ELISA on kaasaegne laborianalüüs, mis otsib verest spetsiifilisi antikehi (või antigeene) konkreetsete haiguste vastu, et tuvastada mitte ainult haiguse etioloogiat, vaid ka haiguse staadiumi.
- mis tahes nakkushaiguse spetsiifiliste antikehade otsimine;
- mis tahes nakkushaiguste antigeenide otsimine;
- patsiendi hormonaalse seisundi uurimine;
- sõeluuring autoimmuunhaiguste esinemise suhtes.
Nagu igal laboratoorse diagnostika meetodil, on ka ELISA-l oma eelised ja puudused. Meetodi eelised hõlmavad järgmist:
- meetodi kõrge spetsiifilisus ja tundlikkus (üle 90%);
- võime määrata haigust ja jälgida protsessi dünaamikat, see tähendab antikehade arvu võrdlemist erinevatel ajaperioodidel;
- selle uurimistöö kättesaadavus ja kiirus;
- mitteinvasiivne materjali kogumise meetod, mitte uurimine;
Meetodi puuduseks on asjaolu, et analüüsi käigus on võimalik tuvastada mitte haiguse tekitajat, vaid ainult immuunvastust sellele (antikehad).
ELISA meetodi olemus
ELISA-d on mitut tüüpi: otsene, kaudne, blokeerimismeetod, konkureeriv. Kuid praktikas kasutatakse kõige sagedamini heterogeenset ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi ehk ELISA-d.
Ensüümi immuunanalüüsi aluseks on antigeeni ja antikeha immuunreaktsioon immuunkompleksi moodustumisega, mille tulemusena muutub antikehade pinnal olevate spetsiifiliste märkide ensümaatiline aktiivsus.
Põhimõtteliselt võib selle protsessi jagada mitmeks etapiks:
- testsüsteemi tableti süvendite pinnal on konkreetse patogeeni puhastatud antigeen. Loomavere seerumi lisamisel tekib selle antigeeni ja soovitud antikeha vahel spetsiifiline reaktsioon;
- Järgmisena lisatakse süvendisse spetsiaalne kromogeen (konjugaat, mis on märgistatud peroksidaasiga). Toimub ensümaatiline reaktsioon, mille tulemusena tekib plaadi süvendis värviline aine. Selle värvi intensiivsus sõltub looma seerumis sisalduvate immunoglobuliinide (antikehade) hulgast;
- Seejärel hinnatakse tulemust. Mitmekanalilise spektrofotomeetri abil võrreldakse uuritava materjali optilist tihedust kontrollproovide optilise tihedusega ning tulemusi töödeldakse matemaatiliselt. Antikehade hulk patsiendis sõltub otseselt antud süvendi optilise tiheduse kõrgusest.
Tuleb meeles pidada: iga testimissüsteemi jaoks töötatakse välja individuaalsed näitajad tulemuste, normaalsuse ja patoloogia näitajate registreerimiseks (“referentsväärtused”). Seda tuleb iga konkreetse uuringu tulemuste hindamisel arvesse võtta.
Ühe labori tulemuste tõlgendamine teise labori “referentsväärtuste” alusel on vale. Samuti on vale võrrelda erinevate laborite tulemusi omavahel.
Konkreetsete infektsioonide tulemuste hindamisel on oluline tuvastatud antikehade klass ja nende kogus. Sellest ei sõltu mitte ainult nakkuse etioloogia küsimus, vaid ka haiguse eeldatav staadium (äge, krooniline), samuti aktiivse infektsiooni (äge või kroonilise ägenemine) olemasolu uurimise ajal.
Milline on antikehade ilmumise ligikaudne ajavahemik?
Esimesed antikehad on IgM. Neid saab tuvastada 1-3 nädalat pärast võimalikku nakatumist, mis iseloomustab nakkusprotsessi ägedat faasi. Teine olukord IgM-antikehade ilmnemisel on kroonilise protsessi ägenemine. IgM ringleb keskmiselt umbes 3 kuud, seejärel kaob nende hulk järk-järgult. Kuid mõnel patsiendil võib IgM-i jälgi tuvastada 1-2 aasta jooksul pärast nakatumist.
Alates 4. nädalast pärast nakatumist hakkavad tekkima IgG antikehad. Enamiku infektsioonide korral tõuseb nende tiiter järk-järgult maksimumini erinevatel aegadel (keskmiselt 1,5-2 kuu pärast), siis jääb tiiter madalale tasemele ja näitab immuunsust. Mõne haiguse korral ei ole IgG tase kõrge.
Antikehade tuvastamise võimalused
- IgM antikehade isoleeritud tuvastamine viitab primaarse infektsiooni olemasolule.
- IgM ja IgG samaaegne tuvastamine veres on tüüpiline primaarsele infektsioonile eelneva 2-3 kuu jooksul, samuti kroonilise haiguse ägenemise ajal.
- Isoleeritud IgG tuvastamine võib viidata nii haiguse immuunsusele kui ka kroonilisele infektsioonile. Teises olukorras on oluline nii antikehade hulk (tiiter) kui ka selle tiitri muutumine ajas. Tavaliselt viiakse uuringud läbi 2-4-6-nädalaste intervallidega.
ELISA analüüs (ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs) on kaasaegne diagnostiline protseduur, mille eesmärk on tuvastada veres spetsiifilised antikehad mitmete haiguste patogeenide vastu, määrata kindlaks patoloogia arengustaadium ja selle etioloogia. Seda kasutatakse raviprotsessi ja selle efektiivsuse jälgimise meetodina. Uurimisprotsessi käigus analüüsitakse kvalitatiivseid ja kvantitatiivseid näitajaid.
ELISA meetod on väga informatiivne, tulemuste täpsus on üle 96%. Diagnostika on saadaval peaaegu igas laboris ja meditsiiniasutuses.
Peamised näidustused
Sugulisel teel levivate nakkushaiguste esinemise kinnitamiseks on ette nähtud ensüümi immuunanalüüs:
- trihhomonoos;
- klamüüdia;
- ureaplasmoos;
- süüfilis jne.
ELISA-d kasutatakse ka viirushaiguste diagnoosimiseks:
- herpes;
- 4. tüüpi herpes (Epstein-Barri viirus);
- viiruslik hepatiit;
- tsütomegaloviiruse infektsioon.
Kuidas valmistuda uuringuks
Uurimise bioloogiline materjal on veri. Mõni päev enne analüüsi ei tohiks te ravimeid võtta. Antibiootikumid, anthelmintikumid ja viirusevastased ravimid lõpetatakse 14 päeva jooksul.
Materjal kogutakse hommikul tühja kõhuga. Tund enne protseduuri on lubatud juua klaas gaseerimata vett, toidu tarbimine on välistatud.
Analüüsi omadused
Uuringu läbiviimiseks võetakse venoosset verd vähemalt 5 ml mahus. Mõnel juhul kasutatakse biomaterjalina tserebrospinaalvedelikku, lootevett või klaaskeha sisu.
Valepositiivsete tulemuste vältimiseks võetakse vereproovid süstlanõelaga, rangelt tühja kõhuga. Suitsetamine ja alkohoolsete jookide joomine tuleb lõpetada 12 tundi enne. Narkootiliste ainete kasutamisel analüüsitulemusi moonutatakse.
Kui järeldus näitab immunoglobuliinide G, A, M negatiivseid väärtusi, näitab see patoloogilise protsessi arengu algfaasi või selle puudumist. See tulemus registreeritakse pärast ravi täielikku taastumist.
Negatiivne IgM ja IgA tulemus ning positiivne IgG tulemus viitavad immuunsuse tekkele pärast nakkushaigust või vaktsineerimist.
Positiivne IgM tulemus ja negatiivne või positiivne IgG, IgA tulemus viitavad ägeda nakkuspatoloogia olemasolule.
ELISA analüüs tehakse üsna kiiresti, tulemused on valmis päeva jooksul pärast materjali kogumist.
Kaasaegses nakkushaiguste laboridiagnostikas on leidnud laialdast kasutust ensüümseotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) meetod, mis põhineb patogeenidele iseloomulike spetsiifiliste antikehade tuvastamisel.
Mis on meetodi olemus?
Selle mõistmiseks peate teadma, kuidas inimese immuunsüsteem töötab, millised on antigeenid ja antikehad ning milliseid funktsioone nad täidavad.
- Meie kehas olev antigeen on molekul, mis seondub spetsiifiliselt antikehaga. See kannab raku kohta teatud teavet.
- Võõrantigeeni sattumisel verre hakkavad tootma antikehad (immunoglobuliinid Ig), mis tunnevad selle ära ja püüavad seda hävitada.
- Seda koostoimet nimetatakse immuunkompleksiks, millel põhineb ELISA diagnostikameetod.
- Analüüs võimaldab teil määrata hormoonide, immunoglobuliinide, immunoloogiliste komplekside ja muude bioloogiliselt aktiivsete ainete taset, Seetõttu on see oluline keeruka diagnostika jaoks.
Kellele on diagnoos näidustatud?
Spetsialist võib tellida uuringu:
Võrreldes teiste uurimismeetoditega on ELISA-l mitmeid eeliseid:
Esitage oma küsimus kliinilise laboratoorse diagnostika arstile
Anna Poniaeva. Ta on lõpetanud Nižni Novgorodi Meditsiiniakadeemia (2007–2014) ja kliinilise laboratoorse diagnostika residentuuri (2014–2016).
Puuduste hulka kuuluvad: dekodeerimise võimalik ebatäpsus. Mõnikord näitab analüüs valenegatiivset või valepositiivset tulemust, eriti kui ettevalmistus on vale või tehnikat rikutud.
Kuidas seda tehakse?
Protseduur ei erine materjali võtmisest.
- Pärast analüüsi määramist saadetakse patsient venoosse vere kogumiseks laborisse. Protseduur viiakse läbi hommikul tühja kõhuga.
- Materjal saadetakse laborisse, kus verest saadakse antikehi sisaldav seerum.
- Seerum asetatakse antigeenikomplektidega katseklaasidesse. Praktikas kasutatakse palju selliseid komplekte. Need võivad olla erinevad allergeenid (õietolm, vill, tsitrusviljad, piim ja teised), nakkus- ja viirushaiguste patogeenid ja teised.
- Pärast reaktsiooni saamist ülejäänud vadak kurnatakse. Antikehade kogus määratakse spetsiaalsete indikaatorite abil.
Analüüsi valmistamise aeg
Tootmisaeg sõltub konkreetsest laborist. Mõned laborid pakuvad tulemused 1-2 päeva jooksul, teised 1 nädala jooksul. Teatud koguse seerumi kogunemise tõttu võib tekkida viivitusi.
Ettevalmistus uuringuks
Enne testi tegemist peaksite järgima lihtsaid ettevalmistusreegleid:
- Vältige analüüsi eelõhtul ravimite võtmist. Kui see pole võimalik, teavitage kindlasti diagnoosi määranud arsti. Erilist tähelepanu pööratakse allergiaravimitele. Kui patsient võtab antihistamiine, peate konsulteerima oma arstiga, kui kaua enne uuringu algust peaksite nende võtmise lõpetama. See kehtib ka mõnede kilpnäärmeravimite kohta. Vastasel juhul võib TSH kontsentratsiooni määrata valesti ning normaalsete ja patoloogiliste tulemuste tulemus saadakse valesti. Reeglina antibakteriaalne, viirusevastane, antihistamiinikumid tuleb lõpetada 10-16 päeva enne diagnoosimist.
- Veri võetakse rangelt tühja kõhuga. Viimane söögikord peaks tavaliselt olema 8-12 tundi enne laborisse reisi.
- Ärge jooge alkohoolseid jooke ega suitsetage, vastasel juhul mõjutab see normaalseid tulemusi.
- Kõik stressitegurid või füüsiline aktiivsus tuleks välistada. Maga kindlasti hästi.
Kõik, mida pead teadma analüüsi kohta ühe labori näitel
Mis võib tulemusi mõjutada?
ELISA analüüs on üsna täpne uurimismeetod. Vead ilmnevad järgmistel juhtudel:
- materjali võtmise korra rikkumine;
- materjali ebaõige transportimise ja ladustamise tõttu;
- teatud ravimite võtmise ajal (nt kilpnäärme ravimid, mis võivad mõjutada TSH kontsentratsiooni);
- varjatud haiguste (sh suguhaigused, klamüüdia, näiteks), ainevahetushäirete, immuunpuudulikkuse esinemisel;
- vastsündinute perioodil, mil ema antikehad on tavaliselt veel kehas olemas.
Selgitus, tähendused (normid ja patoloogiad)
Kui analüüs on valmis, saab patsient vormi, mis näitab iga immunoglobuliinide klassi määramise negatiivseid (-) ja positiivseid (+) tulemusi. Tõlgendus võiks olla järgmine:
- Näidatud on patsiendi taastumine negatiivne IgM tulemus, ilma IgA, IgG määramiseta.
- Krooniline nakkushaigus tähendab dekodeerimist: (-) IgM ja negatiivne, positiivne IgG, IgA.
- Infektsioonidele kaitsva reaktsiooni puudumist näitavad (-) IgM, IgG, IgA väärtused.
- Äge infektsioon tuvastatakse negatiivse või positiivse IgG ja IgA, (+) IgM abil.
- Infektsioonijärgne immuunsus (-) IgM, IgA ja positiivse IgG-ga.
- Kroonilise haiguse ägenemine - IgM, IgG, IgA (+) näitajad.
ELISA analüüsi visuaalne demonstratsioon
Kus seda teha?
Vereanalüüsi Ifa meetodil peetakse populaarseks diagnostikaks ning seda pakuvad linna erinevad laborid ja kliinikud.
Moskvas saab ELISA analüüsi teha:
- Nearmedic laboris,
- Invitro,
- Kuninglik kliinik,
- Deltakliinik,
- LDC Kutuzovski,
- MedCenterService,
- Onkliniku võrgud,
- imearst,
- Perearst
- K+31,
- OOO Meditsiin ja teised.
Peterburis tehakse ELISA analüüs
- Madis,
- Ameerika meditsiinikliinik,
- Dr Filatovi kliinik,
- Medem,
- Doktor Pehli kliinik,
- Leka-farm,
- kalle,
- Express ja teised.
Väga kasulik õppefilm ELISA analüüsist
Uuringu maksumus
See sõltub vajalike markerite arvust. Mida rohkem markereid, seda kõrgem on hind.
Antikehade määramise hind
- tsütomegaloviiruse Igm/IgG varieerub vahemikus 350-700 rubla,
- mükoplasma puhul 340-520 rubla,
- Candida puhul 320-450 rubla,
- Klamüüdiavastane tr. IgA + klamüüdiavastane tr. IgG 1000-1300,
- Klamüüdia IgM antikehad 500-600 rubla jne.
- Vereproovide võtmine on keskmiselt 150-250 rubla.
Mõned kliinikud ja laborid pakuvad tulemuste e-posti teel saatmise teenust. Teenus on tasuta.
ELISA diagnostika võtab eriline koht haiguste diagnoosimisel.Seda iseloomustab laia toimespektriga, kiirus ja mugavus, tulemuste kõrge täpsus, mõistlik hind. See on nõudlik, seetõttu on see saadaval linna erinevates kliinikutes ja laborites.
Sisu
Et hinnata organismi vastupanuvõimet nakkushaigustele või määrata patoloogia faasi, kasutatakse vereanalüüsi. Laboratoorsete testide seas on olulisel kohal ELISA meetod, mis aitab igakülgselt uurida vere kaitsefunktsiooni aktiivsust, määrata immuunpuudulikkust nakkushaiguste, verehaiguste, hormonaalsete ja autoimmuunsete protsesside korral.
Mis on ensüümi immuunanalüüsi vereanalüüs?
See meetod viitab laboratoorsetele uuringutele, mis määravad teatud patogeensete ainete (antigeenide) valgu iseloomuga kaitsvate verefaktorite (antikehade) olemasolu. Ensüümiga seotud immunosorbenttestiga tuvastatakse immunoglobuliinid, mida võib leida immunokomplekside kujul. Need ilmnevad siis, kui tekivad inimese immuunkaitse keerulised neurohumoraalsed reaktsioonid, mis muutuvad vastuseks võõrantigeenide sissetoomisele.
Keha toodab spetsiifilisi antikehi igat tüüpi patogeenide vastu. Järgmiseks patoloogiline mikroorganism ehk antigeen seondub ja moodustub kompleksne “antigeen-antikeha” ühend. Seejärel see neutraliseeritakse, toimub ensümaatiline lüüs, fagotsütoosi reaktsioon ja protsess lõpeb kehast eemaldamisega. Spetsiifiliste komplekside olemasolu, mis määratakse kindlaks ELISA abil, näitab patogeeni või kahjuliku aine tüüpi patsiendis.
Immunoglobuliinide klassid
Teadlased on avastanud ja uurinud 5 tüüpi immunoglobuliine: IgE, IgD, IgG, IgM, IgA. On ka teisi klasse, kuid need on alles uurimisjärgus ja nende rolli ei mõisteta täielikult. Praktilises meditsiinis on olulised A, M, G. Infosisu ja määramise täpsus põhineb ajavahemikel, mille jooksul need ilmuvad, saavutavad maksimumi ja kaovad.
Näidustused vereanalüüsiks ELISA abil
Selle analüüsi abil saate hinnata ravi efektiivsust, viia enne siirdamisoperatsioone läbi põhjalik uuring, määrata immuunpuudulikkuse seisund ja antikehad enam kui 600 tüüpi allergeenide suhtes. Vereanalüüsi ELISA abil kasutatakse täiendava võimalusena vähirakkude tuvastamiseks. Analüüs on ette nähtud, kui on vaja tuvastada sugulisel teel levivaid patoloogiaid provotseerivate mikroobide antikehi:
- trihhomonoos;
- süüfilis;
- toksoplasmoos;
- mükoplasmoos;
- ureaplasmoos.
Helmintiliste infestatsioonide korral näitab ELISA analüüs immunoglobuliinide hulga suurenemist. Uuringud viiakse läbi, et teha kindlaks, kas patsiendil on:
- Epstein-Barri viirus;
- herpeetilised infektsioonid;
- tsütomegaloviirus;
- viirusliku hepatiidi rühm.
Ensüüm-immunoanalüüs ei ole ainus võimalus immunoglobuliinide määramiseks. Mõnikord kogutakse selle uuringu jaoks tserebrospinaalvedelik, klaaskeha kude ja amnionivedelik. Vere kasutamisel kogutakse see nahaalusest veenist süstenõela abil. Analüüs tuleb teha tühja kõhuga, enne ELISA-d ei ole soovitatav võtta ravimeid, mis võivad tulemust mõjutada. Enne biomaterjali annetamist peaksite loobuma alkoholist, suitsetamisest ja narkootikumide tarvitamisest. Testitulemuste valikud:
- Kui immunoglobuliinid IgG, IgM, IgA on negatiivsed, ütlevad arstid, et patoloogiat ega esialgset staadiumi pole. Sama tulemus (negatiivne) on pärast täielikku taastumist pärast pikka perioodi.
- Kui IgG on positiivne, kuid IgM ja IgA ei tuvastata, näitab see immuunsuse teket pärast vaktsineerimist või nakkushaigust.
- IgM kõrge tiitrite ja negatiivse IgA, IgG korral tehakse ägeda nakkushaiguse diagnoos.
- Kui IgG, IgM, IgA on positiivsed, räägivad arstid olemasoleva kroonilise haiguse retsidiivi ägedast faasist.
- Kroonilise infektsiooni korral, mis on taandumas (remissioonis), näitab ELISA test negatiivseid IgM tiitreid, samas kui IgA ja IgG on positiivsed.
ELISA analüüsi eelised ja puudused
Selle uuringu peamine negatiivne aspekt on võimalus saada valepositiivseid või valenegatiivseid tulemusi. Ebausaldusväärsuse põhjuseks on ravimite kasutamine ja tehnilised vead laboris. Ainevahetushäirete protsess kehas võib analüüsi võltsida. ELISA analüüsi peamised eelised on:
- täpsus, diagnostiline spetsiifilisus;
- madalad analüüsikulud;
- tulemuste saamise kiirus;
- võimalus dünaamiliselt jälgida patoloogia staadiumi ja ravi efektiivsust;
- uurimise lihtsus;
- suutlikkus teha nakkuskolde massilisi uuringuid;
- valutus, ohutus patsiendile;
- rakendus infotehnoloogia töötlemisel.
Video