الشركات المصنعة الروسية الرائدة في قطاع مجموعات الكواشف لتشخيص العدوى: - Vector-Best CJSC، Novosibirsk؛ - NPO Diagnostic Systems LLC، نيجني نوفغورود؛ - JSC "Ekolab"، Elektrogorsk MO. في مجال مجموعات الكواشف لتشخيص الأمراض غير المعدية والحالات الفسيولوجية: - Alkor-Bio LLC، سانت بطرسبرغ؛ - CJSC "Vector-Best"، نوفوسيبيرسك؛ - شركة هيما ميديكا المحدودة، موسكو. في قطاع الكواشف للتشخيص المختبري للحساسية: - Alkor-Bio LLC، St. - CJSC "Vector-Best"، نوفوسيبيرسك؛ - NPO Immunotex LLC، ستافروبول. إنتاج المعدات المخبرية: - شركة بيكون ذات المسؤولية المحدودة، موسكو
تقييم درجة استبدال الواردات المحتملة على أساس تسميات الاختبارات تسميات التحليلات والوحدات. تمت الموافقة على استخدامه في الاتحاد الروسي تم إنتاجه في الاتحاد الروسي درجة إمكانية استبدال الواردات علامات الأمراض المعدية٪ علامات الأمراض غير المعدية ومؤشرات الحالات الفسيولوجية٪ علامات الحساسية٪ الإجمالي:٪
تقييم درجة استبدال الواردات بناءً على حجم سوق المنتجات الخاصة بقطاعات سوق ELISA اللوحية، حجم السوق في الاتحاد الروسي، مليون روبل. حجم مبيعات الشركات المصنعة المحلية، مليون روبل. حصة استبدال الواردات علامات الأمراض المعدية٪ علامات الأمراض غير المعدية ومؤشرات الحالات الفسيولوجية٪ علامات الحساسية٪ المعدات50051٪ الإجمالي:٪
تقييم درجة استبدال الواردات على أساس حجم سوق المنتجات الخاصة بالطرق الكيميائية المناعية في قطاعات السوق العامة. حجم السوق في الاتحاد الروسي، مليون روبل. حجم مبيعات الشركات المصنعة المحلية، مليون روبل. حصة استبدال الواردات علامات الأمراض المعدية٪ علامات الأمراض غير المعدية ومؤشرات الحالات الفسيولوجية٪ علامات الحساسية٪ المعدات٪ الإجمالي:٪
مشاكل الشركات المصنعة المحلية في الصناعة: أصبحت طريقة ELISA قديمة. هناك استبدال تدريجي لكواشف IF المحلية بكواشف كيميائية مستوردة؛ يحفز نظام المشتريات العامة الحالي إما شراء أرخص السلع أو المنتجات المستوردة ذات الخصائص الفريدة؛ أحد الأسباب الرئيسية لعدم كفاية تطوير الشركات المصنعة المحلية للمعدات الأوتوماتيكية وتوطين إنتاج المنتجات المستوردة هو الحاجز الإداري الجمركي؛ المشكلة الرئيسية في الآونة الأخيرة هي انهيار نظام تسجيل الدولة للمنتجات الجديدة في جمهورية بيلاروسيا. لقد توقف عملياً قبول المنتجات الجديدة في السوق، ولا يزال المصنعون الأجانب الذين سجلوا قوائم طويلة سابقًا يتمتعون بميزة على المنتجات المحلية؛ السبب الرئيسي للتأخر التكنولوجي هو عدم القدرة على الحصول على الحق في إنتاج منتجات متوافقة مع المعدات الحديثة؛ إن الدرجة المنخفضة من توحيد الشركات المصنعة المحلية وحروب الأسعار المستمرة فيما بينها لا توفر الفرصة لتطوير منتجات متقدمة والتنافس مع اللاعبين الرئيسيين على قدم المساواة، بما في ذلك في الأسواق الخارجية.
المقترحات: داخل لجنة الاتصالات الفيدرالية (FCC)، تقديم إجراء غير تنافسي للمشتريات العامة للمنتجات الطبية مع النشر اللاحق لكل بند على حدة. إن تحديد حدود التمويل على أساس متوسط سعر السوق سيعطي مزايا معينة للمصنعين المحليين، وسيحد من استهلاك الكواشف المستوردة باهظة الثمن وسيتحكم في استخدام أموال الميزانية بشكل أكثر كفاءة؛ تعزيز توحيد وتوحيد الشركات المصنعة المحلية من أجل تركيز الموارد على تطوير المنتجات الحديثة ودخول السوق الدولية. إن الإجراء غير التنافسي للمشتريات الحكومية لن يترك سوى الشركات التنافسية الحقيقية في السوق بسرعة؛ تخصيص أموال حكومية لتحفيز تطوير مجموعة من الاختبارات الكافية لضمان السلامة البيولوجية للبلاد، على أساس مبادئ الشراكة بين القطاعين العام والخاص؛ وينبغي أن تكون المزايا الجمركية للمكونات، وليس للمنتجات النهائية؛ مواءمة نظام التسجيل مع النظام الأوروبي، حيث يتم تسجيل الأجهزة الطبية ذات المستوى المنخفض من المخاطر المحتملة على أساس إعلان المطابقة.
عدد التعريفات 96 (48 في التكرارات)
شكل قرص العمل: مخطط 12x8، مقسم إلى فتحة واحدة.
الحساسية: 1.5 وحدة/مل.
نطاق القياس: 0-400 وحدة/مل.
حجم عينة الاختبار لا يزيد عن 25 ميكرولتر.
توحيد شروط إجراء التفاعل الأنزيمي مع الكروموجين في شاكر ثرموستاتي عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
ضبط المحتويات:
1. لوحة مخططة 12 × 8 آبار، جاهزة للاستخدام - 1 قطعة.
2. عينات المعايرة الجاهزة للاستخدام (0-400 وحدة/مل) ملونة بدرجات شدة متفاوتة حسب التركيز - 6 زجاجات.
3. عينة التحكم - زجاجة واحدة.
4. مترافق مكون واحد، جاهز للاستخدام، لا يتطلب التخفيف - زجاجة واحدة.
5. محلول لتخفيف الأمصال - زجاجة واحدة.
6. ركيزة كروموجينية، مكون واحد - محلول رباعي ميثيل بيزيدين بلس (TMB+)، جاهز للاستخدام، ولا يحتاج إلى تخفيف - زجاجة واحدة.
7. محلول ملحي معزز بالفوسفات مع توين - قارورتان.
8. أوقف الكاشف، جاهز للاستخدام - زجاجة واحدة.
9. فيلم لختم الجهاز اللوحي - 1 جهاز كمبيوتر.
10. استنسل لبناء رسم بياني للمعايرة - 1 جهاز كمبيوتر.
11. حمام الكاشف - 2 جهاز كمبيوتر شخصى.
12. أطراف ماصة سعة 5-200 ميكرولتر - 16 قطعة.
يتم تعبئة الجهاز اللوحي في كيس من خشب الساج بسحاب.
يكون ثبات محلول العمل FST-T لمدة 5 أيام على الأقل عند درجة حرارة +2...8 درجة مئوية.
قم بتخزين المجموعة في درجة حرارة +2...8 درجة مئوية. مدة الصلاحية - سنة واحدة من تاريخ الإنتاج.
مسجل في Roszdravnadzor.
يعد علاج داء الديدان الطفيلية عند الأطفال أمرًا في غاية الأهمية، لأن عواقب ذلك يمكن أن تكون تأخرًا في النمو الجسدي والعقلي، والعمليات المرضية في الأعضاء والأنظمة الداخلية، وحتى الموت. بالإضافة إلى ذلك، فإن الإصابة بالديدان الطفيلية معدية للغاية، ولهذا السبب تنتشر بسهولة في مؤسسات ما قبل المدرسة والمدارس. وبناءً على ذلك، من الواضح مدى أهمية علاج داء الديدان الطفيلية لدى الأطفال في الوقت المناسب.
العلامات الأولى للديدان الطفيلية عند الأطفال
الديدان هي عوامل انتهازية لجسم الإنسان، والديدان التي يكون الإنسان هو المضيف النهائي لها. بالإضافة إلى ذلك، فإن عمر المالك لا يلعب أي دور في هذا الأمر، ويمكن ملاحظة أنواع مختلفة من الديدان الطفيلية لدى كل من الأطفال والمرضى البالغين.
ما مدى خطورة الديدان الطفيلية على الطفل؟
كما ذكرنا سابقًا، يمكن أن تسبب الديدان الطفيلية عند الأطفال أمراضًا وأمراضًا خطيرة، ونتيجة لذلك يتباطأ النمو العقلي والجسدي. يمكن أن تكون المضاعفات المحتملة لكل نوع من أنواع الديدان الطفيلية مختلفة تمامًا، على سبيل المثال:
لذلك، تتطلب الديدان الطفيلية لدى الأطفال مزيدًا من الاهتمام، ومساعدة الطبيب في الوقت المناسب، ومراقبة طويلة الأمد من قبل أخصائي، والوقاية.
الأعراض الرئيسية عند الأطفال
يمكن أن تختلف أعراض الإصابة بالديدان الطفيلية عند الطفل اعتمادًا على نوع الديدان:
1. تظهر الديدان المستديرة على الفور من خلال رد فعل تحسسي وحمى وغثيان لدى الطفل. عادة ما تكون المظاهر الأولى مشرقة، ولكنها تتلاشى بسرعة. وبعد ذلك يمكن ملاحظة الأعراض التالية: 
- المغص وعسر العاج وحديثي الولادة.
- عند الأطفال الذين تقل أعمارهم عن سنة واحدة، ألم في منطقة السرة، ومشاكل في البراز، والحساسية، والأهبة.
- يعاني الأطفال الأكبر سنًا من مشاكل في النوم، وسلوك مضطرب، وكوابيس.
- يتميز الأطفال من عمر 3 إلى 7 سنوات بالغثيان والحمى والسعال وآلام البطن والطفح الجلدي.
2. يتجلى داء الستريكيات الناجم عن الديدان الدبوسية في صورة سريرية غير واضحة. وفقط بعد شهر واحد يمكنك ملاحظة الأعراض التالية:
- عند الأطفال حديثي الولادة: التهاب، وتورم واحمرار في فتحة الشرج، ورفض تناول الطعام، والبكاء في الليل، وقلة الشهية.
- يعاني الأطفال الذين تقل أعمارهم عن سنة من نفس الأعراض، بالإضافة إلى حكة شديدة في فتحة الشرج ليلاً (من الساعة 11 مساءً حتى الساعة 1 صباحًا)؛ وتعاني الفتيات من التهاب الأعضاء التناسلية؛
- عند الأطفال الأكبر سناً، ألم في البطن بالقرب من السرة، اضطراب في النوم، حكة في الأرداف.
3. من الصعب التعرف على أعراض داء القطط، باستثناء انخفاض درجة حرارة الجسم وردود الفعل التحسسية (الطفح الجلدي والشرى والحكة والتورم). بعد الإصابة، قد يحدث السعال، والذي يسبب لاحقا الالتهاب الرئوي أو التهاب الشعب الهوائية، وخاصة في المرضى الأصغر سنا. 
يفترض داء الشعرينات أعراضًا خفيفة عند الأطفال حديثي الولادة، وإلا يتم ملاحظة العلامات التالية:
- حالة محمومة
- تورم الوجه.
- ألم عضلي؛
- ردود الفعل التحسسية.
- قد يعاني الأطفال بعمر 5 سنوات فما فوق من تضخم اللوزتين والطحال والطفح الجلدي والتهاب الحلق.
يصعب تشخيص أعراض الإصابة بالديدان الطفيلية لدى الأطفال بعمر عامين أو أقل، لأن الطفل لا يستطيع شرح سلوكه وحالته. لذلك، بالنسبة لأي مظاهر وسلوك غير نمطي للطفل، من الأفضل إظهار الطبيب.
ما الذى ينبغى عليك فعله اولا؟
الديدان التي تم العثور عليها في براز الطفل هي أهم علامة على المرض، وبعدها يجب عليك طلب المساعدة من الطبيب على الفور. لا يمكن أن يكون علاج الديدان الطفيلية ناجحًا دون التشخيص المناسب. ويجب أن تكون طرق الفحص في هذه الحالة شاملة، وتشمل الإجراءات التالية: 
- أخذ قصاصات من فتحة الشرج.
- فحص براز الطفل.
- تحليل الدم؛
- خزعة العضلات في حالات نادرة عند الاشتباه في داء الشعرينات.
- اختبار الدم المصلي.
- الأشعة السينية، الموجات فوق الصوتية، التصوير المقطعي.
- ELISA للكشف عن الأجسام المضادة في الدم.
طرق العلاج
يجب أن يكون علاج داء الديدان الطفيلية لدى الأطفال شاملاً ومدروسًا جيدًا وموصوفًا بجرعات دقيقة وتكرار تناول الأدوية. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن الأدوية ذات المكونات السامة تستخدم للتأثير المضاد للديدان، مما يعني أن الاستخدام غير الرشيد يمكن أن يؤدي إلى آثار جانبية. بالإضافة إلى ذلك، فإن العلاج الشعبي بالنباتات الطبية مناسب في المنزل.
العلاجات الشعبية
يتضمن العلاج الحديث بالعلاجات الشعبية لمثل هذه الأمراض لدى الأطفال 4 طرق فعالة: 
يجب مناقشة أي طريقة للعلاج المنزلي مسبقًا مع طبيبك. يجب أن نتذكر أن الأعشاب والعلاجات الشعبية لها موانع في شكل تعصب فردي.
العلاج من الإدمان
- بالنسبة لداء السَّرِّياتِ السَّرْوِيَّة وداء الصَّفَر، تُستخدم عادةً أدوية مثل بيرانتيل وميبيندازول. يعتبر تناول البيرانتيل مناسبًا بجرعة 10 ملجم من المادة لكل كيلوجرام من وزن الديدان الدبوسية، و5 ملجم / كجم للديدان المستديرة. يؤخذ ميبيندازول مرتين في اليوم 50 ملغ للأطفال بعمر 2-3 سنوات لمدة ثلاثة أيام متتالية، مرتين في اليوم 100 ملغ لمدة ثلاثة أيام متتالية للأطفال فوق 3 سنوات، بعد 3 أسابيع يكون العلاج معاد.
- بالنسبة لداء التسمم، يوصف ميبيندازول بجرعة مختلفة - للأطفال بعمر سنتين فما فوق، 100 ملغ مرتين في اليوم لمدة 14-10 أيام.
- يعالج داء الشعرينات بدواء ميبيندازول 5 ملغ لكل كيلوغرام من الوزن، وبعد ذلك يتم تقسيم الجرعة إلى ثلاث جرعات يوميا. مسار العلاج هو أسبوع واحد تحت إشراف طبي صارم.
الوقاية من الديدان الطفيلية
- غسل اليدين مباشرة بعد الاتصال بالحيوانات، وبعد الخروج من المنزل وفي صناديق الرمل، والذهاب إلى المرحاض، وقبل تناول الطعام؛
- تناول الأطعمة النظيفة فقط؛
- المعالجة الحرارية للحوم ومنتجات الأسماك بشكل صحيح؛
- شرب الماء المغلي.
- الحفاظ على النظافة الشخصية والصرف الصحي؛
- التخلص من الديدان بانتظام من الحيوانات الأليفة.
- تنفيذ التخلص من الديدان الوقائية لدى الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين عامين وما فوق.
اختبار الدم للتوكسوكارا
ملامح العدوى البشرية مع داء القطط
حاملات العدوى هي الكلاب، وفي كثير من الأحيان القطط. ينتشر بيض التوكسوكارا في براز الكلاب الضالة. بمجرد وصولهم إلى الأرض أو في الماء أو البقاء على فراء الحيوان، يتم إدخالهم إلى الجسم السليم بطرق مختلفة.
رد فعل على تدخل شخص غريب
ومن المعروف من الإحصاءات الطبية أن البالغين أقل عرضة للإصابة بداء القطط، إلا إذا كانت مهنتهم معرضة للخطر. الأطفال أكثر عرضة للإصابة بالعدوى.
الأعراض الأكثر شيوعا لداء القطط:
- -حمى دون وجود علامات على أي مرض.
- زيادة درجة الحرارة.
- زيادة وتلاشي الألم في الرأس أو المعدة.
- ظهور طفح جلدي لا يمكن القضاء عليه.
- انتفاخ الوجه.
- زيادة في مستوى الحمضات في الدم، تم الكشف عنها خلال التحليل العام.
لإجراء تشخيص دقيق، يوصف اختبار مناعي للتوكوكارا. إن وجود مركبات بروتينية في الدم تحمل المعلومات الوراثية للديدان الطفيلية (المستضدات) يحفز الجهاز المناعي على إنتاج أجسام مضادة من فئة igg. هذه هي العلامة الأولى لعدوى داء القطط.
التشخيص الأولي
المرحلة الأولية من التاريخ الطبي للمريض جماعية. قبل إرسال المريض لإجراء فحص الدم لداء التسمم، من الضروري دراسة خلفية المرض وإجراء فحص أولي.
التشخيص الأولي:
- دراسة الظروف المشددة التي يمكن أن تسبب العدوى - عمل محدد مع الحيوانات أو وجود حيوان أليف، أعمال التنقيب في منطقة يحتمل أن تكون خطرة، لعب الأطفال في مناطق تمشية الكلاب.
- الفحص البدني للمريض. فحص الجلد بحثًا عن غزو تحت الجلد بواسطة التوكسوكارا والجفون ومقل العيون والجس.
- وصف فحص الدم الكامل. أثناء الإصابة بداء السموم، تتميز زيادة كبيرة في بعض المؤشرات - الحمضات (70-80٪)، الخلايا الليمفاوية، ESR. بينما ينخفض مستوى الهيموجلوبين بشكل ملحوظ.
- أخذ عينات من الكبد. مع الغزو الشديد، يتأثر الحمل على الكبد، والذي يتجلى في قفزة قوية في البيليروبين.
من المستحيل الحصول على تأكيد مباشر لإصابة التوكسوكارا باستخدام الاختبارات التقليدية (الدم، البرنامج المشترك، اللطاخة). كما أن فحص الاثني عشر غير مفيد لأنه صعب بسبب طبيعة اليرقات المهاجرة.
بعد تلقي نتائج الفحص الأولي التي تشير إلى احتمال الإصابة بداء القطط، والتمييز بين التشخيص المفترض والأمراض ذات الأعراض المماثلة، يوصف للمريض اختبار ELISA لداء القطط.
مقايسة الممتز المناعي المرتبط
الهدف الرئيسي من هذه الدراسة هو تأكيد وجود التوكسوكارا في جسم الإنسان. وتوجد الأجسام المضادة لهذه الديدان الطفيلية في بلازما الدم، فتؤخذ من الوريد.
يتطلب اختبار التوكسوكارا بعض التحضير:
- لا تتناول الأطعمة الدهنية أو الثقيلة في اليوم السابق لإجراء العملية.
- لا تشرب المشروبات السكرية أو الغازية أو الكحولية خلال اليوم السابق لزيارة المختبر.
- أخذ العينات على معدة فارغة.
- لا تتناول الأدوية في اليوم السابق واليوم المحدد للاختبار.
من الضروري أن نأخذ في الاعتبار أن هذه الطريقة الغنية بالمعلومات لتحديد الغزو قد تتأثر بظروف معينة. قد تظهر نتيجة إيجابية كاذبة إذا كان لدى المريض:
- أمراض الأورام.
- السل الرئوي.
- أمراض الكبد الشديدة.
- متلازمة المناعة الذاتية.
- متلازمة الفوسفوليبيد.
- حمل.
في هذه الحالة، لن يكون من الممكن الحصول على تحليل تأكيدي بنسبة 100٪، لأنه في ظل الظروف المذكورة أعلاه، ينتج نظام الدفاع أيضًا الجلوبيولين المناعي (الأجسام المضادة). من الضروري إجراء تشخيصات إضافية وتمييز داء التسمم عن العوامل المذكورة.
يصل تركيز الغلوبولين المناعي (عيار) من فئة IgG إلى أقصى قيمة ممكنة بعد 2-3 أشهر من بداية الغزو. كلما كانت العدوى أكثر خطورة، كلما ارتفع هذا المؤشر.
نتائج إليسا
لإجراء التشخيص، تتم دراسة المقايسة المناعية الإنزيمية بعناية، وتتم مقارنة النتائج التي تم الحصول عليها مع القيم المرجعية. يعتبر عيار الأجسام المضادة 1:100 مع مؤشر إيجابية أقل من 0.9 أمرًا طبيعيًا.
القيم العددية للتتر
قد تكون النتائج التي تم الحصول عليها سلبية أو إيجابية أو إيجابية ضعيفة أو مشكوك فيها. يعتمد عدد عيارات AT على شدة الغزو ومدة حدوثه.
نص التحليل:
- في عيار يصل إلى 1:100 – النتيجة سلبية. لم يتم العثور على يرقات التوكسوكارا في جسم المريض.
- في عيار يصل إلى 1:400 هي نتيجة إيجابية ضعيفة. يعاني المريض من غزو ضعيف أو يصاب بنوع من داء التسمميات في العين. وفي بعض الحالات، يشير المؤشر إلى إصابة حديثة.
- في عيار يصل إلى 1:600 – النتيجة إيجابية. يعاني الشخص من شكل سريري من داء الديدان الطفيلية، والذي يتطلب علاجًا فوريًا في حالة اكتشافه.
- في عيار يصل إلى 1:800 – النتيجة إيجابية. يتحدث عن غزو شديد ذو طبيعة تقدمية واحتمال كبير لتطوير عملية مرضية للأعضاء الداخلية.
مع استثناءات نادرة، تكشف دراسات ELISA عن شكل متقدم من الغزو بمزيج من داء الديدان الطفيلية من أصل آخر. في هذه الحالة، قد يكون إجمالي الأجسام المضادة أعلى من 1:800.
معدل الإيجابية
عند استخدام المقايسة المناعية الإنزيمية لداء التسمميات بعيار 1:400 – 1:600 للتمييز بين الغزو والعوامل الجانبية، تتم مقارنة المؤشرات التي تم الحصول عليها مع القيمة المرجعية. ويسمى الفرق بين هذه الأرقام عادة بالمؤشر أو معامل الإيجابية.
عادة، في نموذج ELISA، يكون أحد المؤشرات عكس الآخر. الأول هو القاعدة، والثاني يمكن أن يعني:
- ما يصل إلى 0.9 – النتيجة سلبية. لم يتم العثور على يرقات التوكسوكارا.
- 0.9-1.1 – النتيجة مشكوك فيها. في هذه الحالة، يتم وصف التشخيص المتكرر.
- 1.1-2.2 – النتيجة إيجابية قليلاً. فالإنسان حامل ذو غزوة ضعيفة.
- 2.2-4.2 – النتيجة إيجابية. يتطور داء السميات ذو الشدة المعتدلة لفترة طويلة.
- أكثر من 4.4 - تشير النتيجة إلى ذروة الإصابة بالديدان الطفيلية أو الإصابة بالديدان الطفيلية الحديثة.
قد يشير CP بنتيجة 4.4 وزيادة مكتشفة في كثرة اليوزينيات بنسبة 10٪ إلى تطور الشكل العيني لداء القطط ووجود أجسام مضادة للغزو المتبادل، إجماليًا لداء القطط.
يعتمد التفاعل المناعي والكثافة البصرية للأجسام المضادة (معدل الإيجابية) على درجة الإصابة بالتوكسوكارا وموقعها. إن أدنى عيار ومؤشرات CP تسمح لنا فقط بافتراض عدم وجود الديدان الطفيلية، ولكن ليس لتأكيد ذلك.
لا يمكن أن تكون المعلومات المقدمة مصدرًا للتشخيص الذاتي أو العلاج الذاتي. نتائج ELISA مع الفحص الأولي لا يمكن إلا أن تخبر أخصائيًا عن وجود مشكلة. في مختبر Invitro يتم إجراء تشخيصات الدم بدقة عالية، وتكون نتيجة التحليل مصحوبة بتعليقات من المتخصصين حول معدل الإيجابية. وهذا يساعد الطبيب بشكل كبير على إجراء تشخيص أكثر دقة.
المخدرات
تقييم نظام اختبار إليسا الجديد
"مستضد فيروس الروتا-ELISA-BEST"
12Zhirakovskaya E.V.، 3Ignatiev G.M.، 3Indikova I.N.، 12Tikunova N.V.
1 مؤسسة ميزانية الدولة الفيدرالية المركز العلمي الحكومي VB "Vector" لروسبوتريبنادزور ، قرية كولتسوفو ، منطقة نوفوسيبيرسك ؛
2 معهد البيولوجيا الكيميائية والطب الأساسي، نوفوسيبيرسك؛
3 المعهد الحكومي للتوحيد القياسي ومراقبة المستحضرات البيولوجية الطبية الذي يحمل اسمه. لوس أنجلوس تاراسيفيتشاج موسكو
يتم عرض نتائج اختبارات الحساسية والنوعية والتكاثر لمجموعة جديدة من الكواشف "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" التي تم تطويرها في JSC "Vector-Best" (نوفوسيبيرسك). تسمح لنا البيانات التي تم الحصول عليها بالتنبؤ بموثوقية التشخيص للنتائج عند استخدام نظام الاختبار هذا للكشف عن مستضد فيروس الروتا المجموعة أ في المواد السريرية.
الكلمات المفتاحية: نظام اختبار الإليزا، الكفاءة، فيروس الروتا أ
تعد فيروسات الروتا من المجموعة (أ) (عائلة فيروسات الروتا، جنس فيروسات الروتا) هي السبب الأكثر شيوعًا لالتهاب المعدة والأمعاء الوخيم لدى الأطفال الصغار في جميع أنحاء العالم. غالبًا ما يصاب البالغون الذين يعانون من ضعف في جهاز المناعة بالمرض. عدوى فيروس الروتا (RVI) هي مرض شديد العدوى وله طرق انتشار متعددة. مصدر العدوى هو شخص مصاب بشكل واضح أو بدون أعراض للمرض، وكذلك حامل للفيروس. بين الأطفال والبالغين، يمكن أن يظهر فيروس RVI في شكل حالات متفرقة، وأمراض جماعية محلية، وتفشي المرض، وهو منتشر على نطاق واسع. تتحقق آلية انتقال هذه العدوى من البراز إلى الفم من خلال الطعام (الحليب ومنتجات الألبان وأغذية الأطفال) والماء وطرق الاتصال المنزلية.
يعد تشخيص التهاب المعدة والأمعاء الناتج عن فيروس الروتا بناءً على الصورة السريرية، خاصة في حالات الإصابة المتفرقة، أمرًا صعبًا، لأن الأعراض المميزة لهذه العدوى تختلف قليلاً عن أعراض الالتهابات المعوية الحادة الأخرى (AEI) ذات المسببات المختلفة. يتم إجراء التشخيص التفريقي في المرضى الذين يعانون من التهاب المعدة والأمعاء الفيروسي الروتا مع كل من الالتهابات السامة المنقولة بالغذاء ومع الالتهابات الفيروسية الأخرى (الفيروسات النوروية والفيروسات الفلكية والفيروسات الغدانية والفيروسات التاجية والفيروسات المعوية كوكساكي وإيكو) والمسببات البكتيرية (داء السالمونيلا والدوسنتاريا والكوليرا واليرسينيات والكائنات الحية الدقيقة الانتهازية). لسوء الحظ، لا تقوم جميع المؤسسات الطبية المتخصصة في الاتحاد الروسي بإجراء تشخيص الإصابة بفيروس الروتا.
تهدف طرق تشخيص RVI إلى اكتشاف الفيروسات الكاملة أو المستضد الفيروسي أو الحمض النووي الريبي (RNA) الخاص بالفيروس في البراز. هناك طريقة واعدة للكشف المباشر عن الفيروسات سواء في المواد السريرية أو في الكائنات البيئية وهي طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي (RT-PCR). في السنوات الأخيرة، تم إنشاء أنظمة اختبار بناءً على التطورات العلمية الحديثة مع مجموعة من الطرق المختلفة للكشف عن فيروسات الروتا: PCR المتعدد مع الكشف عن التهجين والتألق لمنتجات التضخيم "عند نقطة النهاية"؛ نقطة النهاية المناعية PCR (IPCR) مع الكشف في الوقت الحقيقي؛ RT-PCR الكمي مع الكشف في الوقت الحقيقي. تستخدم مختبرات الأبحاث المجهر الإلكتروني للتعرف بسرعة على فيروسات الروتا. ومع ذلك، فإن جميع الأساليب المذكورة أعلاه تتطلب عمالة كثيفة وتتطلب معدات باهظة الثمن وموظفين مؤهلين تأهيلا عاليا. ولذلك، عند إجراء التشخيص المختبري في المستشفيات والعيادات الخارجية، تعطى الأفضلية للطرق القائمة على الكشف عن المستضد الفيروسي في البراز باستخدام مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) مع الأجسام المضادة أحادية ومتعددة الأضلاع للفيروسات العجلية. هذه الطريقة متاحة للمختبرات العملية، وسهلة الإعداد وتتيح لك الحصول على النتائج بسرعة.
الغرض من هذا العمل هو دراسة الفعالية التشخيصية للمجموعة الجديدة من الكواشف "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" التي تم تطويرها في JSC "Vector-Best"، نوفوسيبيرسك.
^ سبتمبر-ديسمبر
المواد والأساليب
تضمنت مادة الدراسة عينات براز من أطفال صغار تم تشخيص إصابتهم بعدوى معوية حادة وبدون مظاهر سريرية للعدوى المعوية، والذين كانوا يخضعون للعلاج الداخلي في أقسام الالتهابات المعوية والتهابات الجهاز التنفسي في مستشفى مدينة الأطفال السريري رقم 3 في نوفوسيبيرسك. تم جمع عينات البراز في حاويات بلاستيكية معقمة يمكن التخلص منها بحجم 2-3 مل عند دخول المرضى إلى قسم المستشفى وتخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة 15 يومًا. تم إجراء تخزين أطول للمادة عند -70 درجة مئوية.
تم استخدام لوحة مكونة من 104 عينات برازية، تم اختبارها مسبقًا لوجود مسببات الأمراض ACI، في هذا العمل. منهم:
30 عينة تم فيها اكتشاف فيروسات الروتا من المجموعة A فقط بواسطة ELISA وRT-PCR؛ أظهر التنميط الجيني باستخدام طريقة RT-PCR أن عينات البراز تحتوي على فيروسات روتا من النمط الجيني PG1 (18 عينة)، PG2 (4 عينات)، PG3 (3 عينات)، PG4 (عينتين)، PG4 (عينة واحدة)، PG9 (عينة واحدة) ، PG3 (عينة واحدة)؛
14 عينة تم فيها اكتشاف فيروسات النوروفيروس من النمط الجيني الثاني فقط بواسطة RT-PCR، وهو ما تم تأكيده عن طريق تحديد تسلسل النيوكليوتيدات للمنطقة 5 بوصة من جين القفيصة الموجود على جينوم النوروفيروس في المنطقة 5085-5485 ساعة؛
15 عينة تم فيها تحديد الفيروسات الفلكية فقط بواسطة RT-PCR، وهو ما تم تأكيده عن طريق تحديد تسلسل النيوكليوتيدات للمنطقة 5 بوصة من جين القفيصة الموجود على جينوم الفيروس النجمي في المنطقة 4526 - 4955 nt؛ 15 عينة تم فيها تشخيص الفيروسات الغدية فقط تم تحديدها بواسطة PCR .
30 عينة براز (تحكم) من الأطفال الذين ليس لديهم مظاهر سريرية للعدوى المعوية في قسم الجهاز التنفسي بالمستشفى؛ ولم يحدد التحليل الأولي مسببات الأمراض الفيروسية المذكورة أعلاه في هذه العينات.
تم إجراء اختبار العينات لوجود أو عدم وجود فيروسات روتا ونورو وأسترو وفيروسات غدية باستخدام طريقة RT-PCR باستخدام مجموعات تجارية مسجلة في الاتحاد الروسي "AmpliSens No.virus 1, 2 الأنماط الجينية - 306/322" "AmpliSens Astrovirus -165"، "AmpliSens Adenovirus - 462"، "AmpliSens Rotavirus - 290" (من إنتاج معهد البحوث المركزي لعلم الأوبئة، الاتحاد الروسي). تم فحص العينات وفقًا لتعليمات استخدام مجموعات الكاشف المقابلة خلال تاريخ انتهاء الصلاحية. تم التنميط الجيني للعينات الإيجابية لفيروس الروتا باستخدام RT-PCR. تم أيضًا تحديد وجود أو عدم وجود مستضد فيروس الروتا بواسطة ELISA باستخدام نظام اختبار IDEIA ™ Rotavirus التجاري (DakoCytomation، UK) وفقًا لتعليمات المجموعة.
عند اختبار مجموعة كاشف "Rota-virus-antigen-ELISA-BEST"، تم تشفير جميع العينات المذكورة أعلاه (104) واختبارها ثلاث مرات باستخدام مجموعة الاختبار. وبعد الانتهاء من الاختبار، تم فك تشفير العينات وتحليل النتائج.
النتائج والمناقشة
تم تقييم حساسية مجموعة كاشف فيروس الروتا-مستضد-ELISA-BEST من خلال عدد مصادفات النتائج الإيجابية (في المائة) لعينات الاختبار باستخدام نظام الاختبار الذي تم اختباره والأدوية المرجعية. في الوقت نفسه، تم الكشف عن أنه عند استخدام مجموعة كاشف فيروس الروتا-مستضد-ELISA-BEST، كانت جميع العينات الثلاثين مع وجود فيروس الروتا A إيجابية (الجدول 1). ونتيجة لذلك، كانت حساسية مجموعة اختبار الكواشف في الكشف عن فيروسات الروتا A 100%. تجدر الإشارة إلى أن اللجنة تضمنت عينات تحتوي على سبعة أنماط وراثية مختلفة من فيروسات الروتا، وتم اكتشافها جميعًا بنجاح بواسطة مجموعة كاشف "Rotavirus rus - antigen - AND FA-B EST".
تم تقييم خصوصية نظام الاختبار من خلال عدد مصادفات النتائج السلبية (بالنسبة المئوية) لعينات الاختبار باستخدام نظام الاختبار الذي تم اختباره مع تلك التي اجتازت الدراسات الأولية. لتقييم الخصوصية، شملت اللوحة المستخدمة 30 عينة لم يتم فيها تحديد مسببات الأمراض الفيروسية، بالإضافة إلى 14 عينة تم فيها اكتشاف فيروسات النوروفيروس من النمط الجيني الثاني فقط باستخدام طريقة RT-PCR، و15 عينة تم فيها اكتشاف طريقة RT-PCR تم اكتشاف الفيروسات الفلكية فقط؛ 15 عينة تم فيها اكتشاف الفيروسات الغدية فقط بواسطة PCR. وقد تقرر أنه في 69 من أصل 74 عينة سلبية، فإن قيم الكثافة الضوئية عند اكتشافها بواسطة مجموعة كاشف Rotavirus-Antigen-ELISA-BEST لوجود فيروس الروتا A لم تتجاوز قيم الخلفية، أي القيم تم الحصول عليها نتيجة قياس الكثافة الضوئية في العينات السالبة الضابطة. أظهرت عينتان تحتويان على فيروسات نجمية، وعينة واحدة تحتوي على فيروس نورو من النمط الجيني الثاني، وعينة واحدة تحتوي على فيروس غدي، وعينتين لم يتم اكتشاف أي من مسببات الأمراض الفيروسية المذكورة أعلاه، قراءات كثافة بصرية إيجابية. تجدر الإشارة إلى أنه في العينات التي لم يتم اكتشاف أي من مسببات الأمراض الفيروسية فيها من قبل، تم تسجيل إشارات إيجابية فقط في إحدى الدراسات المتكررة (الجدول 2). وهكذا، كانت خصوصية مجموعة كاشف فيروس الروتا-مستضد-ELISA-BEST 93.2%.
خلال الاختبارات، تم تقييم إمكانية تكرار النتائج التي تم الحصول عليها عند استخدام مجموعة اختبار الكواشف "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" على المواد السريرية - تم اختبار جميع العينات ثلاث مرات في تجارب مختلفة لتحديد التباين في النتائج. وفي جميع الحالات تقريبًا، تم الحصول على نتائج مماثلة: اكتشف نظام الاختبار جميع العينات السلبية والإيجابية بالتساوي. كانت الاستثناءات عبارة عن عينتين لم يتم فيهما تحديد أي من مسببات الأمراض الفيروسية من قبل: في إحدى التكرارات لكلتا العينتين، تجاوزت قيم الكثافة الضوئية OPcrit. تجدر الإشارة إلى أن الفائض كان ضئيلاً (الجدول 2). وهكذا، كان استنساخ النتائج 98.8٪.
وأظهرت نتائج الاختبارات أن مجموعة الكواشف المختبرة "مستضد فيروس الروتا-ELISA-BEST" في فعاليتها التشخيصية - الخصوصية والحساسية وقابلية التكاثر - قابلة للمقارنة مع تلك المتوفرة في الاتحاد الروسي لأغراض التشخيص.
أنظمة الاختبار الكيميائي، مما يجعل من الممكن التنبؤ بموثوقية التشخيص للنتائج عند استخدام مجموعة الكواشف المدروسة "Ro-tavirus-antigen-ELISA-BEST" للكشف عن مستضد فيروس الروتا المجموعة A في المواد السريرية.
الأدب
1. بوجومولوف ب.ب. // "الأمراض المعدية: التشخيص في حالات الطوارئ والعلاج والوقاية." - م.، دياميد الجديدة. - 2007.
2. Vasiliev B.Ya.، Vasilyeva R.I.، Lobzin Yu.V.// "الأمراض المعوية الحادة. فيروسات الروتا وعدوى فيروس الروتا. - سانت بطرسبرغ، لان. - 2000.
3. Zhirakovskaya E.V.، Tikunov A.Yu.، Bodnev O.A.، وآخرون // "BIOpreparations". - 2008 - العدد 2. - ص. 15 - 18.
4. جيراكوفسكايا إي.في.، مالييف في.في.، بودنيف أ.س. وآخرون // JMEI - 2008 - رقم 4. - مع. 12 - 16.
5. إجناتيوك تي إي، جولوتفين آي إيه، ناسيكان إن إس، وآخرون // "أسئلة علم الفيروسات". - 2003. - ر 48. - رقم 6. - ص. 1721.
6. نوفيكوفا إن إيه، فيدوروفا أو إف، إيبيفانوفا إن في، تشوب روفا إيه بي // "أسئلة علم الفيروسات". - 2007. - ر.52. -رقم 3 - ق. 19-23.
7. بودكولزين إيه تي، موخينا إيه إيه، شيبولين جي إيه، وآخرون .//
"أمراض معدية". - 2004. - المجلد 2. - رقم 4. - ص. 85 -91.
8. Podkolzin A.T.، Fenske E.B.، Abramycheva N.Yu.، وآخرون .// "الأرشيف العلاجي". - 2007. - ر 79. - رقم 11. - ص. 10-16.
9. سيرجيفنين في آي، فولدشميت إن بي، سارموميتوف إي في، وآخرون // "علم الأوبئة والأمراض المعدية". -2004.-رقم 6.-ص. 17-20.
10. سيرجيفنين في آي، فولدشميت إن بي، سارموميتوف إي في، وآخرون // النظافة والصرف الصحي. - 2007. - العدد 1. - ص. 56-58.
11. أركانجيليتي إم إس، دي كونتو إي، بيناردي إف، وآخرون. // اكتا بيوميد. أتينيو. بارمينيس. - 2005.-V. 76(3). - ص165 -170.
12.جلادستون بي بي، إيتوريزا-جومارا إم، راماني إس، وآخرون. // وبائيول. تصيب. - 2008.V.136(3). - ص399-405.
13. مين بي إس، نوه واي جيه، شين جيه إتش، أتال. //ج. فيرول. طُرق. -2006. - خامسا 137 (2). - ص 280 - 286.
14. سانتوس إن، هونما إس، تيمينتسكي إمدو سي، وآخرون. //ج. كلين. ميكروبيول. - 2008. خامسا 46 (2). - ص 462 - 469.
15. شيتس إف إم، فان وينين جيه إتش، شيفين جيه إف، وآخرون. //تطبيق. البيئة. ميكروبيول. - 2008. - المجلد 74 (7). - ص 2069 - 2078.
16. ستوكمان إل جيه، ستات إم إيه، هولواي إم، وآخرون. // جي كلين. ميكروبيول. - 2008. - خامسا 46 (5). - ص 1842 - 1843.
تقييم حساسية وخصوصية مجموعة كاشف "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST"
الجدول 1
عدد العينات نتائج الكشف باستخدام الأدوية المرجعية IDEIA Rotavirus Astro-PCR Hopo 2-PCR Adeno-PCR نتائج الكشف باستخدام مجموعة "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST"
1. 30 30 0 0 0 30
2. 15 0 15 0 0 2
3. 14 0 0 14 0 1
4. 15 0 0 0 15 1
تقييم خصوصية مجموعة الكاشف “Rotavirus-antigen-ELISA-BEST>-
الجدول 2
PCR AmpliSense
فيروس الروتا فيروس الروتا فيروس الروتا فيروس الروتا
0,443 1,306 0,676 0,418
مستضد فيروس الروتا-ELISA-BEST JSC "Vector-Best"
OPCrit OPCrit OPCrit
0,250 0,263 0,251
> 4,000 > 4,000 > 4,000 3,926 > 4,000 3,939
> 4,000 > 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 > 4,000
جنيه استرليني سبتمبر
ديسمبر 2009
أمبليسينس
الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروسة العجلية الفيروس النجمي الفيروس النجمي الفيروس النجمي الفيروس النجمي الفيروس النجمي الفيروس النجمي
IDEIA فيروس الروتا DakoCytomation OPCrit = 0.150
0,401 0,322 1,659 0,566 0,518 1,278 1,285 0,809 1,160 0,407 0,218 0,703 1,889 1,069 1,302 0,879 1,842 0,747 0,793 1,013 1,124 0,670 0,726 0,683 0,814 0,997 0,206 0,052 0,050 0,034 0,040 0,048 0,040
فيروس الروتا-
أوبكرت 0.250
> 4,000 3,933 3,987 3,918 3,853 3,972
> 4,000 3,864 3,879 3,897 3,800
> 4,000 3,981
> 4,000 3,713
> 4,000 4.000
> 4,000 3,989
> 4,000 3,872 0,088 0,103 0,230 0,240 0,268 1,819 0,062
مستضد-ELISA-BEST "Vector-Best"
أوبكرت أوبكرت 0.263 0.251
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,821 3,899
> 4,000 3,964 3,845 3,923 3,962 3,871
> 4,000 3,929
> 4,000 3,881 3,884 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,800 3,851 3,818 >4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,995
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,837 3,839
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,986
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,998
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,823 0,063 0,073 0,054 0,061 0,255 0,250 0,256 0,244 0,278 0,560 1,117 1,235 0,052 0,052
الفيروس النجمي الفيروس النجمي الفيروس النجمي الفيروس النجمي الفيروس النجمي الفيروس النجمي الفيروس النجمي نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس الغدي الفيروس الغدي نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس نوروفيروس الغدي الفيروس الغدي الفيروس الغدي الفيروس الغدي الفيروس الغدي
IDEIA فيروس الروتا DakoCytomation OIIKpHT = 0.150
0,043 0,043 0,041 0,052 0,040 0,046 0,041 0,040 0,037 0,039 0,030 0,045 0,032 0,030 0,037 0,042 0,034 0,039 0,043 0,043 0,045 0,039 0,050 0,034 0,050 0,043 0,050 0,042 0,041 0,042 0,038 0,047 0,039
PoTaBHpyc-aHTHreH-HOA-EECT 3AO “BeKTop-Eect”
OnKpHT OnKpHT OIIKpHT
0,250 0,263 0,251
0,115 0,075 0,082
0,053 0,046 0,058
0,233 0,198 0,189
0,144 0,105 0,128
0,243 0,062 0,073
0,043 0,040 0,046
0,069 0,043 0,041
0,143 0,044 0,058
0,220 0,206 0,230
3,475 2,577 2,405
0,223 0,247 0,240
0,232 0,236 0,231
0,048 0,042 0,041
0,121 0,085 0,093
0,132 0,111 0,174
0,122 0,052 0,063
0,061 0,044 0,054
0,073 0,035 0,048
0,089 0,046 0,046
0,047 0,043 0,044
0,041 0,039 0,044
0,083 0,046 0,038
0,168 0,074 0,097
0,247 0,118 0,099
0,248 0,251 0,242
0,243 0,259 0,250
0,054 0,048 0,055
0,048 0,040 0,037
0,058 0,045 0,046
0,053 0,045 0,049
0,069 0,058 0,065
0,912 0,344 0,379
0,089 0,037 0,042
ديسمبر 2009
PCR AmpliSense
الفيروس الغدي الفيروس الغدي الفيروس الغدي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي سلبي
IDEIA فيروس الروتا DakoCytomation OPCrit = 0.150
0,040 0,044 0,039 0,041 0,260 0,044 0,046 0,042 0,047 0,041 0,039 0,048 0,055 0,035 0,039 0,040 0,041 0,033 0,046 0,049 0,048 0,038 0,039 0,029 0,037 0,036 0,043 0,043 0,039 0,042 0,034 0,037 0,041 0,036
فيروس الروتا - المستضد - ELISA-BEST JSC "Vector-Best"
OPCrit O P Crit OPCrit
0,250 0,263 0,251
0,105 0,042 0,043
0,046 0,143 0,133
0,227 0,045 0,042
0,065 0,068 0,054
0,125 0,039 0,042
0,196 0,191 0,182
0,209 0,170 0,154
0,316 0,071 0,073
0,058 0,043 0,049
0,171 0,056 0,061
0,049 0,060 0,064
0,047 0,062 0,065
0,058 0,047 0,066
0,073 0,072 0,066
0,188 0,120 0,109
0,180 0,074 0,072
0,057 0,063 0,058
0,047 0,060 0,047
0,162 0,146 0,143
0,248 0,248 0,260
0,063 0,066 0,104
0,247 0,223 0,251
0,054 0,053 0,070
0,242 0,240 0,248
0,073 0,061 0,103
0,066 0,065 0,064
0,108 0,123 0,192
0,072 0,067 0,071
0,079 0,079 0,087
0,104 0,079 0,164
0,169 0,150 0,162
0,140 0,166 0,146
0,114 0,133 0,131