Kaasaegset tüüpi laboratoorsete uuringute, ELISA ehk ensüümi immuunanalüüsi esindamine võimaldab teil leida verest teatud haiguste jaoks spetsiifilisi antikehi või antigeene. See võimaldab teil tuvastada nii haiguse etioloogiat kui ka määrata selle staadiumi. Samal ajal saab seda tüüpi uuringute tulemusi väljastada nii kvantitatiivselt kui ka kvalitatiivselt. Niisiis, kaalume üksikasjalikult ensüümi immuunanalüüsi meetodi põhimõtet, selle metoodikat ja olemust.
Mis on ensüümi immuunanalüüs
Tervisliku seisundi kõige täielikumaks igakülgseks hindamiseks määratud ensüümimmuunanalüüs võimaldab teil hinnata üldist tervislikku seisundit ja hinnata selle kaitsefunktsioone. See laboriuuring võimaldab teil vereanalüüsis diagnoosida nakkuslikke, autoimmuunseid, hematoloogilisi patoloogiaid.
Ensüümi immuunanalüüsi olemust käsitletakse allolevas videos:
Kellele see on määratud
Seda uuringut saab määrata patsientidele, kellel on järgmised haigused:
- viirusliku päritoluga haigused, sealhulgas hepatiit;
- sugulisel teel levivad haigused - klamüüdia, trichomonas, süüfilis, ureaplasma, mükoplasma;
- immuunpuudulikkus;
- preoperatiivne terviklik läbivaatus.
Samuti on ette nähtud ELISA vereanalüüs, et määrata hormoonide taset ja hinnata läbiviidava ravi tüübi kvaliteeti.
Arst võib selle analüüsi välja kirjutada olemasoleva haiguse staadiumi määramiseks, mis võimaldab kasutatavat ravi õigeaegselt kohandada. Ja saadud andmete kõrge täpsus võimaldab teil saada kõige üksikasjalikuma pildi tervisest. Samal ajal saadakse andmed pärast uuringu läbiviimist väga lühikese aja jooksul, mis võimaldab jälgida patoloogilise protsessi arengu dünaamikat.
Miks neid teste teha?
Kuna tänu ELISA vereanalüüsile saate märkimisväärsel hulgal teavet tervisliku seisundi ja organismis toimuvate patoloogiliste protsesside kohta, võimaldab just see kõige täielikumalt võtta arvesse lähteandmeid (üldine tervis, staadium haigusest, patoloogilise protsessi arengu dünaamikast, kasutatud ravi efektiivsuse näitajast) raviskeemide koostamisel.
Sel põhjusel, et saada kõige väljendunud ravitulemus ja võimalikult kiire patoloogilise protsessi lõppemine organismis, on ette nähtud ELISA vereanalüüs. Immuunsüsteemi tõsiseid haigusi, antigeenide esinemist veres ja allergiate põhjuseid saab saadud andmete põhjal kiiremini ravida, kasutades kõige tõhusamaid meetodeid.
ELISA analüüs määratakse mitmesuguste patoloogiate korral ja seda tuleks teha ainult vastavalt arsti juhistele. Ka analüüsi sageduse määrab arst ning ELISA analüüsi jaoks verd loovutades on haiguspilt kõige terviklikum. Kuna seda analüüsi tehes on võimalik saada haiguse kulgu dünaamikat rohkem kui üks kord, võib kõige sagedamini määrata vereloovutuse kolm kuni viis korda. See võimaldab võrrelda antikehade hulka veres erinevate ajavahemike järel.
Sellise protseduuri tüübid
Ensüümi immuunanalüüsi on mitut tüüpi. Need erinevad inimkehast võetud vedeliku tüübi poolest, mille põhjal uuritakse selle koostist ja teatud antigeenide olemasolu.
Samal ajal saab analüüsimiseks võtta mitte ainult inimverd, vaid ka muid vedelikke:
- amnionivedelik,
- tserebrospinaalvedelik,
- klaaskeha sisu
- määrib,
- lima kusiti ja emakakaela kanalist.
Operatsioon ise teatud tüüpi vedeliku võtmiseks on standardne ja seda tehakse päevahaiglas.
Näidustused hoidmiseks
Tavaliselt määrab arst ELISA analüüsi, kui on vaja saada üksikasjalik pilt praegusest haigusest, mis toimub mis tahes kujul: krooniline, loid või äge. Seda tüüpi analüüsi näidustusteks võib pidada järgmisi tingimusi ja terapeutilisi eesmärke:
- teatud haiguste antigeenide otsimine;
- hormonaalse seisundi määramine;
- hepatiidi viiruse tuvastamine kehas;
- uuringud;
- mis tahes tüüpi nakkushaiguste vastaste antikehade otsimine;
- keha autoimmuunsete kahjustuste olemasolu uurimine.
Ensüümi immuunanalüüsi kohta vaadake allolevat videot:
Hoidmise vastunäidustused
Ensüümi immuunanalüüsi vastunäidustusi ei ole siiani tuvastatud.
Raseduse ajal, kui hormoonide sisaldus veres muutub pidevalt, on tulemuse kinnitamiseks vaja seda analüüsi korduvalt läbi viia. Samuti võivad vastsündinutel ja väikelastel olla valed analüüsiandmed: loote arengu käigus võivad teatud tüüpi antikehad ema platsenta kaudu sattuda loote verre. Seetõttu ei tohiks nende esinemist võetud analüüsis pidada olemasoleva infektsiooni märgiks.
Testi ohutust
Inimkehast igasuguse vedeliku võtmise protseduuri läbiviimine ei avalda kehale negatiivset mõju. Täielik steriilsus manipulatsioonide ajal väldib igasuguste haigustega nakatumise tõenäosust.
Ettevalmistus ürituseks
Uuringu kõige usaldusväärsemate tulemuste saamiseks peaksite enne vere (või muu vedeliku) analüüsi võtmist hoiduma alkohoolsete jookide ja narkootikumide joomisest.
Kuidas protseduur on, aistingud selle ajal
ELISA testi läbiviimiseks võetakse patsiendi verd rangelt tühja kõhuga: vähemalt tund enne protseduuri ei tohi te mingil kujul süüa. Analüüs võetakse kubitaalveenist.
Kõigi haiguste esinemisest ja võetud ravimitest teavitatakse eelnevalt arsti, enamasti tühistatakse vereloovutuse ajal olnud ravimid. Tunded protseduuri ajal on sarnased vere võtmisega biokeemiliseks analüüsiks.
Tulemuste dešifreerimine
ELISA diagnostika võimaldab määrata infektsiooni esinemist organismis, patoloogilise protsessi aktiivsust ja olemasoleva infektsiooni etioloogiat. Analüüsi tulemuse kiire kättesaamine (päeva jooksul) on seda tüüpi uuringu üks eeliseid.
Saadud teabe dekodeerimise protsessi viib läbi arst. Samas tuleb arvestada, et ühes laboris analüüside sooritamisel on tagatud mistahes protsesside dünaamika jaoks saadud tulemuste õigsus.
Protseduuri keskmine maksumus
ELISA uuringu keskmine hind sõltub analüüsi suunast ja konkreetsete väärtuste määramisest. Seega maksab erinevat tüüpi nakkushaiguste (anti-HAV IgG, anti-HAV IgM, HBsAg) seroloogiliste markerite määramine 200–320 rubla ja see viiakse läbi 2 tööpäeva jooksul. Selle protseduuri maksumuse näitajat peetakse ka selle eeliseks: mis tahes tüüpi uuringute hindade olemasolu võimaldab uuringuid läbi viia mis tahes eelarvega.
ELISA uuringu maksumus sõltub raviasutuse poliitikast, kuid seda tuleks pidada avalikuks protseduuriks, mis võimaldab saada olemasolevast haigusest üksikasjaliku pildi ja pakkuda võimalikult terviklikku ravi.
ELISA uuringu normide ja omaduste kohta vaadake allolevat videot:
Kaasaegse meditsiini areng diagnostikamaailmas ei lakka oma saavutustega hämmastamast ja nüüd pole arstil vaja teha oletusi tõenäolise diagnoosi kohta, tuginedes vaid kaudsetele tunnustele. Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) laboratoorsete uuringute loomine ja kasutuselevõtt võimaldab teil kiiresti ja täpselt määrata mitte ainult patogeeni olemasolu, vaid ka paljusid muid haiguse tunnuseid.
IFA loomise ja arengu ajalugu
Seda vereanalüüsi meetodit hakati praktilises meditsiinis kasutama eelmise sajandi keskel – kuskil 60ndatel. Selle esialgne eesmärk oli teaduslik uurimistöö histoloogia vallas, mis piirdus bioloogiliste liikide rakulise antigeense struktuuri otsimise ja uurimisega. ELISA vereanalüüs põhineb seotud antigeenide (AG) ja spetsiifiliste antikehade (AT) interaktsioonil koos ensüümi poolt määratud "antigeen-antikeha" kompleksi moodustumisega.
See nähtus ajendas teadlasi otsustama, et seda meetodit saab kasutada erinevate klasside valguühendite tuvastamiseks, mis tekivad vereseerumis patogeeni sisenemisel kehasse. Tänu nende otsesele osalemisele immuunsüsteemi toimimises nimetati neid ühendeid immunoglobuliinideks (Ig, Ig) ning avastus oli laboridiagnostika suurim läbimurre.
Samal ajal hakati seda ülitundlikku meetodit aktiivselt kasutama alles 80ndatel ja see oli saadaval ainult kõrgelt spetsialiseeritud meditsiiniasutustes. Jaamad ja vereülekandekeskused, sugu- ja nakkushaiglad olid esimesed, kes said kasutada ensüümi immuunanalüüsi analüsaatoreid. Selle põhjuseks oli "20. sajandi katku" - AIDSi - kiire levik, mistõttu oli vaja võtta kiireloomulisi diagnostilisi ja ravimeetmeid.
Tehnika võimalused
ELISA vereanalüüsi ulatus on üsna lai – hetkel ei kujuta ettegi, kui keeruline oleks paljude haiguste põhjuste otsimine. Sellist uuringut kasutatakse nüüd peaaegu kõigis meditsiiniharudes, isegi onkoloogias. Kuigi asjatundmatutel on sellest raske aru saada, õnnestus mõnel juhul pärast selle läbiviimist päästa patsientide elusid kasvaja varases staadiumis avastamisega.
Tähtis! ELISA on vereanalüüs, mis näitab mõnele pahaloomulisele protsessile iseloomulikke markereid, mis võimaldab tuvastada haigust ajal, mil see ei allu ühelegi muule meetodile.
Kaasaegsetes diagnostikakeskustes ei esinda laboratoorseid uuringuid mitte ainult kasvaja markerid - need on varustatud muljetavaldava paneelide arsenaliga selle diagnoosi läbiviimiseks. Nende abiga saate määrata palju patoloogilisi seisundeid, nagu hormonaalsed kõrvalekalded ja erineva päritoluga nakkusprotsessid.
Lisaks võimaldab ELISA vereanalüüsi läbiviimine ja dekodeerimine jälgida ravimite mõju haige inimese ja isegi looma kehale. Viimast kasutatakse laialdaselt veterinaarkliinikutes, aidates säilitada meie lemmikloomade või toitjate tervist, pakkudes stabiilset liha, piimatoodete ja munade varustamist, mis on toidus asendamatud.
Nii et vaid mõne milliliitri venoosse vere võtmise ja ELISA-meetodi abil diagnoosimise tulemusena saab arst pärast uurimismaterjalide kirjeldamist kindlaks teha:
- hormonaalne seisund, sealhulgas sugu ja kilpnäärme bioloogiliselt aktiivsed ained, samuti neerupealised;
- bakteriaalse ja viirusliku infektsiooni (B- ja C-hepatiit, süüfilis, herpes, klamüüdia, tuberkuloos, müko- ja ureaplasmoos, HIV, TORCH) ja muude seda laadi haiguste esinemine;
- patoloogilise protsessi patogeenide elutähtsa aktiivsuse tunnused, mis lõppesid taastumisega ja läksid antikehade moodustumise staadiumisse (immuunvastus).
Selliseid komplekse on immuunrakkudel palju lihtsam ära tunda ja kõrvaldada. Antikehade kujul esinevad jääkmõjud sisalduvad veres kogu eluks, mis vähendab praktiliselt nullini uuesti nakatumise riski.
Immunoglobuliinide sordid
Antikehi on mitut tüüpi ja igaüks neist osaleb teatud etapis immuunvastuse protsessis. Näiteks M-klassi immunoglobuliinid (IgM) on esimesed, mis tekivad vastusena antigeeni allaneelamisele organismis. Nende kõrgeimat määra täheldatakse haiguse esimestel päevadel.
ELISA-s kasutatavad immunoglobuliinide tüübid
Seejärel suunab immuunsüsteem plasmasse G-klassi IG-d (IgG), mis vastutavad antigeenide täieliku hävitamise ja patsiendi taastumise eest. Hiljem on need jätkuvalt veres, valmistades seeläbi immuunsüsteemi ette identse patogeeni taassisenemiseks. Nii käib vaktsineerimine. Patoloogiliste mikroorganismide nõrgestatud antigeenide sissetoomisega ilmuvad paljud immunoglobuliinid plasmasse ja jäävad ringlema.
Laboratoorse diagnostika peamised huviobjektid on Ig-klassid M, G ja A. Nende kontsentratsiooni taseme järgi saate määrata haiguse staadiumi ja teada saada, milliseid nakkushaigusi inimene on oma elus põdenud. Näiteks saate kontrollida tuulerõugete või punetiste ajalugu. Et teada saada, kas patsiendi organismis esineb teatud tüüpi AT või AH või mis tahes hormooni kontsentratsioon, ei pea arst määrama mitut laboratoorset analüüsi – piisab ELISA uuringu saatekirja väljakirjutamisest.
Tehnika olemus
Uurimismetoodika põhineb ülesannete mitmel valikul (otsene ja kaudne – konkureeriv ja mittekonkureeriv), millest igaüks on koostatud kindla eesmärgiga. See lähenemisviis võimaldab teil läbi viia sihipärase otsingu ja võimalikult lühikese aja jooksul tuvastada konkreetse patoloogia põhjuse. Erinevate klassikategooriate Ig tuvastamiseks kasutatakse 96 süvendiga plaati (polüstüreenpaneel), mille süvendites paiknevad adsorbeeritud rekombinantsed valgud. Nad mängivad antigeenide rolli ja on algstaadiumis tahkes faasis.
Kui nad sisenevad vereplasmaga süvendisse, tuvastavad antigeenid või antikehad objekti vastavalt nende orientatsioonile ja moodustavad kompleksi (AG - AT). Selle moodustumise fikseerib ensüümühend (konjugaat), mis hiljem avaldub kaevu muutunud värvumisena. ELISA tehakse spetsiaalsetes testimissüsteemides, mis on toodetud spetsialiseeritud laborites ja varustatud täieliku reaktiivide komplektiga.
Seda analüüsi saab teha seibide ja näiduspektromeetritega, kuid need nõuavad käsitsi tööd. Loomulikult on laborandil mitu korda mugavam ja kiirem teha kõik manipulatsioonid täisautomaatsetes seadmetes. Nende kasutamisel vabanevad laboritöötajad suurest monotoonsest tegevusest - pesemisest, tilgutamisest ja muust rutiinist, kuid mitte kõik meditsiiniasutused ei saa endale nii kalleid seadmeid lubada.
Seetõttu jätkavad paljud haiglad ja diagnostikaasutused ELISA läbiviimist vanaviisi – poolautomaatsetel seadmetel.
Uurimismaterjalide tõlgendamine on eranditult laboridiagnostika spetsialisti pädevuses – ainult talle saab öelda tulemusi haiguse kulgemise eripärade ja peensuste kohta. Sel juhul peab arst tingimata arvestama võimalusega saada valenegatiivseid või valepositiivseid vastuseid.
Materjalide transkriptsioon
Kvaliteetse ensüümi immuunanalüüsi tulemus peaks olema ühemõtteline järeldus – kas sellest vereproovist leiti soovitud mikroorganism või mitte. Kvantitatiivne analüüs näitab kontsentratsiooni taset ja seda saab väljendada kahel viisil - väärtus numbrites või "+" märkide arv.
Analüüsitud näitajad
Uuringu käigus uuritakse põhjalikult immuunvastusega seotud peamisi immunoglobuliini, näiteks:
- IgM - selle klassi tuvastamine tähendab nakkushaiguse ägeda vormi tekkimist. Negatiivne tulemus IgM-i otsimisel võib olla nii tõend soovitud patogeeni puudumisest kui ka haiguse üleminekust kroonilisele kulgemisele.
- IgA - selle klassi määratlus IgM-i puudumisel on enamikul juhtudel signaal nakkushaiguse arengu kroonilisest või varjatud vormist.
- IgM ja IgA (samaaegne esinemine) - mõlema tüübi positiivsed tulemused näitavad patoloogia ägeda vormi tippu.
- IgG - selle olemasolu näitab haiguse muutumist krooniliseks vormiks või taastumist ja immuunsuse teket määratava aine suhtes.
Teatud klassi IG ilmumine ja kogunemine toimub erinevatel ajaetappidel. Näiteks IgM ilmub esimesena, umbes 5 päeva pärast patogeeni tabamust. IG-d püsivad veres umbes 5–6 nädalat ja kaovad seejärel järk-järgult. Praegu on need ELISA abil määramiseks saadaval. Ligikaudu 3-4 nädalat pärast haiguse algust ilmub IgG, mis võib seejärel püsida mitu kuud. Kuid analüüsi käigus ei ole neid alati võimalik tuvastada.
IgA moodustub veres 2-4 nädala jooksul, kusjuures 20% neist sisaldub seerumis ja 80% limaskestade sekretsioonis. Reeglina kaovad need immunoglobuliinid 2-9 nädala jooksul, mis näitab patogeeni hävitamist ja patsiendi taastumist. Kui ELISA näitab endiselt IgA olemasolu, annab see märku protsessi üleminekust kroonilisse vormi.
Analüüsitulemuste valikud
Sõltuvalt saadud andmetest saab ELISA vastused vormil väljastada tabeli kujul, mis sisaldab kõigi AT ja AG täielikku loendit ning positiivset või negatiivset reaktsiooni. Teatud olukordades kuvatakse kvantitatiivne väärtus - järsult positiivne, positiivne, nõrgalt positiivne või negatiivne tulemus. Teine võimalus näitab uuritud vereproovis sisalduvate antikehade kogust.
ELISA materjalide tõlgendamise variandid
Lisaks ülaltoodud väärtustele uuritakse ELISA protsessis veel ühte kvantitatiivset parameetrit - AT aviidsusindeksit, mis arvutatakse protsentides. See näitab, kui kaua haigus kestab - see tähendab, et mida kõrgem on indikaator, seda rohkem aega patoloogia areneb.
Alternatiivne ELISA meetod
Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs on üsna tuntud ja levinud diagnoos. Võib-olla pole mõned sellest kunagi kuulnud, kuid sellest uuringust on veel üks versioon, mis on paljudele inimestele veelgi vähem teada ja mille käigus võetakse mittevereproov. Seda tehnikat nimetatakse varjatud vereanalüüsiks väljaheites ja see väldib paljudel juhtudel täiendavaid kurnavaid protseduure, millega kaasnevad ka ebameeldivad aistingud.
Varjatud vere (hemoglobiini molekulide) ELISA test võimaldab tuvastada seedesüsteemi verejooksu, isegi kerget, mille tunnuseid patsiendi väljaheites, nagu öeldakse, ei ole võimalik palja silmaga tuvastada. Inimese väljaheidete varjatud vere ensüümimmunoanalüüs võib lühikese aja jooksul näidata peptilist haavandit, polüpoosi, divertikuloosi, kasvajaid, millega varases staadiumis ei kaasne teatud sümptomeid.
Praeguseks on loodud tuhandeid erinevaid ensüümi immuunanalüüsi diagnostilisi testsüsteeme, mis võimaldavad leida AT ja AG tohutust patoloogiate loendist. Seetõttu kasutatakse seda analüüsi peaaegu kõigis meditsiiniharudes igas vanusekategoorias. Ja absoluutne kahjutus võimaldab teil seda kasutada nii raseduse ajal kui ka nõrgestatud patsientide diagnoosimisel.
Inimese immuunpuudulikkuse viiruse infektsioon on tõsine diagnoos. Vead diagnoosimisel võivad põhjustada katastroofilisi tagajärgi. HIV-i ELISA analüüs on kõige kättesaadavam uurimismeetod, kuid see ei ole kõigil juhtudel informatiivne.
ELISA - ensüümi immuunanalüüs. ELISA meetodi ülesandeks on immuunpuudulikkuse viiruse antikehade tuvastamine bioloogilises materjalis. Meetodit kasutades on võimalik jälgida mitte viiruste endi, vaid ainult vastusena nende olemasolule toodetud antikehade olemasolu vedelikus. ELISA-d kasutatakse laialdaselt suguhaiguste diagnoosimisel. See aitab tuvastada sugulisel teel levivaid haigusi.
ELISA-d on mitut tüüpi: otsene variant, kaudne variant, võileivameetod. Igal juhul põhineb meetod antikehade olemasolu kindlaksmääramisel, mis on võõrkehade läbitungimise indikaator. Nende "märkide" paljastamiseks töödeldakse bioloogilist komponenti ensüümidega.
ELISA tuvastab antikehad täpsusega 96 - 98%, viga on tühine. See on 2-4%.
ELISA - HIV diagnoosimise meetod
HIV-i ELISA analüüs on diagnoosimise esimene etapp. Immuunpuudulikkuse viiruse antigeenid on valgud p24, p15, p17, p31 ja glükoproteiinid gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.
Viiruse valgu tuvastamiseks võetakse veenist osa verd. ELISA vereanalüüsiks saadetud proovi töödeldakse ensüümi immuunanalüüsi reaktiividega. Seerum isoleeritakse verest. Kui need uuringu käigus leitakse, on viirus juba veres olemas.
Veri antakse rangelt tühja kõhuga. 2 päeva enne analüüsi ei soovitata süüa rasvaseid toite ja juua alkoholi. Viirusevastaste ravimite võtmise peate lõpetama 14 päeva jooksul.
Meetodi eelised:
- suhteliselt madalad kulud;
- reaktiivide kõrge stabiilsus;
- kõrge tundlikkus;
- lühike tarneaeg;
- inimfaktori minimaalne mõju.
Kaasaegsed ELISA testimissüsteemid on toodetud vastavalt maailma standarditele. See parandab meetodi täpsust.
ELISA ei anna alati usaldusväärseid tulemusi. Pärast viiruse sisenemist verre algab varjatud (varjatud) arenguetapp. Ajavahemikku, milleni viirused on hakanud paljunema ja antikehad pole veel moodustunud, nimetatakse "seronegatiivse akna ajaks". ELISA-d on praeguses etapis mõttetu teha. Kui infektsioon on toimunud, on tulemuseks . Kui kiiresti viirus end tuvastab, sõltub sellest, kui palju ohtlikke rakke on kehasse sattunud. Kaitsmata vahekorra või nakatunud vereülekande korral on see periood minimaalne.
HIV-i ELISA kõrge usaldusväärsuse tagamiseks viiakse uuring läbi kolm korda. Inimese immuunpuudulikkuse viiruse ELISA tähtajad:
- 6 nädalat pärast tõenäolist kontakti,
- 3 kuu pärast,
- kuus kuud hiljem.
4. põlvkonna HIV-i ELISA on kõige informatiivsem meetod nakkuse varases staadiumis. Seda saab teha juba 1 kuu pärast väidetavat nakatumist. Test on 3. põlvkonna vastega võrreldes kallis. Seetõttu kasutatakse riiklikes meditsiiniasutustes seda täiendava diagnostikameetodina. Tasuta tehakse test 3. Kui selle tulemuste põhjal ei ole võimalik üheselt vastata, saadetakse patsient 4. põlvkonna ELISA-le.
Tähtis! Vahetult pärast nakatumist muutub inimene nakkavaks. Ta on teistele ohtlik isegi siis, kui ta oma diagnoosist veel ei tea!
Kui ELISA käigus tuvastatakse HIV-antigeenide vastaseid antikehi, on vaja täiendavaid uuringuid. See kuulub nende hulka. Selle meetodi usaldusväärsus on 80%. PCR abil uuritakse verd, spermat ja tupevoolust. Bioloogiline vedelik jagatakse meditsiinilises reaktoris ja seejärel töödeldakse ensüümidega. Selle tulemusena saadakse andmed HIV-rakkude kontsentratsiooni kohta vedelas keskkonnas. Suure vea (20%) tõttu tehakse positiivse tulemusega lisaks immuunblotanalüüs.
Järgmine diagnostiline samm on Combo test (või immuunblotanalüüs). See on väga tundlik uuring (98% usaldus) ja seda tuleks teha, kui ELISA tulemused on 6 kuu pärast ebaselged.
ELISA tulemuste tõlgendamine
Dekrüpteerimisaeg on 24 kuni 48 tundi. Kui teil on vaja kiiresti teavet saada (vajalik on kirurgiline sekkumine), toimub dekodeerimine 2 tunni jooksul. Provintsi meditsiinijaamades ei ole alati vajalikke reaktiive. Proov võetakse ringluse kohas, seejärel viiakse see piirkondlikku keskusesse. Sellistel juhtudel on tulemus teada saada 1-2 nädala pärast.
Ensüümi immuunanalüüsi tulemus võib olla kas positiivne või negatiivne; muid võimalusi pole.
Isegi kui esmase ja korduva ELISA tulemus oli positiivne, ei saa patsienti HIV-nakatisena tuvastada. Võimalik viga. Valepositiivse tulemuse põhjused:
- kroonilised haigused;
- pikaajalised nakkushaigused;
- Rasedus.
Seetõttu tuleks analüüsi tulemust selgitada täiendavate uuringutega.
Kui HIV-i immunoblotimisel (reaktiivne), loetakse inimene HIV-nakatunuks, mis tähendab, et ta on terve.
Viirusrakud kohanduvad lõpuks ettenähtud ravimitega. Kontrollimiseks korratakse perioodiliselt ELISA testi.
Mõnikord näitab immunoblotanalüüs valenegatiivset tulemust. Äärmiselt haruldane immuunpuudulikkuse viirus 6 kuud (või rohkem). See on võimalik, kui vereringesse on sattunud väike kogus viirusrakke. 0,5% juhtude koguarvust saab infektsiooni diagnoosida alles aasta pärast. 99,5%, kuue kuu jooksul pärast nakatumist annab ELISA usaldusväärse tulemuse.
Isegi ülitäpsete uuringute puhul on veamäär endiselt 2%. Me ei tohiks unustada inimtegurit. Veavõimaluse välistamiseks saab testi läbi viia 2 erinevas asutuses.
(ELISA) on laboris vereanalüüsi meetod, mis põhineb spetsiaalsete rakkude – erinevate haiguste antikehade – otsimisel. Meetod võimaldab mitte ainult tuvastada patogeeni, vaid ka kindlaks teha, millises staadiumis patoloogiline protsess on. Viimane on patsiendi prognoosi ja edasise ravi seisukohalt väga oluline.
Meetodi eelised ja puudused
Kõigist kaasaegsetest diagnostikameetoditest on ELISA kõige uuenduslikum ja tehniliselt täpsem. Selle peamised eelised on järgmised:
- Võimalus otsida patsiendi verest kõiki olemasolevaid nakkushaiguste antikehi.
- Uurimismeetodi kõrge kättesaadavus. Tänapäeval saab ELISA analüüse teha igas keskmise suurusega laboris.
- Meetodi spetsiifilisus ja tundlikkus peaaegu 100%.
- Võimalus otsida antikehi ja antigeene, samuti tuvastada patoloogilise protsessi staadium ja jälgida selle dünaamikat tänu arvude võrdlusele.
Sellised eelised teiste testide ees jätavad täielikult varju analüüsi ühe ja ainsa puuduse: see suudab tuvastada antikehi, kuid mitte patogeeni ennast.
Analüüsi hindamise põhiterminid
Selleks, et mõista, mis on ELISA analüüs, mis see on ja kuidas seda tehakse, tuleb tutvuda spetsialistide kasutatavate põhimõistetega.
- Antikeha- valk, mida toodavad inimese immuunsüsteemi rakud (B-tüüpi lümfotsüüdid). Nad reageerivad spetsiifilise reaktsiooniga võõrkeha või aine allaneelamisele. Antikehade teine nimetus on immunoglobuliinid, need kuuluvad erinevatesse klassidesse: A, E, M, G. Need erinevad üksteisest massi, reaktsioonikiiruse, poolestusaja ja mitmete muude omaduste poolest. Tavaliselt sisaldab inimese veri peamiselt klassi G immunoglobuliine. Kui tekib mõni infektsioon, suureneb järsult immunoglobuliinide A ja M hulk. Immunoglobuliinid E on seotud allergiliste reaktsioonidega.
- Antigeen- orgaanilise päritoluga ja suure molekulmassiga võõrkeha. Enamasti on need patogeenid või nende bioloogiliselt aktiivsed ained.
- Antigeen-antikeha kompleks ehk immuunkompleks on otseselt võõraine ja immunoglobuliini kombinatsioon, mis tekitab immuunvastuse.
Meetodi olemus ja ulatus
Patsientidel tekib sageli küsimus: ELISA analüüs, mis see on, kuidas seda tehakse ja milleks see on ette nähtud? Meetodi kohta saate rääkida ligipääsetaval viisil, kirjeldades lühidalt selle etappe.
Ettevalmistav etapp. Laboriarst kasutab spetsiaalset 96 süvendiga plaati. Iga süvendi pinnale kantakse konkreetse patogeeni antigeen.
1. etapp Võetakse verd, mis seejärel kantakse tilkhaaval kaevu. Kaev käivitab reaktsiooni antigeeni ja veres oleva antikeha vahel.
2. etapp Kaevus on reaktsioon täies hoos immuunkomplekside tekkega. Selle tulemusena moodustub teatud värvi aine. Värvuse intensiivsus sõltub iga konkreetse patogeeni vastaste antikehade hulgast patsiendi veres.
3. etapp Tulemuse hindamine fotomeetriliselt. Selleks kasutatakse spetsiaalset seadet, mida nimetatakse spektrofotomeetriks. See võrdleb materjali tihedust süvendis ja kontrollproovis. Lisaks genereerib seade matemaatilise analüüsi tulemuse.
ELISA tulemuste hindamine ja eesmärk
Tulemuse tõlgendamine sõltub mitmest olulisest nüansist:
- Kaevu optiline tihedus.
- Kaevuplaadi tootja (testisüsteemid).
- Laboratoorium, kus uuring tehti.
Arvestades neid nüansse, ei tohiks kunagi võrrelda kahte erinevatest katsesüsteemidest või erinevatest laboritest saadud tulemust.
Teine oluline punkt, mis ELISA analüüsi mõjutab, on nn antikehade aviidsus. See parameeter iseloomustab antigeeni kogust, sideme tugevust antigeeni-antikeha kompleksis. Selle määratlus põhineb immuunkompleksi töötlemisel karbamiidiga valgu struktuuride lahendamiseks. See võimaldab hävitada nõrgad sidemed antigeeni ja antikeha vahel ning jätta alles ainult tugevad. Uuringu tähtsus aviidsuse seisukohalt seisneb selles, et selle abil saab välja selgitada nakatumise kestuse. See teave on rasedate naiste diagnoosimisel äärmiselt oluline.
ELISA vereanalüüsi eesmärk on:
- Erinevate patogeenide antigeenide otsimiseks.
- Hormonaalse tausta uurimine.
- Autoimmuunhaiguse olemasolu testimiseks.
- Vähimarkerite tuvastamiseks.
ELISA sordid
ELISA analüüsil on järgmised variandid:
- Kaudne.
- Otse.
- Konkurentsivõimeline.
- blokeerimismeetod.
Kuid tegelikult kasutatakse tänapäeval ainult meetodit, mida nimetatakse ELISA-ks (enzyme linked immunosorbent assay). See põhineb ülalkirjeldatud reaktsioonil, mille käigus moodustub antigeen-antikeha kompleks koos värvimuutusega süvendi pinnal.
Eraldi tähelepanu väärib otseselt kvantitatiivne ELISA vereanalüüs. See ei ole analüüsi tüüp, vaid tulemuste hindamise viis. Tänu temale loendatakse antikehade arv ja määratakse nende klassid. Tulemus sõltub proovi optilisest tihedusest, testsüsteemist, millel ELISA tehti, ja ka laborist.
ELISA abil tuvastatud haigused
ELISA on vereanalüüs, mis võimaldab tuvastada tohutul hulgal erinevaid nakkushaigusi. Pealegi tuvastatakse võrdse täpsusega nii viirus- kui ka bakteriaalsed haigused. Näiteks immuunkomplekside moodustamise abil on võimalik tõestada järgmiste haiguste tekitajate antigeenide olemasolu:
Lisaks võimaldab ELISA tuvastada:
- Vähimarkerid - TNF (kasvaja nekroosifaktor), PSA (eesnäärme-spetsiifiline antigeen), CEA (vähi-embrüonaalne antigeen), CA-125 (munasarja kasvaja marker)
- Rasedushormoon on hCG (inimese kooriongonadotropiin).
- Reproduktiivsüsteemi häired: naiste ja meeste reproduktiivsüsteemi hormoonid.
- Kilpnäärme patoloogia.
Oluline on mainida, et HIV-i ELISA test on tänapäeval peamine viis selle ohtliku haiguse diagnoosimiseks.
ELISA materjal ja proovivõtu tehnika
ELISA tegemiseks võetakse patsiendilt tühja kõhuga verd. Lisaks saadakse verest seerum, mida kasutatakse vahetult analüüsiks. Lisaks saab ELISA-d teha tserebrospinaalvedeliku (CSF), emakakaela lima (emakakaela), amnionivedeliku ja isegi klaaskeha vedeliku (silmamuna) suhtes.
Enne vereloovutamist hoiatatakse patsienti, et ta ei tohi mingeid ravimeid võtta ning ravi antibiootikumide ja viirusevastaste ravimitega on soovitatav lõpetada vähemalt kaks nädalat enne vereproovi võtmist.
Tulemuste kättesaamise ja tõlgendamise tingimused
Laborist vastuse saamise aeg ei sõltu selle töö kiirusest, vaid haiguse staadiumist ja sellest, millised antikehad on juba verre ilmunud. Näiteks: immunoglobuliinid M ilmuvad umbes 2 nädalat pärast vereanalüüsi võtmist ja tähendavad, et protsess on primaarse infektsiooni staadiumis või on toimunud kroonilise infektsiooni ägenemine. Samal ajal tekivad esmase nakatumise ajal klasside M ja G antikehad. Veelgi enam, viimast saab tuvastada 4 nädala pärast.
IgA ilmneb 2-3 nädala pärast kas üksi või koos M-ga, mis viitab ägedale infektsioonile või koos G-ga, mis näitab kroonilist protsessi.
Sellised erinevad terminid antikehade ilmumiseks veres panevad patsiendi tulemust kaua ootama. Pärast ELISA analüüsi tegemist on vastuvõetav oodata rohkem kui kuu. Arsti dekodeerimine ja tõlgendamine võtavad samuti teatud aja.
ELISA analüüs - mis see on? Selle diagnostilise meetodi täielikku nimetust nimetatakse ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsiks ja see põhineb erinevate klasside antikehade ehk immunoglobuliinide määramisel, mida inimkeha toodab perifeerses veres.
Arsti praktikas võtab ELISA analüüs väga olulise koha, kui on vaja diagnoosida mis tahes nakkuspatoloogiat. See analüüs näitab mitte ainult nakkushaiguse esinemise fakti, vaid ka patoloogilise protsessi staadiumi. Samuti on ELISA meetod näidustatud mitte ainult patogeeni suhtes: seda kasutatakse allergiliste seisundite diagnoosimiseks. See test võimaldab teil tuvastada probleeme immuunsüsteemis, paljude vereloomesüsteemi haiguste, autoimmuunsete ja muude häiretega.
Miks on ELISA-t vaja?
Kõik teadlased kalduvad arvama, et nimetus "antikeha" on valitud liiga halvasti. Kuid ikkagi peegeldab see immunoglobuliinide ühte olulist omadust: nad on võimelised siduma ja neutraliseerima kahjulikke aineid, lähenedes neile nagu "luku võti". Antikehade hulk veres ei peegelda mitte ainult organismi üldist kaitsevõimet infektsioonide eest, vaid ka võimet moodustada ringlevaid immuunkomplekse, mis võivad tekkida erinevate autoimmuunhaiguste, näiteks reumatoidartriidi või anküloseeriva spondüliidi korral.
Antikehade kompleksid antigeeniga (nakkusliku iseloomuga kahjulik tegur) on organismi reaktsiooni tulemus "võõraste" sissetoomisele. Seetõttu õpib immuunsüsteem neid ära tundma, lümfotsüütide abil treenib immuunkompetentseid rakke ning need on võimelised tootma väga spetsiifilisi antikehi. Seega paiknevad Epsteini viiruse antikehad erinevalt viirusliku C-hepatiidi või E. coli vastased antikehad ja A-hepatiidi viiruse vastased antikehad ehk antikehad erinevalt kõhrekoe vastastest autoantikehadest. Just immunoglobuliinide kõrge spetsiifilisus ja vastavus nakkuslikule patogeenile muudab sellise laboriuuringu kui vere ensüümimmunoanalüüsi kõrge väärtusega.
Pärast antikehade ja antigeenide tugevat ühendamist üheks kompleksiks (antigeen-antikehaks) kaotavad kahjulikud tegurid oma võime kahjustada kehakudesid ning seejärel need kompleksid kas neutraliseeritakse või lüüsitakse neutrofiilide poolt fagotsütoosi teel ja “seedituna” lahkuvad kehast. keha.
ELISA vereanalüüs võib näidata, millise konkreetse patogeense teguriga meie keha silmitsi seisab, millises staadiumis on organismi koostoime infektsiooniga. Pärast uuringut saab arst teha suure kindlusega prognoosi, määrata teatud tüüpi ravi ja mõnel juhul isegi määrata patsiendi eeldatava eluea, eriti krooniliste viirusnakkuste, näiteks viirusliku C-hepatiidi korral.
Kuid mõnel juhul pole kehas nakkustekitajaid üldse ja antikehad tungivad "kogemata" oma organitele ja kudedele, kuna immuunkompetentsed rakud on saanud valeteavet. Selliseid haigusi nimetatakse autoimmuunsusteks ning ensüümimmuunanalüüs aitab ka seda kroonilist patoloogiat ära tunda ja aitab diagnoosimisel.
Lisateavet immunoglobuliinide kohta
Kokku toodab inimkeha 5 tuntud klassi antikehi, mis on määratud Ig(mis tähistab immunoglobuliine), mis kuuluvad klassidesse A, M, G, E ja D. Kõik need on ELISA analüüsi tulemuste tõlgendamisel väga olulised. Muidugi on komplekse palju rohkem ja kõik need pole veel avatud. Kuid erinevate haiguste diagnoosimisel on kõige väärtuslikumad kolm esimest tüüpi antikehad. ELISA vereanalüüs kasutab maksimaalselt teavet: antikehade verre ilmumise hetk, nende kontsentratsiooni muutus sõltuvalt ajast, kadumise aeg ja spetsiifiliste antikehade tüüp.
Niisiis on esmases ägedas nakkusprotsessis osalejad M-klassi immunoglobuliinid, mis viitavad alati ägedale faasile, isegi kui haiguse kliiniline kulg on kustutatud. Tüüpiline näide on ägeda viirushepatiidi B või C anikteerne vorm. Hepatiidi ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs näitab, et inimesel on äge hepatiit ja sümptomid, nagu valu hüpohondriumis, suukuivus, valulikud liigesed ja muud spetsiifilised sümptomid muutuvad kergesti mõistetavaks.
Paar nädalat hiljem leitakse neid antikehi üha enam kaduvates kontsentratsioonides, andes järele G-klassi immunoglobuliinidele. Neid määratakse veres mitu kuud ja isegi aastaid ning need viitavad kas paranemisele ja võivad seejärel jääda kogu eluks, moodustades tugev immuunsus. See näitab tugevat kaitset patogeenide antigeenide vastu. Niisiis, just selle klassi antikehad muudavad inimese immuunseks korduvate siberi katku ja katku juhtude suhtes. Kuid on juhtumeid, kui need antikehad ei mõjuta nende kahjulikku toimet antigeenide juuresolekul. Sel juhul võime rääkida kroonilise protsessi aktiivsuse suurenemisest.
Esiteks peate mõistma, et sellist analüüsi pole - "ELISA jaoks lihtsalt veri". Analüüs tehakse hepatiidi, mõnikord ureaplasma või süüfilise suhtes. Seega saab ELISA jaoks vere annetamist ainult sihipäraselt suunata, "tellides" soovitud infektsiooni otsimise. See on lihtsalt nii arusaamatu, miks annetada verd veenist, teadmata, mida otsida. Seetõttu on ensüümi immuunanalüüsi meetod võimas tööriist, mis on diagnostilises otsingus oluline. Selle analüüsi saab määrata ainult arst, kuna ta otsib sihikindlalt infektsiooni, mida need sümptomid iseloomustavad. Tavainimene võib muidugi tellida 150 ELISA vereanalüüsi “kõikide infektsioonide” jaoks, kuid see oleks ebamõistlik ja kulukas lähenemine diagnoosimisele, võttes analüüsid kõige kohta.
Nende analüüside määramine on kõige nõudlikum järgmiste haiguste ja seisundite puhul:
Erinevad mikroobsed ja viirusnakkused, nakkushaiguste sümptomid - lööve, palavik, kollatõbi, lümfisõlmede turse, kõhulahtisuse sündroom, sugulisel teel levivate haiguste kahtlus.
ELISA meetod aitab määrata ureaplasma ja mükoplasma, süüfilise ja klamüüdia, tuberkuloosi ja tsütomegaloviiruse infektsiooni, herpese, viirushepatiidi ja Epstein-Barri viiruse esinemise. Praegu saab ensüümi immuunanalüüsi meetodil kontrollida ligikaudu 500 erinevat infektsiooni,
Kui kahtlustate helmintia invasiooni ja selliseid sümptomeid nagu allergiad, eosinofiilia veres, sügelus, düspepsia ja kehakaalu langus,
Quincke ödeemi, urtikaariat, õhupuudust ja astmaatilise lämbumise rünnakuid põhjustavate allergeenide tuvastamisel.
Sel juhul tuvastatakse spetsiifiline Ig E ja on olemas terved allergopaneelid, mis aitavad allergeeni täpselt määrata - kalmaar või krevetid, dafniat sisaldav kuiv kalatoit, kodutolm. Heinapalaviku korral võimaldab see meetod leida täpselt teravilja, põõsa või puu, mis põhjustab kevadist aevastamist ja pisaravoolu,
- See meetod on näidustatud autoimmuunhaiguste kahtluse korral, mida ravivad reumatoloogid,
- Kui kahtlustatakse kasvaja kasvu ja aktiivsust,
- Immuunpuudulikkuse seisundite ja HIV-nakkuse kompleksses diagnostikas
- Verehaiguste ja siirdamise korral immuunsuse igakülgseks hindamiseks, näiteks enne maksa- või neerusiirdamist.
Nüüd teame, miks peate ELISA jaoks verd loovutama. Uurime, kuidas seda uurimistööd tehakse.
Kuidas analüüsi tehakse?
Klassikaline materjal on patsiendi venoosne veri. Vajadusel saab aga uurida väga erinevaid vedelikke ja kudesid: lima, sülge, emakakaela sekretsiooni, tserebrospinaalvedelikku, silma klaaskeha, nabaväädi sisu ja lootevett. Oluline on meeles pidada, et erinevate ravimite võtmine, liigne füüsiline aktiivsus, alkoholi kuritarvitamine võivad analüüside tulemusi oluliselt moonutada.
Selle analüüsi tegemiseks on mitu meetodit. Kõige sagedamini kasutatakse kliinilistes laborites fotomeetrilist meetodit. Sel juhul kasutatakse värvainega märgistatud aineid, mille reaktsiooni ja antigeeni-antikeha kompleksi märgistamise järel nende värvus muutub. Selle tulemusena muutub ka lahuse optiline tihedus ja see muutus on otseselt võrdeline tuvastatud antikehade kontsentratsiooniga. Nende kõrvalekallete mõõtmiseks on edukalt kasutatud laboratoorseid spektrofotomeetreid.
Samuti kasutatakse ELISA läbiviimiseks fluorimeetrilist meetodit, mille aluseks on fluorestsents. Ka siin arvutatakse uuritavatele proovidele settinud fluorestseeruvate ainete intensiivsus.
Lõpuks kasutatakse immuunanalüüsides ensüümide aktiivsuse määramiseks elektrokeemilisi meetodeid, mis on antigeenide ja antikehade spetsiifilised märgised. ELISA meetod ise hõlmab kõige sagedamini selliste ensüümide kasutamist nagu leeliseline fosfataas, mädarõika peroksidaas ja galaktosidaas. Need ensüümid on võimelised seonduma antikehade või antigeenidega ja neid oma aktiivsuse tõttu märgistama.
Meetodi miinused ja selle eelised
Ilmsed "eelised" hõlmavad analüüsi demokraatlikku maksumust, selle sõeluuringu võimalust suurtes elanikkonnarühmades, näiteks rasedate naiste HIV-i uurimisel. Ensüümi immuunanalüüsi meetod on üsna spetsiifiline ja seda saab kasutada paljude haiguste ravikvaliteedi kontrollimiseks. Oluline on, et analüüs valmiks kiiresti ning oleks lihtne ja patsiendile ohutu.
Siiski on palju lõkse. Seega, kui immunoglobuliine ei tuvastata, ei tähenda see haiguse 100% puudumist. Lõppude lõpuks ei pruugi keha immuunpuudulikkuse taustal antikehade sünteesiks lihtsalt "tugev olla". Kui patsiendil on raske maksapuudulikkus, ei suuda maks lihtsalt sünteesida valku - antikehade ehitusmaterjali. Sel juhul nimetatakse tulemust seronegatiivseks ning nakkuse kinnitus on vajalik otsese ja kõige arenenuma uurimismeetodi – PCR ehk polümeraasi ahelreaktsiooni – abil. Erinevalt ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsist ei näita see meetod organismi reaktsiooni nakkusprotsessile (mis võib olla defektne või üldse puududa), PCR määrab otse päriliku materjali või leitakse patogeen ise.