele, botulismile. Uuringusse valitakse ainult teatud vanuses ja kehamassiga terved loomad.
Enne materjali sissetoomist loomad fikseeritakse. Väikeloomi peab katse läbiviija, suurte loomade puhul kasutatakse spetsiaalseid seadmeid. Nakatunud materjali süstekohta töödeldakse alkoholi või joodiga. Nakatunud materjali manustatakse subkutaanselt, kutaanselt, intravenoosselt, intraperitoneaalselt, intratserebraalselt jne, olenevalt uuritava haiguse patogeneesi tunnustest.
Kell naha meetod infektsioonid lõikavad villa eelnevalt läbi, karbivad nahka ja hõõruvad seejärel materjali sellesse.
Subkutaanne meetod: loomade nahk püütakse volti, eelistatavalt pintsettidega, nõel torgatakse poolenisti, pärast süstimist kantakse peale alkoholiga vatitups ja nõel eemaldatakse.
Intramuskulaarne meetod: materjal süstitakse tagajäseme ülemise osa lihaskoesse.
Intraperitoneaalne meetod: looma hoitakse tagurpidi, et mitte vigastada soolestikku. Süst tehakse alakõhus, keskjoone küljel. Kõhuseina läbistatakse tõmbleva liigutusega, süstal on täisnurga all.
Intravenoosne meetod: hiirtele, rottidele süstitakse materjali - sabaveeni või intrakardiaalsesse. Küülikule süstitakse - kõrva veenidesse, mis paiknevad pindmiselt ja on selgelt nähtavad (parem on torgata välisveen). Pärast süstimist kinnitatakse süstekoht alkoholiga vatiga, et vältida verejooksu. Intrakardiaalse infektsiooniga merisigadele süstitakse nõelaga südame "šoki" kõrgusel roietevahelisse ruumi. Kui nõel on õigesti sisestatud, ilmub süstlasse veri.
Tööriistade ja materjalide ettevalmistamine: süstlad, skalpellid, nõelad steriliseeritakse keetmise teel. Süstlasse tõmmatakse materjal (natuke rohkem kui sisenemiseks vajalik), keeratakse vertikaalselt üles, kaetakse nõel steriilse vatiga ja surutakse kolviga õhumullid süstlast välja. See manipuleerimine viiakse läbi desinfitseerimislahusega.
Toksiini (botuliin, siberi katk) toimel tekkinud infektsioonide diagnoosimisel asetatakse oletatavasti patogeeni ja toksiine sisaldav materjal soolalahusesse, seejärel filtreeritakse läbi talkiga hõõrutud paberfiltri (absorbeerib toksiini hästi). Tundlikud loomad nakatatakse filtritampooniga. Mõnel juhul, kui haiguse patogenees on tingitud patogeeni enda patogeensetest omadustest, nakatatakse loomi mikroobisuspensiooniga.
Nakatunud valged hiired märgistatakse ja asetatakse spetsiaalsetesse klaaspurkidesse; need on kinnitatud sildiga, mis näitab nakatumise kuupäeva ja mikroorganismi tüüpi, millega tööd tehti. Samamoodi allkirjastatakse puurid nakatunud küülikute või merisigadega. Loomi jälgitakse. Surma korral avatakse need kohe.
Enne valgete hiirte lahkamist surmatakse loomad eelnevalt eetri aurudega. Hiired kastetakse korraks desinfitseerimislahusesse ja kinnitatakse seejärel käppade abil kõhuga küvetti. Märgitakse väliste patoloogiliste muutuste olemasolu või puudumist. Naha sisselõige tehakse pikisuunas häbemeluust alalõualuuni ja põiki jäsemete suunas. Märgitakse muutusi nahakoes ja lümfisõlmede seisundis. Viimastest teha määrded-jäljed. Rinnaõõne uurimiseks eemaldatakse rinnaku, lõigates kääridega mõlemalt poolt ribisid. Pärast välist läbivaatust lõigatakse südame tükid ära ja asetatakse BCH-i. Külv toimub otse MPA määrdumistele-jäljed südamest, kopsudest.
Kõhuõõs avatakse, välise läbivaatuse käigus märgitakse siseorganite seisund (suurus, värvus, konsistents, mädaste fookuste olemasolu). Kas põllukultuuride maksa, põrna ja määrdumine prindib.
Tööd tehakse steriilsete instrumentidega, pärast iga oreli võtmist lastakse pintsetid ja käärid piirituseklaasi ja põletatakse.
Pärast lahkamist valatakse surnukeha ja küvett, kus lahkamine tehti, ööpäevaks desinfitseerimisvahendiga.
Põllukultuure inkubeeritakse 24 tundi (vajadusel kauem) kl
t 37 umbes C. Seejärel uuritakse, eraldatakse patogeeni puhaskultuur ja tehakse bakterioloogilisel meetodil identifitseerimine.
Meetodi eelised: saadud tulemuste usaldusväärsus, pole vaja keerukaid seadmeid.
Puudused: kõrge hind, piiratud kasutamine, nakkusoht.
Sarnane teave.