Antikoagulantide mehhanisme esindavad kaks antikoagulantide rühma: füsioloogilised, mis tekivad sõltumatult vere hüübimisest ja fibrinolüüsist ning antikoagulandid, mis tekivad vere hüübimise ja fibrinolüüsi käigus. Esimeste hulka kuuluvad antitrombokinaasid (antitromboplastiinid), antitrombiinid, hepariin jne. Kõigil neil on inhibeeriv toime vere hüübimisprotsessi erinevatele faasidele. Antitrombokinaasid pärsivad vere hüübimise algfaasi ja pärsivad sellest tuleneva trombokinaasi aktiivsust. Antitrombiinid aeglustavad protrombiini muutumist trombiiniks ja takistavad trombiini mõju fibrinogeenile. Hepariin häirib trombokinaaside teket, inaktiveerib trombiini, seob fibrinogeeni, st. pärsib hüübimisprotsessi kõiki faase. Teise rühma antikoagulante kuuluvad ained, mis tekivad vere hüübimise ja fibrinolüüsi tulemusena ning millel on antikoagulantne toime. Inhibeerivad mehhanismid eksisteerivad vere hüübimise igas faasis. Normaalne veresoonte endoteel mängib teadaolevat rolli trombotsüütide ja kontakthüübimisfaktorite sisenemise tõkestamisel hüübimisprotsessi.
Defibrineeritud vere valmistamiseks kasutatakse kõige sagedamini trikaalhapet, etüleendiamiintetraäädikhapet (EDTA), trinaatriumtsitraati ja hepariini. Esimesed kaks ainet pärsivad hüübimist, eemaldades verest kaltsiumi.
Teadaolevatest 1. hüübimisfaasi antikoagulantidest on suurima füsioloogilise tähtsusega α-2-globuliinidega seotud aktiveeritud XI (XIa) faktori ja antitromboplastiinid (III faktori ja VIIa faktori kompleksi inhibiitorid). Koagulatsiooni 2. faasi inhibiitorite hulka kuuluvad antitrombiin II – vere α-2-γlobuliin; inhibeerib mitte ainult trombiini, vaid ka teisi aktiveeritud hüübimisfaktoreid - Xa, IXa, XIa, XIIa, kallikreiini. Antitrombiin III moodustab suurema osa spontaansest antikoagulandist, mis määrab selle juhtiva rolli vere vedela seisundi säilitamisel ja tromboosi ennetamisel. Teiste looduslike antitrombiinide - α-2-makroglobuliini ja α-1-antitrüpsiini osakaal moodustab ainult umbes 25% defibrineeritud vereplasma antikoagulandi aktiivsusest.
Fibrinolüüsi viib läbi vere proteolüütiline ensüümsüsteem- plasmaheplasmiin. Plasminogeeni muundumine aktiivseks vormiks toimub aktivaatorite abil, mida leidub vereplasmas, uriinis ja erinevates veresoonte endoteelis moodustuvates kudedes. Uriinis leiduvat aktivaatorit (urokinaasi) toodavad neerud. Mõned bakteriaalse päritoluga tooted, eriti streptokinaas, on samuti võimelised aktiveerima plasminogeeni.
Aktivaatorite mõjul toimub plasminogeeni molekuli ensümaatiline lõhustumine ja moodustub plasmiin, millel on selgelt väljendunud proteolüütiline omadus fibriin-fibrinogeeni suhtes (lisaks VII, V faktorid, komplement ja mõned hormoonid). Fibrinogeeni lüüs toimub mitmes etapis. Esiteks, pärast väikeste fragmentide A, B, C eraldamist moodustub kõrgmolekulaarne X-fraktsioon. Seejärel jagatakse see D- ja Y-fraktsioonideks. Seejärel jagatakse Y-fraktsioon teiseks D-fraktsiooniks ja täiendavaks E-fraktsiooniks.
D- ja E-murrud on fibrinogeeni lagunemise lõpp-produktid. Lahustuva fibriini lagunemine plasmiini toimel on sarnane fibrinogeeni omaga, välja arvatud see, et esimeses etapis pole väikseid fragmente. Stabiliseeritud fibriini lagunemist iseloomustab D-fraktsiooni asemel kahekordse suurusega D-dimeeri fragmendi moodustumine.
Ensümaatilist fibrinolüüsi toetavad hepariini kompleksühendid fibrinogeeni, adrenaliini, uurea, plasmogeeniga, millel on võime lüüsida stabiliseerimata fibriini hüübimist (mitteensümaatiline fibrinolüüs). Fibriini võivad lüüsida leukotsüütide poolt sekreteeritud proteaasid, mis osalevad fibrinolüüsis ka leukotsüütide plasminogeeni aktivaatorite vabanemise ja fibriini lagunemissaaduste fagotsütoosi kaudu.
Fibrinolüüsi terapeutiline stimuleerimine viiakse läbi bakteriaalse päritoluga ensüümide (streptokinaas jne) või urokinaasi abil.
Vere fibrinolüütilisest aktiivsusest annab aimu selle määramine euglobuliini meetodil. Kowalski meetod (vere hüübimis- ja fibrinolüüsifaktoreid, peamiselt plasminogeeni sisaldava euglobuliini fraktsiooni sadestamine happelises keskkonnas ja madalal temperatuuril). 0,1 ml oksalaadi plasmat (1: 9) pannakse tsentrifuugitorusse, lisatakse 1,8 ml happelist vett (pH 5,2), katsut asetatakse külmikusse temperatuurile 4 ° C (sel juhul kukub euglobuliini fraktsioon välja plasmast). 30 minuti pärast toru eemaldatakse ja tsentrifuugitakse 10 minutit kiirusel 2000 p/min. Supernatant imetakse ära, sademele lisatakse 0,1 ml naatriumboraati ja asetatakse mitmeks minutiks 37 °C termostaadi, kuni sade on täielikult lahustunud. Lisage 0,1 ml kaltsiumkloriidi lahust (euglobiini fraktsioonis sisalduv fibrinogeen muudetakse fibriiniks). Märgitakse üles trombi moodustumise aeg ja katseklaas asetatakse termostaadi, kuni tromb on täielikult lüüsitud. Aeg trombi moodustumise hetkest kuni selle lahustumiseni väljendab vere fibrinolüütilist aktiivsust, mis on tavaliselt 3-4 tundi.
Kasutatakse fibrinolüüsi uurimise meetodeid, mis põhinevad täiendaval standardiseeritud aktiveerimisel streptokinaasi poolt, samuti meetodeid fibrinolüüsi produktide tuvastamiseks vereplasmas - FDP (immunoloogiline ja keemiline) ja nende ühendid fibriini monomeeride ja fibrinogeeniga (parakoagulatsioonitestid), meetodid mittevastavate ainete uurimiseks. - ensümaatiline fibrinolüüs vastavalt B. A. Kudrjašov.
Fibrinolüüsi uurimisel tuleb meeles pidada, et plasmiin ja selle aktivaatorid fikseeritakse trombides ja trombides, samas kui ringlevas veres fibrinolüüsi protsessi aktiveerimisel nende kontsentratsioon väheneb.
Ülaltoodud meetodite 1. ja 3. rühmal on fibrinolüütilise süsteemi seisundi hindamisel suurim kliiniline tähtsus.
1. Euglobuliini trombide lüüsimise aeg -kõige olulisem põhimeetod fibrinolüüsi süsteemi uuringud, mis võimaldavad tuvastada plasminogeeni moodustumise sisemiste ja väliste mehhanismide seisundit.
Põhimõte: trombotsüütidevaba plasma euglobuliinifraktsioonist moodustunud trombi spontaanse lüüsimise aja määramine, kui sellele on lisatud kaltsiumkloriidi lahust.
Tavaliselt toimub trombi lüüs 3-5 tunni jooksul.
Selle aja lühenemine näitab plasma fibrinolüütilise aktiivsuse suurenemist.
osariik sisemine mehhanism plasminogeeni aktiveerimine - uuring viiakse läbi põhilise ainevahetuse tingimustes (hommikul tühja kõhuga, enne kui patsient voodist tõuseb).
Omaduste jaoks väline mehhanism määrake trombi lüüsi aeg pärast veresoonte eelnevat kokkusurumist mansetiga, mis tekitab 10-15 minutiks rõhu 80 mm Hg. Art., samuti pärast füüsilist tegevust (test veloergomeetril või jooksulindil). Nendel juhtudel vabaneb välismehhanismi normaalse toimimise käigus verre koetüüpi vaskulaarne aktivaator ja trombide lüüsimine kiireneb 1,5-2 korda.
Fibrinolüütilise süsteemi puudulikkuse nähud:
1) plasma euglobuliinifraktsiooni lüüsi aeglustumine (rohkem kui 5 tundi) metaboolsetes põhitingimustes;
2) süsteemi reageerimise puudumine plasminogeeni aktiveerimise välise mehhanismi stimulaatoritele (manseti test ja füüsiline aktiivsus jne).
Euglobuliini trombide lüüsi meetodil on ka teisi modifikatsioone. Näiteks võib trombi lahustumist oluliselt kiirendada kaoliini esialgne sisestamine plasmasse - see on fibrinolüüsi sisemise mehhanismi võimas kontaktaktivaator, mis on seotud tegurite kompleksi aktiveerimisega: faktor XII-kallikreiin-kininogeen (“ Hageman-kallikreiinist sõltuv fibrinolüüs). Tavaliselt kiirendatakse kaoliini sisseviimisega trombi euglobuliini lüüsimine 4-10 minutini.
2 Staphylococcus adhesiooni test - väikeste PDF- ja RFMC-koguste tuvastamine vereseerumis. Stafülokoki adhesioonitest põhineb spetsiifilise kinnitusteguriga stafülokokkide võimel aglutineerida kokkupuutel PDF-i ja RFMC-d sisaldava seerumiga. Klaasile kantakse tilk stafülokokkide standardsuspensiooni ja uuritavat seerumit, mis on lahjendatud 2, 4, 8, 16 ja 32 korda. Sõltuvalt lahjendusest, milles aglutinatsioonireaktsioon toimub, määratakse PDF ja RFMC kontsentratsioon.
Tromboosi, trombemboolia ja dissemineeritud intravaskulaarse koagulatsiooni sündroomi korral suureneb see näitaja märkimisväärselt.
V. HEMOSTASIOPAATIAD
hemostaatilise süsteemi haigused, mis on põhjustatud hemostaatilise süsteemi ühe või mitme struktuurse ja funktsionaalse komponendi: vereliistakute, veresoonte seina ja vere hüübimissüsteemi kaasasündinud, pärilikust või omandatud kahjustusest, mille tagajärjel on häiritud selle süsteemi põhifunktsioonid - säilitamine veri vedelas olekus ja verekaotuse vältimine
KLASSIFIKATSIOON
Kliiniliselt:
I. verejooks ja verejooks (hemorraagiline diatees, hemorraagiline hemostasiopaatia)
II. tromboos ja trombemboolia (trombofiilia, trombemboolia, trombofiilne hemostasiopaatia)
III. DIC sündroom, trombohemorraagiline hemostasiopaatia
I. HEMORRAAGILISED HEMOSTASIOPAATIAD (HEMORRAAGILINE DIATEES - pärilik kaasasündinud või omandatud haigus, mis on põhjustatud ühe, kahe või kolme hemostaatilise süsteemi komponendi (trombotsüüdid, verehüübimissüsteem, veresoonte sein) kahjustusest ja mida iseloomustab kalduvus spontaansele või traumajärgsele (operatsioonijärgsele) verejooksule
Klassifikatsioon domineeriva hemostaatilise defekti järgi:
1) KOAGULOPAATIA(verehüübimishäire, mis on tingitud peamiste verehüübimisfaktorite absoluutsest puudulikkusest)
§ osalemine protrombinaasi moodustumisel – VIII, IX, XI – hemofiilia
(retsessiivselt päritud, seotud X-kromosoomiga (hemofiilia A – VIII faktori süntees)
Jõulutõbi (hemofiilia B – IX faktori häire)
· autosoomne retsessiivselt pärilik haigus - hemofiilia C (XI faktori sünteesi häire)
· Hemofiilia A ja B - meestel, naistel - haiguse juhid
hemofiilia C - mõlemad sugupooled
Pärilike koagulopaatiate hulgas
o hemofiilia A - 68-79%
o hemofiilia B - 6-13%
o hemofiilia C - 1-2%
PATOGENEES: Faktorite defitsiit → trombi (trombi) moodustumise aeglustumine → verejooks
KLIINILINE PILT
o Veritsus ja veritsus lapsepõlvest peale
o Chr. artroos, kontraktuurid, lihaste atroofia, pseudotuumorid kõhuõõnes, liigestes ja reielihastes.
o Autoimmuunsündroomid: tekivad VIII ja IX faktorite antikehad (hemofiilia pärssiv vorm), sekundaarne reumatoidsündroom, neeru amüloidoos, autoimmuunaneemia
DIAGNOOS:
o anamneesis hematoomi verejooks (meestel)
o haiguse pärilik genees
o röntgenpilt hemartroosist.
o hemogramm: väljaspool haiguse ägenemist ei kaldu nad normist kõrvale. Protrombinaasi moodustumise muutused:
o venoosse vere hüübimisaeg Lee-White’i järgi on aeglustunud - üle 12 minuti (N 5-12 minutit);
o rikutakse autokoagulatsiooni testi (ACT) - 10. minutil (N 10-12 s)
o kaoliini-kefaliini aeg - üle 50 s (N 35-45 s)
o tromboplastiini genereerimise test (TGT) - 2-6 minuti pärast (N 8-10 s)
o Protrombiin ja trombiini aeg, trombi tagasitõmbumine, fibrinogeeni tase, trombotsüütide arv, luuderohi verejooksu kestus, veresoonte seina resistentsus on normaalsed. Kerge kuni mõõduka hemofiilia diagnoosimiseks on vaja kasutada ACT-d ning VIII, IX ja XI faktorite ning hüübimisinhibiitorite kvantitatiivset määramist
§ trombide moodustumisel - II, V, VII, X - parahemofiilia (düsprotrombia)
(pärilikud ja omandatud hemorraagilised hemostaasiopaatiad, mis on põhjustatud protrombiini kompleksfaktorite - II, V, VII või X - puudulikkusest)
Termin "hemolüüs" on üks kõige sagedamini kasutatavaid meditsiinilise tegevuse valdkondi. Paljud teavad selle eesmärki, teised arvavad, et verega on juhtunud midagi pöördumatut, kuna seda sõna hääldatakse tähendusrikkalt, teiste jaoks ei tähenda see mõiste mitte midagi, kui inimene on terve ega ole põhimõtteliselt meditsiinist huvitatud.
Hemolüüs veres toimub pidevalt, see lõpetab punaste vereliblede elutsükli, mis elavad 4 kuud, hävitatakse plaanipäraselt ja "surevad" - see sündmus jääb terve keha jaoks märkamatuks. Teine asi on see, kui punased verelibled lakkavad eksisteerimast täieõigusliku hapnikukandjana muudel põhjustel, mis võivad olla mitmesugused punaste vereliblede membraane hävitavad mürgid, ravimid, infektsioonid, antikehad.
Kus toimub hemolüüs?
Need võivad erinevates kohtades laguneda. Seda jaotust lokaliseerimise järgi eristades saab eristada järgmisi hemolüüsi tüüpe:
- Mõnikord mõjutab punaseid vereliblesid nende keskkond – ringlev veri ( intravaskulaarne hemolüüs)
- Muudel juhtudel toimub hävitamine nende elundite rakkudes, mis osalevad vereloomes või kogunevad moodustunud vereelemendid - luuüdi, põrn, maks ( intratsellulaarne hemolüüs).
Tõsi, trombi lahustumine ja plasma punaseks värvumine toimub ka katseklaasis (in vitro). Kõige sagedamini ilmneb vereanalüüsis hemolüüs:
- Materjali kogumise tehnika (näiteks märg toru) rikkumise või vereproovide säilitamise reeglite mittejärgimise tõttu. Reeglina toimub sellistel juhtudel seerumis hemolüüs trombi moodustumise ajal või pärast seda;
- See provotseeritakse tahtlikult laboriuuringuteks, mis nõuavad vere esialgset hemolüüsi või õigemini punaste vereliblede lüüsi, et saada teiste rakkude eraldi populatsioon.
Arutades hemolüüsi tüüpe kehas ja väljaspool, arvame, et oleks kasulik lugejale meelde tuletada plasma ja seerumi erinevust. Plasma sisaldab selles lahustunud valku - fibrinogeeni, mis seejärel polümeriseerub fibriiniks, mis moodustab trombi aluse, mis vajub toru põhja ja muudab plasma seerumiks. Vere hemolüüsi korral on see põhimõttelise tähtsusega, kuna normaalses füsioloogilises seisundis veresoonkonnas olev veri ei hüübi. Tõsine seisund, mis tekib äärmiselt ebasoodsate teguritega kokkupuute tagajärjel - intravaskulaarne hemolüüs või viitab ägedatele patoloogilistele protsessidele, mis nõuavad inimese elu päästmiseks palju pingutusi. Kuid isegi siis räägime plasmast, mitte seerumist, sest seerumit täiskujul täheldatakse alles väljaspool elusorganismi, pärast kvaliteetse, peamiselt fibriini niitidest koosneva trombi moodustumist.
Biokeemilisi vereanalüüse, mis on võetud koos antikoagulandiga ja uuritud plasmas või võetud ilma antikoagulantlahuseid kasutamata kuivas katsutis ja uuritud seerumis, ei saa kasutada. Punaste vereliblede hemolüüs proovis on uuringu vastunäidustuseks, kuna tulemused on moonutatud.
Hemolüüs kui loomulik protsess
Nagu eespool mainitud, toimub kehas teatud määral pidevalt hemolüüs, sest vanad, kasutatud punased verelibled surevad ja nende asemele tulevad uued - noored ja töövõimelised. Looduslik või füsioloogiline hemolüüs, mis esineb terves kehas püsivalt, tähistab vanade punaste vereliblede loomulikku surma ja see protsess toimub maksas, põrnas ja punases luuüdis.
Teine asi on see, kui punastel verelibledel on veel aega elada ja elada, kuid mõned asjaolud viivad nad enneaegse surmani - see on patoloogiline hemolüüs.
Väga ebasoodsad tegurid, mis mõjutavad diskotsüüte (mis on normaalsed punased verelibled), muudavad need sfääriliseks, põhjustades membraani korvamatut kahjustust. Rakumembraan, millel pole oma olemuselt erilist venitusvõimet, lõpuks puruneb ja punaste vereliblede () sisu väljub vabalt plasmasse.
Punase verepigmendi plasmasse eraldumise tulemusena muutub see ebaloomulikuks värviks. Lakkveri (säravpunane seerum) on hemolüüsi peamine märk, mida saab oma silmaga jälgida.
Kuidas see avaldub?
Krooniline hemolüüs, mis kaasneb mõne haigusega ja esineb ühe sümptomina (sirprakuline), ei anna erilisi ilminguid - see on loid protsess, kus kõik ravimeetmed on suunatud põhihaigusele.
Muidugi, ükskõik kui palju me ka ei püüaks, ei näe me loomuliku hemolüüsi märke. Nagu teisedki füsioloogilised protsessid, on see looduse poolt programmeeritud ja kulgeb märkamatult.
Ebakorrapärase kujuga punased verelibled, mis lagunevad sirprakulise haiguse korral
Äge hemolüüs nõuab kiireid ja intensiivseid meetmeid, mille peamised põhjused on:
Ägeda hemolüüsi tekkimisel ilmnevad patsiendi kaebused ainult siis, kui ta on teadvusel ja suudab oma tunnetest teatada:
- Rindkere terav kokkusurumine;
- Kuumus ilmub kogu kehas;
- Valu rinnus, kõhus, kuid eriti nimmepiirkonnas ( alaseljavalu on tüüpiline hemolüüsi sümptom).
Objektiivsed märgid hõlmavad järgmist:
- Vererõhu langus;
- Väljendunud intravaskulaarne hemolüüs (laboratoorsed uuringud);
- Näo hüperemia, mis peagi annab teed kahvatuks ja seejärel tsüanoosiks;
- Ärevus;
- Tahtmatu urineerimine ja roojamine viitab haigusseisundi suurele raskusastmele.
Ägeda hemolüüsi nähud kiiritus- ja hormonaalravi saavatel või anesteesia all olevatel patsientidel kustutatakse ja ei ilmne nii selgelt, mistõttu võib neid märkimata jätta.
Lisaks on vereülekande tüsistustel järgmine iseärasus: paari tunni pärast protsessi raskusaste taandub, vererõhk tõuseb, valu eriti ei häiri (alaseljas jääb valutama), seega tundub, et on "ära läinud". Kahjuks ei ole. Mõne aja pärast taastub kõik normaalseks, kuid ainult uue jõuga:
- Kehatemperatuur tõuseb;
- Kollatõbi suureneb (sklera, nahk);
- Tugev peavalu häirib teid;
- Domineerivaks sümptomiks on neerude funktsionaalsete võimete häire: eritunud uriini hulga järsk vähenemine, mille puhul tekib palju vaba valku ja hemoglobiini ning uriinierituse lakkamine. Selles etapis ebaefektiivse ravi (või selle puudumise) tagajärjeks on anuuria, ureemia ja patsiendi surm.
Ägeda hemolüüsi seisundis võetakse patsiendilt ravi ajal pidevalt vere- ja uriinianalüüse, mis annavad arstile teavet muutuste kohta paremuse või halvemuse suunas. Vere poole pealt on:
- Kasvav aneemia (punased verelibled hävivad, hemoglobiin vabaneb plasmasse);
- , punaste vereliblede lagunemise saadus (hüperbilirubineemia);
- Häired hüübimissüsteemis, mis ilmnevad.
Mis puutub uriini (kui seda on), siis isegi värvi järgi on juba näha hemolüüsi tunnused (värvus on punane ja mõnikord must), biokeemilise uuringuga - hemoglobiin, valk, kaalium.
Ravi
Ägeda hemolüüsi (hemolüütiline kriis, šokk) ravi nõuab alati viivitamatuid meetmeid, mis aga sõltuvad selle arengu põhjusest ja patsiendi seisundi tõsidusest.
Patsiendile määratakse vereasenduslahused, vereasendus (HDN-ga vastsündinutel), plasmaferees, manustatakse hormoone, tehakse hemodialüüsi. Kuna patsient ise ega tema lähedased ei tule sellise seisundiga kodus mitte mingil juhul toime, pole kõigi raviskeemide kirjeldamisel mõtet. Lisaks toimub teatud ravitaktika vastuvõtmine kohapeal, kõigi tegevuste käigus, lähtudes pidevast laboratoorsest jälgimisest.
Patoloogilise hemolüüsi põhjused ja tüübid
Hemolüüsi tüübid olenevalt selle arengu põhjustest on erinevad, nagu ka põhjused ise:
Punaste vereliblede omaduste uurimisel teatud haiguste diagnoosimisel on mõnikord vajalik vereanalüüs, näiteks erütrotsüütide osmootne resistentsus (ORE), mida käsitleme eraldi, kuigi see on otseselt seotud osmootse hemolüüsiga.
Punaste vereliblede osmootne resistentsus
Punaste vereliblede osmootne resistentsus määrab nende membraanide stabiilsuse, kui need asetatakse hüpotoonilisse lahusesse.
OSE juhtub:
- Minimaalne– nad räägivad sellest, kui vähem resistentsed rakud hakkavad 0,46–0,48% naatriumkloriidi lahuses kokku varisema;
- Maksimaalne– kõik vererakud lagunevad NaCl kontsentratsioonil 0,32–0,34%.
Erütrotsüütide osmootne resistentsus sõltub otseselt rakkude kujust ja nende küpsusastmest. Punaste vereliblede kuju iseloomulik tunnus, mis mängib rolli nende stabiilsuses, on sfäärilisuse indeks (paksuse ja läbimõõdu suhe), mis on tavaliselt 0,27–0,28 (ilmselgelt on erinevus väike).
Sfääriline kuju on iseloomulik väga küpsetele punaverelibledele, mis on oma elutsükli lõppemise äärel, selliste rakkude membraanide stabiilsus on väga madal. Hemolüütilise aneemia korral viitab sfääriliste (sferoidsete) vormide ilmnemine nende vererakkude kiirele surmale, see patoloogia vähendab nende eeldatavat eluiga 10 korda, nad ei saa oma funktsioone täita kauem kui kaks nädalat, seega pärast veres esinemist 12-14 päeva pärast nad surevad. Seega suureneb hemolüütilise aneemia sfääriliste vormide ilmnemisega ka sfäärilisuse indeks, mis muutub erütrotsüütide enneaegse surma märgiks.
Luuüdist äsja lahkunud noored rakud on hüpotensiooni suhtes kõige vastupidavamad. ja nende eelkäijad. Lameda kuju ja madala sfäärilisuse indeksiga noored erütrotsüüdid taluvad selliseid tingimusi hästi, seetõttu saab erütropoeesi intensiivsuse ja vastavalt ka punase luuüdi vereloome aktiivsuse iseloomustamiseks kasutada sellist näitajat nagu erütrotsüütide osmootne resistentsus.
Üks väike küsimus
Kokkuvõtteks tahaksin puudutada ühte väikest teemat, mis vahepeal patsientidele sageli huvi pakub: punaste vereliblede hemolüüs teatud ravimitega ravi ajal.
Teatud ravimid põhjustavad punaste vereliblede suurenenud hävimist. Nendel juhtudel peetakse punaste vereliblede hemolüüsi ravimi kõrvaltoimeks, mis kaob pärast ravimi kasutamist. Selliste ravimite hulka kuuluvad:
- Mõned valuvaigistid ja palavikuvastased ravimid (atsetüülsalitsüülhape ja aspiriini sisaldavad ravimid, amidopüriin);
- Üksikisikutel (näiteks diakarb) ja nitrofuraani seeria ravimitel (furadoniin) on sarnased puudused;
- Paljudel sulfoonamiididel (sulfaleen, sulfapüridasiin) on samuti kalduvus erütrotsüütide membraane enneaegselt hävitada;
- Punaste vereliblede membraani võivad mõjutada ravimid, mis vähendavad (tolbutamiid, kloorpropamiid);
- Tuberkuloosi raviks mõeldud ravimid (isoniasiid, PAS) ja malaariavastased ravimid (kiniin, kiniin) võivad põhjustada punaste vereliblede hemolüüsi.
Erilist ohtu see nähtus organismile ei kujuta, paanikaks pole põhjust, kuid kahtlustest tuleks siiski teatada arstile, kes probleemi lahendab.
Video: eksperiment - punaste vereliblede hemolüüs alkoholi mõju all
Kliiniku jaoks on äärmiselt oluline tuvastada nii vere fibrinolüütilise aktiivsuse suurenemine kui ka selle vähenemine, mis võib olla seotud kas plasminogeeni ja selle aktivaatorite intensiivse tarbimisega nende aktiveerumisel ja trombides ja trombides fikseerimisel või plasma antiplasmiini ja antiaktivaatori aktiivsuse suurenemine. Alati tuleb meeles pidada, et verehüüvete ja trombide intensiivne fibrinolüüs, mis tuvastatakse PDP sisalduse suurenemisega plasmas, on loomulikult ühendatud plasminogeeni ja selle aktivaatorite reservi vähenemisega plasmas (tsirkuleerivas veres).
Loomuliku trombi lüüsi seisund
Üldine arusaam loomuliku trombi lüüsi seisundist oskab anda V. P. Baluda modifitseeritud või E. P. Ivanovi modifitseeritud Kotovštšikova-Kuzniku meetodit.
Meetodi põhimõte seisneb selles, et võttes arvesse hematokriti arvu ja punaste vereliblede sisaldust veres, määratakse viimaste arv, mis teatud inkubatsiooniperioodi jooksul trombist välja sadenes. Vere fibrinolüütilise aktiivsuse suurenemisega suureneb selle fraktsiooni (kolmanda) erütrotsüütide maht. Sügava hüpokoagulatsiooni ja hüpofibrinogeneemia korral, mille korral moodustuvad defektsed ja lahtised trombid, võib see tehnika anda ekslikke tulemusi.
G. V. Andreenko modifitseeritud Bidwelli meetodi kohaselt hinnatakse fibrinolüüsi fibriini kadumise järgi trombidest.
Vereplasma euglobuliini fraktsiooni fibrinolüütilise aktiivsuse uuring
Vereplasma euglobuliini fraktsiooni fibrinolüütilise aktiivsuse uurimine on kõige olulisem baastest, mida kinnitab Euroopa Tromboosiühingu komisjon.
Selleks kasutatakse kas klassikalisi meetodeid trombide euglobuliini lüüsi määramiseks või euglobuliini fraktsiooni lüütilise aktiivsuse määramiseks fibriiniplaatidel (viimasel juhul tasandatakse fibriini erinevate koguste mõju testinäitudele). Nendes testides toimub lüüs tänu sellele, et plasminogeen ja selle aktivaatorid vabanevad euglobuliini fraktsiooni, samas kui fibrinolüüsi inhibiitorid enamasti eemaldatakse. Seetõttu hinnatakse euglobuliinitestide abil plasminogeeni ja selle aktivaatorite sisaldust vereplasmas.
Vere saamisel põhiainevahetuse tingimustes, s.o hommikul tühja kõhuga, enne kui patsient voodist tõuseb, ei ole veres peaaegu üldse kudede plasminogeeni aktivaatoreid. Järelikult määratakse sellistes tingimustes peamiselt plasminogeeni aktiveerimise sisemise (tegelikult vere) protsessi seisund.
Seda protsessi saab järsult kiirendada faktori XIIa-kallikreiin-BM kininogeeni kompleksi eelneva kontaktaktiveerimisega kaoliiniga, mille tulemusena väheneb euglobuliini lüüs 2,5-3 tunnilt 2-10 minutile. Selle kontakti aktiveerimise põhimõtte alusel määramismeetodidXIIa-sõltuv fibrinolüüs.
Veresoonte endoteeli võimet vabastada verre väline fibrinolüüsi aktivaator (koetüüpi aktivaator, ATT) hinnatakse euglobuliinide lüüsi kiirenemise järgi pärast veresoonte kokkusurumist vererõhu mõõteseadme mansetiga ( Oivin-Chekalina test), kas pärast doseeritud füüsilist aktiivsust veloergomeetril või koos farmakoloogilise stimulatsiooniga (vasopressiini derivaadid – desmopressiin või adiuretiin).
Kirjanduses on kirjeldatud paljusid nende tehnikate modifikatsioone.
Nii näiteks dirigeerimisel survekatse klassikalisel meetodil rõhk mansetis hoitakse 10,7 kPa (80 mm Hg) või 1,3 kPa (10 mm Hg) üle diastoolse rõhu 15-20 minuti jooksul ja testi kaasaegsema modifikatsiooniga B. P. Balude järgi - 3 minutit survega 1,3 kPa (10 mm Hg) üle süstoolse rõhu. Mõlemal juhul võetakse enne manseti eemaldamist kokkupressitud veresoontest verd uurimiseks teist korda.
Selliseid teste kasutades saab uurida kompressiooni mõju mitte ainult fibrinolüüsile, vaid ka veresoonte seinte teistele antitrombootilistele omadustele (antikoagulant, antiagregatsioon jne).
Koormustestid on standardiseeritud nii, et tavaliselt kiireneb euglobuliini lüüs 2 korda või rohkem (uuringu läbiviimine mitte põhiainevahetuse tingimustes toob kaasa väga suuri juhuslikke vigu, seetõttu ei tohiks patsient enne uuringu algust voodisse hommikul; veenipunktsioon tuleks teha palatis).
Vähendatud reaktsioon kompressioonile või koormus viitab fibrinolüütilise süsteemi ebapiisavale reaktiivsusele ja suurenenud trombogeensele riskile, mida on tõestanud mitmed uuringud.
Plasminogeeni sisaldus vereplasmas
Plasminogeeni sisaldus vereplasmas saab poolkvantitatiivselt hinnata, lisades euglobuliini fraktsioonile teatud annuse streptokinaasi. Slobozhankina-Fedorova meetodi kohaselt valitakse streptokinaasi aktiivsus, mis tagab euglobuliinide lüüsimise 9-11 minutiga, kuid on võimalik kasutada ka kõrgemaid kontsentratsioone (standardväärtused määratakse igas laboris eraldi). Plasminogeeni puudulikkuse korral pikeneb selle testi lüüsiaeg seda suuremal määral, mida vähem seda proensüümi esineb.
Plasma trombide lüüsi uuring
Plasma trombide lüüsi paralleelne uuring Sama meetodi kasutamine protsessi stimuleerimisel streptokinaasiga võimaldab hinnata antiplasmiini aktiivsust uuritavas vereplasmas saadud näitajate erinevuse järgi, kuna euglobuliini fraktsioonis antiplasmiini praktiliselt pole, kuid see on olemas koaguleeritud täisplasma.
Antiplasmiini kogus arvutatakse koefitsiendi järgi
(PLS-ELS)/ELS;
kus PLC on plasma trombi lüüsi aeg streptokinaasi juuresolekul,
ELS on euglobuliini trombi lüüsimise aeg sama streptokinaasi annuse juuresolekul.
Täpsem ja samal ajal hõlpsasti rakendatav meetodid fibrinolüüsi uurimiseks, mis põhinevad asofibriini lagunemisel, mis on fibriiniühend, mis on kovalentselt seotud kromogeense substraadiga (asopeptiid)
Meetodi põhimõte seisneb selles, et kolme katseklaasi lisatakse 10 mg asofibriini, segatakse puhvriga (pH 7,4), misjärel lisatakse kahele katseklaasile 0,15 ml uuritavat vereplasmat ja ühte neist veel 10 000. katseklaasid U/ml streptokinaas.
Pärast 1-tunnist inkubeerimist lahused filtritakse ja fotomeetritakse spektrofotomeetril lainepikkusel 440 nm või meditsiinilisel kolorimeetril sinise filtriga.
Plasma plasmiini aktiivsus määratakse proovis ilma streptokinaasita filtraadi optilise tiheduse muutus võrreldes 3. katseklaasi sisuga ja plasminogeeni sisaldus plasmas - streptokinaasiga proovis. Sama plasmiini ja uuritava plasma inkubeerimisel samal substraadil määratakse antiplasmiini aktiivsus. Normaalse vereplasma uurimisel saadud kontrollnäitajaid aktsepteeritakse 100%-na.
Seega on suhteliselt väikese hulga lihtsate laboratoorsete funktsionaalsete meetodite abil võimalik saada ettekujutus fibrinolüüsi erinevate mehhanismide seisundist, plasmasisaldusest ning plasminogeeni, selle aktivaatorite ja inhibiitorite vabanemisest veresoone seinast. .
Nagu vere hüübimissüsteemi uurimisel, saab neid andmeid oluliselt täiendada fibrinolüüsisüsteemi komponentide ning fibrinogeeni ja fibriini lagunemissaaduste immunoloogilise määramisega.
Intravaskulaarse koagulatsiooni ja fibrinolüüsi "tunnistajate" ja molekulaarsete markerite tuvastamise meetodid
Intravaskulaarse koagulatsiooni ja sellega seotud intensiivse fibrinolüüsi protsessis toimub ühelt poolt tarbimine ja mitmete hemostaatilise süsteemi komponentide taseme enam-vähem väljendunud langus veres ning teiselt poolt nende osade, fragmentide ja metaboliitide välimus, mis normaalses vereplasmas puuduvad või sisalduvad väikestes kogustes.
Selliste intravaskulaarse koagulatsiooni ja fibrinolüüsi aktiveerimise "tunnistajate" ja markerite tuvastamisel on oluline diagnostiline väärtus DIC-sündroomide, trombembooliliste haiguste ja erineva päritoluga (nakkus-, immuun-, kasvaja- jne) mikrotrombovaskuliidi korral.
Hemostaasi trombotsüütide komponendi tarbimise ja aktiveerimise markerid
Hemostaasi trombotsüütide komponendi tarbimise ja aktiveerumise markeriteks on trombotsütopeenia, graanulikomponentide - trombotsüütide antihepariinifaktor 4 (3-tromboglobuliin jne) - plasmataseme tõus, samuti funktsionaalselt vähem aktiivsete ja halvemini agregeeruvad vereliistakud.
Veresoonte endoteeli kahjustuse ja funktsionaalse halvemuse peamised markerid on von Willebrandi faktori taseme tõus vereplasmas, euglobuliini lüüsireaktsiooni nõrgenemine veresoonte kokkusurumise ajal mansetiga, füüsiline aktiivsus või vasopressiini analoogide manustamine. .
Hüperkoagulatsioon
Hüperkoagulatsioon, kui see on olemas, võib olla märk vere hüübimissüsteemi aktiveerumisest. See tuvastatakse üldiste hüübimistestide ja instrumentaalsete uurimismeetodite (tromboelastograafia) abil ning kliinikus - veenist vere võtmise raskuse põhjal - nii veresoone enda kui ka nõelte kerge tromboos, samuti veresoonkonna mittetäielik stabiliseerumine. veri segamisel tsitraadiga (moodustumine katseklaasis makro- ja mikrohüübed).
Selline osaliselt koaguleeritud veri on hemostaasisüsteemi edasiseks uurimiseks täiesti sobimatu, seetõttu tuleb enne vere tsentrifuugimist kindlasti kontrollida, kas selles pole trombe. Kui verehüübed esinevad, siis verd täiendavalt ei uurita (kuid seda saab kasutada seerumi valmistamiseks ja mitmete biokeemiliste testide tegemiseks). Kogemused näitavad, et selle soovituse ebapiisavalt range järgimine põhjustab sageli hemostaatilise süsteemi uurimisel suuri vigu.
Paljude testide hüperkoagulatsioon ei näita veel trombogeense ohu olemasolu. Lisaks on teada suur hulk trombofiiliaid, mida iseloomustab esialgne hüpo-, mitte hüperkoagulatsioon. Nende hulka kuuluvad XII faktori, prekallikreiini ja VM kininogeeni vaegusest põhjustatud trombofiilia, düsfibrinogeneemia, valgu C vaegus jne. Hüübimisvõime praktiliselt ei muutu kalduvusega tromboosi tekkeks hematokriti suurenemise tõttu (sageli täheldatakse hüpokoagulatsiooni), trombotsüteemia, fibrinolüüs. ja jne.
Esitatud põhjuste põhjal on võimatu samastada hüperkoagulatsiooni trombogeense ohuga, mille tõttu ei kuulu see märk praegu trombofiilia häbimärgiste hulka.
XIIa + kallikreiini ja VII faktori vahelise "silla" aktiveerimine
XIIa + kallikreiini ja VII faktori vahelise "silla" aktiveerumine, mis tuvastatakse veise tromboplastiiniga protrombiini aja uurimisel enne ja pärast testitava vereplasma jahutamist 18-24 tunni jooksul temperatuuril +4°C (külmaktivatsioon). test). Paljude trombofiilia korral väheneb pärast jahutamist protrombiiniaeg 25-50%. Muud tromboplastiinid peale veiste tromboplastiinide selle uuringu jaoks ei sobi.
Vaba peptiidi A olemasolu vereplasmas
Immunoloogiliste meetoditega tuvastatud vaba peptiidi A olemasolu vereplasmas on trombineemia otseseks tõendiks, kuna trombiin lõikab peamiselt fibrinogeeni molekulist peptiide A. Selle tehnika kättesaadavus on piiratud, kuna immuunvastast anti-A on raske saada. seerum.
Lisaks on peptiidi plasmataseme tõus tavaliselt lühiajaline, kuna mononukleaarne fagotsüütide süsteem elimineerib selle kiiresti vereringest. Sellega seoses on peptiidi A tase informatiivne ainult siis, kui see tõuseb, mis on usaldusväärne märk aktiivse trombiini olemasolust veres.
Fibrinogeeni kogumi eraldamine ja lahustuvate fibriin-monomeeri komplekside (SFMC) moodustumine plasmas
Tervetel inimestel koaguleerub fibrinogeen tänu oma omadustele, elektroforeetilisele liikuvusele ja tundlikkusele trombiini suhtes trombiinitestis täielikult, lisades 12-14 sekundilist trombiini.
Seevastu vere hüübimise (trombineemia) ja fibrinolüüsi intravaskulaarse aktiveerimisega toimub fibrinogeeni kogumi kihistumine, RFMKde moodustumine, mis seovad osa fibrinogeenist (blokeeritud fibrinogeen) ja võib-olla ka fibrinolüüsi varajased saadused (fragmendid X ja V). , samuti tasuta seisukorras varajased ja hilised PDF-id. Trombiini mõjul RFMC ja sellega seotud fibrinogeen kas ei koaguleeru (jäävad seerumis) või koaguleeruvad aeglaselt ja ainult siis, kui nad puutuvad kokku trombiini kõrge kontsentratsiooniga (3-sekundiline). RFMC ja teiste fibrinogeenikogumi inertsete komponentide tuvastamiseks plasmas ja seerumis kasutatakse järgmisi parakoagulatsiooniteste.
Beeta-naftooli test
Beeta-naftooli test (varem fibrinogeeni B määramine) ei ole piisavalt spetsiifiline, seetõttu kasutatakse seda tänapäeval harva.
Selle olemus seisneb selles, et vereplasmale lisatakse β-naftooli lahus 50% etüülalkoholis (5 tilka 1 ml kohta). Kui 10 minuti pärast ilmub loksutamisel jämedate helvestena sade, loetakse proov positiivseks.
Etanooli test
Etanoolitesti on lihtne teha, selle läbiviimiseks lisatakse 0,4 ml testitavale plasmale, mis on stabiliseeritud aminokaproonhappega segatud tsitraadi lahusega (fibrinolüüsi blokeerimiseks) 0,15 ml 50% etanoolilahust (kontsentratsiooni kontrollitakse alkoholimõõtur).
Helli trombi moodustumine 10 minuti pärast näitab RFMK olemasolu vereplasmas. Test on spetsiifiline, kuid võimaldab tuvastada ainult osa RFMK-st (peamiselt suurmolekulaarseid), annab positiivse tulemuse DIC, tromboosi ja muud tüüpi trombineemia korral. DIC III staadiumis muutub raske hüpofibrinogeneemia taustal (alla 0,5-0,7 g/l), nagu ka heparinisatsiooni korral, etanooli test sageli negatiivseks.
Protamiinsulfaadi test
Protamiinsulfaadi test põhineb fibrinolüüsi varajaste saaduste ja osa RFMK-st sadestamisel kalapiimast saadud protamiinsulfaadiga. Test on üsna spetsiifiline, kuid selle rakendamiseks sobivad ainult teatud tüüpi protamiinsulfaat.
Protamiinsulfaadi võime hepariini inaktiveerida ja parakoagulatsiooni põhjustada ei ole seotud. Seetõttu tuleb parakoagulatsioonitestis kasutatavaid protamiinsulfaadi proove eelnevalt testida kas fibriini monomeeri lahusel või normaalsel vereplasmal, millele on eelnevalt lisatud väike kogus trombiini ja streptokinaasi (või ainult streptokinaasi).
Kui test muutub positiivseks, sobib protamiinsulfaat diagnostiliseks kasutamiseks. Paljud kaubamärgiga diagnostikakomplektid sisaldavad kontroll- (referents)plasma, mis annab protamiinsulfaadi testis positiivse tulemuse. Seda kasutatakse reaktiivi testimiseks.
Sellega tuleks arvestada etanooli ja protamiinsulfaadi testide abil tuvastatakse fibrinogeenide kogumi erinevad komponendid, ja seetõttu ei kattu nende tulemused alati üksteisega. Seega on mõnel DIC sündroomiga patsiendil mõlemad testid positiivsed, teistel aga ainult üks. Seetõttu on usaldusväärsema diagnoosi saamiseks vaja läbi viia mõlemad testid.
Ortofenantroliini test
Ortofenantroliini test (OPT) on väga informatiivne ja võimaldab kvalitatiivselt ja kvantitatiivselt määrata RFMK plasmas väikese koguse trombotsüütidega (lisaks tsentrifuugitakse 20 minutit kiirusel 4000 p/min).
Sobib ainult testimiseks ortofenantroliinvesinikkloriid. Ortofenantroliini 0,033 M (0,78%) lahus segatakse toatemperatuuril võrdsetes kogustes (igaüks 0,1 ml) uuritava plasmaga klaasklaasil ja loksutades määratakse segus esimeste helveste ilmumise aeg. .
Raamatupidamine toimub 2 minuti jooksul.
Saadud tulemused (sekundites) teisendatakse kalibreerimiskõvera abil RFMK-de arvuks. Kalibreerimiskõver saadakse Radzevich-Khodorova meetodil saadud fibriini monomeeri erinevate kontsentratsioonide lisamisel tervete inimeste (doonorite) vereplasma kogumile. Tavaliselt ilmuvad helbed 120 sekundi pärast; mida kiiremini need ilmuvad, seda rohkem on uuritavas plasmas RFMK-d.
Test on usaldusväärsem kui etanool ja protamiinsulfaat.
RFMK tuvastamine fibriini monomeeridega kaetud erütrotsüütide aglutinatsiooni teel (FM-test)
Inimese I(O) rühma punased verelibled on kaetud fibriini monomeeridega ja neid kasutatakse diagnostikas.
Klaasil olev vereplasma segatakse testitavate punaste verelibledega. Aglutinatsiooni ilmnemine (astmega + kuni +++) näitab RFMC olemasolu, mis interakteerub fibriini monomeeridega erütrotsüütide pinnal.
Test on väga tundlik ja võimaldab tuvastada RFMK kontsentratsiooni üle 10 mg/ml.
Fibrinogeeni kogumi ja RFMK koaguleeriva osa täielik tuvastamine, kasutades Efa sandy mürki
Liiva efa mürgi või selle koaguleeriva fraktsiooni lahus ( ehitoks, ekariin) koaguleerib täielikult fibrinogeeni, kõiki RFMC-sid ja fibrinolüüsi varaseid saadusi ning seetõttu saab seda kasutada vereplasmas oleva fibrinogeenikogumi koaguleerivate komponentide koguhulga ning seerumis pärast esmast koagulatsiooni allesjäänud RFMC ja blokeeritud fibrinogeeni kogust. mis saadakse pärast trombiiniga koagulatsiooni.
Kasutatakse mürki kontsentratsiooni, mis põhjustab normaalse plasma koagulatsiooni 20-30 sekundiga.
Mürgiga proovis RFMK juuresolekul tuvastatakse vereplasmas suurem kogus fibrinogeeni kui trombiiniga testimisel ja 15-sekundilise trombiiniga hüübimise järel saadud vereseerumis, kui lisatakse mürk, sekund. moodustub tromb, millesse lähevad kõik RFMK ja nendega seotud blokeeritud fibrinogeenid, samuti varajased PDF-id.
Need nähtused on iseloomulikud trombineemiale ja massiivsele intravaskulaarsele koagulatsioonile (DIC-sündroom, trombemboolia jne), samas kui tervete inimeste vereseerumis ei tuvastata mürgiga testiga RFMC-d ja blokeeritud fibrinogeeni. Pärast mürgiga koagulatsiooni ei ole fibrinogeen ja selle suurmolekulaarsed derivaadid enam tuvastatavad ei kromatograafiliselt ega stafülokoki adhesioonitesti abil.
Lisaks ülaltoodule saab RFMK ja fibrinogeeni (või fibriini) varajaste plasmiini lagunemise produktide määramiseks kasutada järgmisi teste.
Stafülokoki adhesiooni test
Staphylococcus Clamping Test (TSC, staphylococcus clamp test) on lihtne ja väga informatiivne meetod RFMK ja varajaste fibrinolüüsi produktide (fragmendid X ja sellega seotud blokeeritud fibrinogeeni) tuvastamiseks seerumis.
See põhineb teatud stafülokoki tüvede (Neumann D 2 S jne) võimel läbida RFMC mõjul aglutinatsiooni, mis on tingitud nende pinnal olevast spetsiaalsest kinnitustegurist ja varasest PDF-ist (fragmendid X). seerumis pärast koagulatsiooni.
Veri uurimiseks kasutatakse stabiliseeriva lahuse jaoks, mis on segatud aminokaproonhappega, et vältida fibrinolüüsi in vitro.
Uuring tehakse klaasil või 74 piluga tablettides, segades võrdsetes kogustes diagnostilist ja testitavat vereseerumit lahjendustes 1:2, 1:4, 1:8 jne.
Arvesse võetakse lõplikku lahjendust, milles aglutinatsioon ikkagi määratakse. Tervetel inimestel ei ületa RFMC ja varajase PDF-i sisaldus seerumis 0,002 g/l (2 μg/ml).
Varajase ja hilise PDF-i immunoloogiline määramine vereseerumis
Varajase ja hilise PDF-i immunoloogiline määramine vereseerumis põhineb antifibrinogeeni seerumi võimel anda immuunsademeid fibrinogeeni kogumi komponentidega (seerumi tundlikkus määratakse fibrinogeeni lahjendustega).
Immunoelektroforeesiga on RFMC, fragmentide X, Y, D ja E erineva liikuvuse tõttu võimalik nende ligikaudne määramine. Kvantitatiivne hindamine toimub fibrinogeeni, plasma ja seerumi erinevate lahjenduste uurimisel. Spetsiifilise seerumi anti-D, anti-dimeeri jne testid on spetsiifilisemad.
PDF lateksi test
Anti-D, anti-E, antidimeeri D jne antikehadega laetud lateksiosakeste adhesiooni test (PDF-lateksi test) seisneb selles, et diagnostiliste komplektide abil määratakse loetletud PDF-id lateksiosakeste adhesiooni kohta segamisel. testitava seerumi erinevad lahjendused.
Aktiveeritud XIII faktori sisalduse määramine vereplasmas trombiini tsirkulatsiooni näitajana veres
Faktor XIII aktiveerub trombiini poolt kaltsiumiioonide juuresolekul, jaguneb ahelaks A, millel on fibriini stabiliseeriv toime, ja inertseks ahelaks S.
Nende sisalduse eraldi määramine (fibriini oligomeeride ja immunoloogilise stabiliseerimise astme järgi) võimaldab diagnoosida intravaskulaarset koagulatsiooni trombineemia esinemise järgi. Meetod on keeruline ja seda kasutatakse peamiselt teaduslikuks uurimistööks. Praegu töötatakse välja ligipääsetavamad meetodid faktori XIIIa määramiseks.
Protrombiini aktivatsiooni tuvastamine
Kui faktor Xa aktiveerib protrombiini, eraldatakse substraadist immunoloogiliselt määratud fragment F1-2. Viimase sisalduse suurenemine plasmas näitab vere hüübimissüsteemi aktiveerumist.
Intravaskulaarse koagulatsiooni aktiveerimise rakumarkerite tuvastamine
Punaste vereliblede kahjustuse (killustumise) nähtus
DIC-sündroomi ja muud tüüpi mikrotsirkulatsiooni blokeerimisega väikestes veresoontes on punased verelibled vigastatud ja seetõttu suureneb killustatud rakkude arv vereproovides (üle 7-10%).
Täpsemalt määratakse see nähtus kindlaks vererakkude eraldamisega Ficoll-Verografini tihedusgradiendis (tihedus 1,077) vastavalt immunoloogias lümfotsüütide ja monotsüütide eraldamiseks kasutatavale tehnikale. Tavaliselt on leukotsüütide interfaasi rõngas valkjas opalestseeruv värv ja Gorjajevi kambris loendatuna sisaldab see vähem kui 400 punast vereliblet 1 μl kohta (tavaliselt kuni 200).
DIC sündroomi korral suureneb ujuvate (kahjustatud) punaste vereliblede arv järsult(kuni 1000-40 000 1 μl või rohkem), mille tõttu rõngas muutub roosaks või punaseks. Nähtust hinnatakse kvantitatiivselt, loendades punaste vereliblede sisaldust interfaasis (Gorjajevi kambris).
Meetod võimaldab eristada DIC-sündroomi mikrotsirkulatsiooni blokaadi ja suurte veresoonte tromboosiga, mille puhul punaste vereliblede kahjustus on ebaoluline.
Tromboplastiini tootmise nähtus monotsüütide poolt
Teatud tüüpi DIC (eriti immuun- ja nakkusliku päritoluga) korral aktiveeritakse monotsüüdid ja omandavad võime toota kudede tromboplastiini.
Selle nähtuse tuvastamiseks eraldatakse vererakud tihedusgradiendis (Ficoll-Verografini segu, tihedus 1,077), et saada suurel hulgal monotsüüte sisaldav fraktsioon, mida lühiajaliselt kultiveeritakse, ja seejärel määratakse suspensiooni hüübimisaktiivsus enne ja pärast rakku. hävitamine. Raskete nakkus-septiliste protsesside korral saab seda monotsüütide funktsiooni alla suruda.
Hüübimis-, fibrinolüütiliste ja kallikreiin-kiniinisüsteemide komponentide vereplasma taseme (tarbimise) languse tuvastamine
Ägeda ja alaägeda DIC korral suureneb hemostaatilise süsteemi mitmete komponentide tarbimine ja metabolism ning seetõttu väheneb nende tase plasmas oluliselt. Eriti väljendunud on VIII, V faktorite, antitrombiini III, valkude C ja S, fibronektiini, prekallikreiini, suure molekulmassiga kininogeeni ja plasminogeeni pärssimine.
Mõnede nende parameetrite määramine on oluline mitte niivõrd diagnoosimiseks, kuivõrd protsessi tõsiduse ja asendusravi efektiivsuse hindamiseks.
I faktori (fibrinogeeni) tase Samuti väheneb sageli, mida aga varjab selle algselt suurenenud sisaldus plasmas nakkus- ja immuunhaiguste, rasedustoksikoosi ja muud tüüpi patoloogiate ajal.
Neoantigeenide tuvastamine
Hüübimisfaktorite ja fibrinolüüsi aktiveerimise protsessis ning nende komplekside moodustumisel füsioloogiliste antagonistidega tekivad uued antigeensed markerid, mida nende paaride komponentides eraldi ei esine. Näiteks trombiin-antitrombiin III kompleks moodustab antigeeni, mis ei ole iseloomulik ei trombiinile ega antitrombiin III-le eraldi.
Samamoodi moodustub neoantigeen paarisühendis plasmiin - antiplasmiin jne. Nende neoantigeenide antiseerumite olemasolul on lihtne kindlaks teha vere hüübimise (trombiini) ja fibrinolüüsi (plasmiini) võtmeensüümide olemasolu. veres.
Kaasaegsetes kliinikutes on üsna suur hulk teste, mis tuvastavad vere hüübimise ja fibrinolüüsi intravaskulaarse aktivatsiooni.
Paljud neist testidest on avalikult kättesaadavad ning kiiresti ja lihtsalt sooritatavad. Nende kasutamine koos mõne muu uuringuga annab usaldusväärse DIC-sündroomi ja muud tüüpi massiivse intravaskulaarse koagulatsiooni laboratoorse diagnoosi. Intravaskulaarse koagulatsiooni markerite jälgimine on oluline ka patoloogilise protsessi dünaamika, ravi efektiivsuse ja piisavuse õigeks hindamiseks.
Põhimõte: Meetod põhineb hüübimis- ja fibrinolüüsifaktoreid sisaldava euglobuliini fraktsiooni sadestamisel happelises keskkonnas ja madalatel temperatuuridel. Euglobuliini fraktsiooni põhikomponent on plasminogeen, lisaks sisaldab see umbes 25% fibrinogeeni, protrombiini ja muid vere hüübimissüsteemi tegureid. Saadud euglobuliinide sade lahustub. Fibrinogeen muudetakse fibriiniks. Aeg fibriinihüübe moodustumisest kuni selle lahustumiseni väljendab vere fibrinolüütilist aktiivsust.
Reaktiivid: 1. 0,1 M ammooniumoksalaadi või naatriumoksalaadi lahus; 2. Naatriumboraadi lahus (9,0 g NaCI ja 1,0 g Na2B4O7 lahustatuna 1 liitris destilleeritud vees); 3. Happeline vesi: 1 ml 1% äädikhappe lahust ja 90 ml destilleeritud vett. 4. 0,025 M CaCl2 lahus.
Määramise edenemine. 0,1 ml plasmat viiakse tsentrifuugitorusse ja lisatakse 1,8 ml happelist vett. Sel juhul langeb valgu euglobuliini fraktsioon plasmast välja. Katseklaasi sisu segatakse hoolikalt ja katseklaas asetatakse külmkappi temperatuurile + 4°C. 20 minuti pärast tsentrifuugige 10 minutit kiirusel 2000 p/min. Supernatant imetakse ära. Sademele lisatakse 0,1 ml naatriumboraati ja asetatakse termostaadi 37 °C juures mitmeks minutiks kuni täieliku lahustumiseni. Lisage 0,1 ml CaCl2. Hüübe moodustumise hetk märgitakse üles ja asetatakse tagasi termostaadi kuni täieliku lüüsini.
Normaalväärtused: tromb lüüsitakse 150–220 ja isegi 260 minuti jooksul.
Ühtne meetod fibrinolüütilise aktiivsuse määramiseks plasma euglobuliinide lüüsi teel (vastavalt E. Kowalski et al., 1959).
Põhimõte: trombi lahustumisaeg, mis on määratud euglobuliini fraktsiooni lüüsiga, peegeldab inhibiitoritest vabastatud plasma fibrinolüütilist aktiivsust.
Reaktiivid ja seadmed: 1. 1,42% ammooniumoksalaadi lahus või 1,34% naatriumoksalaadi lahus; 2. 1% äädikhappe lahus; 3. boraadi lahus (9 g naatriumkloriidi ja 1 g naatriumboraati, mis lahustatakse 1000 ml destilleeritud vees. Boraadi lahust ja äädikhappe lahust on parem säilitada 4°C juures kuni 6 kuud); 4. 0,025 M kaltsiumkloriidi lahus; 5. veevann temperatuuril 37 °C.
Määramise protseduur: veenist võetud veri segatakse antikoagulandiga vahekorras 9:1 ja hoitakse jäävannis kuni tsentrifuugimiseni. Tsentrifuugige 10 minutit kiirusel 1500 pööret minutis. Katseklaasi valatakse 0,5 ml plasmat ja 8 ml destilleeritud vett, segatakse ja lisatakse 0,15 ml 1% äädikhappe lahust (segu pH peaks olema 5,3). Katseklaasi jäetakse 30 minutiks +4 °C juurde. Seejärel tsentrifuugitakse segu kiirusel 1500 p/min 5 minutit, supernatant vedelik kurnatakse ja järelejäänud vedelik eemaldatakse kallutades katseklaasi filterpaberile. Euglobuliinide sade lahustatakse 0,5 ml boraadi lahuses. Kaks lahuse proovi, kumbki 0,2 ml, viiakse 10 mm läbimõõduga katseklaasidesse ja asetatakse 37 °C vanni. 1 minuti pärast lisatakse igale proovile 0,2 ml kaltsiumkloriidi lahust. Mõne minuti pärast tekib tromb. Lüüsi lõppemise aja määrab trombi täielik kadumine (lahustumine).
Normaalväärtused: 183-263 min.
Tulemuste hindamine ja kommentaarid meetodi kohta: Kui plasma fibrinolüütiline potentsiaal on vähenenud (plasminogeeni aktivatsiooni halvenemise tõttu selle aktivaatorite puudumise tõttu, kallikreiin-kiniini aktivatsiooni aeglustumine, CPA faktori pärssimine, koguse vähenemine plasminogeeni), euglobuliini lüüs kestab kauem kui 300 minutit. Seda nähtust täheldatakse tromboosiga patsientidel, kellel on tromboosieelsed seisundid, DIC-sündroomi III-IV staadium, patsientidel, kes põevad hemorraagilist vaskuliiti, sepsist ja raseduse toksikoosi. Hilinenud lüüsi peetakse pretromboosi märgiks, mis peegeldab hüperkoagulatsiooni seisundit või aitab kaasa selle arengule.
Plasmiinipotentsiaali suurenemisega kiireneb euglobuliinide lüüs (kestab alla 150 min), kui plasminogeen aktiveerub nii eksogeensete (streptokokkinaas, stafülokokkinaas, urokinaas, trüpsineemia jne) kui ka endogeensete (aktivaatorite, tissid) suurenemise tõttu. CPA faktori, kiniini, kallikreiini) aktivaatorid. Plasmiini aktiveerimise aste peegeldab reeglina kas intravaskulaarse koagulatsiooni intensiivsust ja keha kaitsereaktsiooni verehüüvete ohule (sekundaarne fibrinolüüs) või plasmiinisüsteemi iseseisvat kaasamist selle aktivaatorite poolt patoloogilisesse protsessi (esmane). fibrinolüüs). Primaarne fibrinolüüs mängib rolli mõnede hemorraagiliste seisundite tekkes sünnitusabi, kirurgia ja uroloogia osakondades. Seetõttu korrigeeritakse seda antifibrinolüütiliste ravimitega (EACA, Trasylol, Contrical, Gordox jne). Samal ajal on sekundaarse fibrinolüüsiga patsientidel need ravimid tavaliselt vastunäidustatud, nende puhul normaliseerub fibrinolüüs pärast hepariini manustamist.
Tavaline viivitatud või kiirendatud euglobuliini lüüs peegeldab plasmiinisüsteemi aktiivset potentsiaali. Siiski on võimatu teha järeldust plasmiinisüsteemi kui terviku seisundi ja selle rolli kohta hemorraagiate ja trombide tekkes, välja arvatud juhul, kui saadakse andmeid spontaanse fibrinolüüsi ja plasmiini inhibiitorite aktiivsuse uuringust, võrreldes uuringu kliiniliste andmetega. patsient.
Plasma euglobuliinifraktsiooni lüüs tuleb määrata 1-2 tunni jooksul pärast verevõtmist.
Katseklaasi seintelt on vaja supernatant väga ettevaatlikult eemaldada: kohe pärast supernatandi tühjendamist kuivatage katseklaasi seinad katsutisse rullitud filterpaberiga, euglobuliini sadet puudutamata ja veel kord. eemaldage ülejäänud supernatant teise destilleeritud vees niisutatud filterpaberiga. Supernatant sisaldab palju plasmiinisüsteemi inhibiitoreid, mistõttu selle väikesed tilgad katseklaasi seintel pikendavad järsult trombi lüüsi, moonutades uurimisandmeid.
Pärast trombi moodustumist ei tohiks katseklaasi raputada, kuna mõnikord tõmbub tromb pärast kerget raputamist tagasi ja selle lüüs pikeneb järsult.
Euglobuliini lüüs toimub kuiva õhu termostaadis 35–45 minutit kiiremini kui veevannis. Seetõttu tuleks kontrolluuringud tervete ja haigete inimestega läbi viia samadel tingimustel.
Euglobuliini lüüsi saab oluliselt kiirendada, lisades süsteemi fibrinolüüsi aktivaatoreid (streptokinaas, urokinaas jne) või eeltöötledes plasmat kaoliiniga.
Lahjendatud euglobuliini fraktsiooni saab üle kanda fibriiniplaatidele, et hinnata lüüsi intensiivsust lüüsitud fibriini pindala põhjal.