9. الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية
الطريقة الرئيسية للتشخيص الميكروبيولوجي و "المعيار الذهبي" لعلم الأحياء الدقيقة هي الطريقة البكتريولوجية.
الغرض من الطريقة البكتريولوجيةيتكون من عزل الثقافة النقية للممرض عن مادة الاختبار ، وتراكم الثقافة النقية وتحديد هذه الثقافة من خلال مجموعة من الخصائص: المورفولوجية ، والتفاعلية ، والثقافية ، والكيميائية الحيوية ، والمستضدية ، من خلال وجود عوامل الإمراضية ، وعوامل السمية وتحديد حساسيتها للأدوية المضادة للميكروبات والعاثيات.
تشمل طريقة البحث البكتريولوجي ما يلي:
1. تلقيح مادة الاختبار في وسط المغذيات
2. عزلة الثقافة النقية
3. تحديد الكائنات الحية الدقيقة (تحديد الانتماء إلى نوع ما).
يتضمن عزل وتحديد الثقافات النقية للبكتيريا الهوائية واللاهوائية الدراسات التالية:
المرحلة الأولى (العمل مع المواد الأصلية)
الغرض: الحصول على مستعمرات معزولة
1. الفحص المجهري الأولي يعطي فكرة تقريبية عن البكتيريا
2. إعداد مادة للبحث
3. البذر على وسط مغذي كثيف للحصول على مستعمرات معزولة
4. الحضانة عند درجة الحرارة المثلى ، غالباً 37 درجة مئوية ، لمدة 18-24 ساعة
المرحلة الثانية
الغرض: الحصول على ثقافة نقية
1. دراسة مجهرية للمستعمرات في الضوء المنعكس والمرسل (خصائص الحجم ، الشكل ، اللون ، الشفافية ، الاتساق ، التركيب ، الكفاف ، سطح المستعمرات).
2. الفحص المجهري للمستعمرات المعزولة
3. اختبار التحمل الجوي (لتأكيد وجود اللاهوائية الصارمة في مادة الاختبار).
4. بذر المستعمرات المميزة لنوع معين على وسط تربية نقية أو وسط انتقائي وحضانة تحت الظروف المثلى.
المرحلة الثالثة
الغرض: تحديد الثقافة النقية المعزولة
1. لتحديد الثقافة المعزولة بواسطة مجموعة من الخصائص البيولوجية ، يتم دراسة ما يلي:
خصائص التشكل و tinctorial
الخصائص الثقافية (طبيعة النمو على وسط المغذيات)
الخصائص البيوكيميائية (النشاط الأنزيمي للكائنات الدقيقة)
الخصائص المصلية (مستضدية)
الخصائص الخبيثة (القدرة على إنتاج عوامل الإمراضية: السموم والإنزيمات وعوامل الدفاع والعدوانية)
الإمراضية للحيوانات
قابلية الإصابة بالعاثية (الحساسية للعاثيات التشخيصية)
حساسية للمضادات الحيوية
خصائص فردية أخرى
المرحلة الرابعة (الخلاصة)
وفقًا للخصائص المدروسة ، يتم التوصل إلى استنتاج حول الثقافة المعزولة
المرحلة الأولى من البحث.تبدأ دراسة المواد المرضية بالفحص المجهري. يتيح الفحص المجهري للمواد الأصلية الملوثة تحديد تكوين المشهد الميكروبي للكائن المدروس تقريبًا ، وبعض السمات المورفولوجية للكائنات الحية الدقيقة. تحدد نتائج الفحص المجهري للمواد الأصلية إلى حد كبير مسار البحث الإضافي ، وبالتالي تتم مقارنتها بالبيانات التي تم الحصول عليها أثناء التلقيح على وسائط المغذيات.
مع وجود محتوى كافٍ من الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض في العينة ، يتم إجراء التلقيح على وسط مغذي كثيف (للحصول على مستعمرات معزولة). إذا كان هناك عدد قليل من البكتيريا في مادة الاختبار ، فسيتم إجراء التلقيح على وسائط تخصيب المغذيات السائلة. يتم اختيار الوسائط الغذائية وفقًا لمتطلبات الكائنات الحية الدقيقة.
لا يمكن زراعة الكائنات الحية الدقيقة إلا عند تهيئة الظروف المثلى لنشاطها الحيوي ومراعاة القواعد التي تستبعد التلوث (التلوث العرضي بالميكروبات الأجنبية) لمواد الاختبار. يمكن إنشاء الظروف الاصطناعية التي من شأنها استبعاد تلوث المستنبت عن طريق الأنواع الأخرى في أنبوب اختبار أو قارورة أو طبق بتري. يجب أن تكون جميع الأواني ووسائط المغذيات معقمة ، وبعد تلقيح المواد الميكروبية ، محمية من التلوث الخارجي ، والذي يتم تحقيقه باستخدام سدادات أو أغطية وأغطية معدنية. يجب إجراء التلاعب بمواد الاختبار في منطقة اللهب لمصباح كحول لاستبعاد تلوث المادة من البيئة الخارجية ، وكذلك من أجل الامتثال لأنظمة السلامة.
يجب أن يتم تلقيح المادة على وسائط المغذيات في موعد لا يتجاوز ساعتين من لحظة جمعها.
المرحلة الثانية من البحث.دراسة المستعمرات وعزل الثقافات النقية. بعد يوم من الحضانة ، تنمو المستعمرات على الصفائح ، وفي الضربة الأولى يستمر النمو ، وفي المستعمرات التالية المعزولة. المستعمرة هي مجموعة من الميكروبات من نفس النوع والتي نمت من خلية واحدة. نظرًا لأن المادة غالبًا ما تكون مزيجًا من الميكروبات ، فإن عدة أنواع من المستعمرات تنمو. يتم تمييز المستعمرات المختلفة بقلم رصاص ، وتحديدها بدائرة من جانب القاع ، ودراستها (الجدول 11). بادئ ذي بدء ، ادرس المستعمرات بالعين المجردة: العلامات العيانية. يُنظر إلى الطبق (بدون فتحه) من الجانب السفلي في الضوء المنقول ، يتم ملاحظة شفافية المستعمرات (شفافة ، إذا لم تحبس الضوء ؛ شفافة ، إذا كانت تحبس الضوء جزئيًا ؛ معتم ، إذا لم يمر الضوء من خلالها المستعمرة) ، قياس (مم) حجم المستعمرات. ثم يدرسون المستعمرات من جانب الغطاء ، ويلاحظون الشكل (دائري منتظم ، غير منتظم ، مسطح ، محدب) ، طبيعة السطح (أملس ، لامع ، باهت ، خشن ، متجعد ، رطب ، جاف ، مخاطي) ، اللون (عديم اللون ، ملون).
الجدول 11. مخطط دراسة المستعمرات
|
الخصائص الممكنة للمستعمرة |
||
|
مسطحة ، محدبة ، على شكل قبة ، منخفضة ، دائرية ، على شكل وردية ، على شكل نجمة |
||
|
الحجم ، مم |
كبير (4-5 مم) ، متوسط (2-4 مم) ، صغير (1-2 مم) ، قزم (< 1 мм) |
|
|
طبيعة السطح |
أملس (شكل S) ، خشن (شكل R) ، غروي (شكل M) ، مخطط ، وعر ، غير لامع ، لامع |
|
|
عديم اللون ، مصبوغ |
||
|
الشفافية |
شفاف ، معتم ، وشفاف |
|
|
طبيعة الحواف |
ناعم ، مسنن ، مهدب ، ليفي ، صدفي |
|
|
الهيكل الداخلي |
متجانسة ، حبيبية ، غير متجانسة |
|
|
تناسق |
لزج ، لزج ، متفتت |
|
|
استحلاب في قطرة ماء |
جيد سيئ |
ملحوظة: يتم دراسة 5-7 نقاط عند التكبير المنخفض بالمجهر.
يمكنك رؤية الفرق بين المستعمرات بشكل أفضل عندما تقوم بتكبيرها. للقيام بذلك ، يتم وضع طبق مغلق مقلوبًا على طاولة كائن ، ويتم خفض المكثف قليلاً ، ويتم استخدام تكبير صغير للهدف (x8) ، وتحريك الطبق ، ويتم دراسة العلامات المجهرية في المستعمرات: طبيعة حافة (ناعمة ، مموجة ، مسننة ، صدفي) ، بنية (متجانسة ، حبيبية ، ليفية ، متجانسة ، أو مختلفة في الوسط وعلى طول المحيط).
بعد ذلك ، تتم دراسة مورفولوجيا الخلايا الميكروبية من المستعمرات. للقيام بذلك ، يتم إجراء المسحات من جزء من كل مستعمرة ملحوظة ، ملطخة وفقًا لجرام. عند أخذ المستعمرات ، انتبه إلى الاتساق (جاف ، إذا كانت المستعمرة تنهار ويصعب أخذها ؛ لينة ، إذا تم أخذها بسهولة على الحلقة ؛ لزجة ، إذا كانت المستعمرة تصل إلى الحلقة ؛ قاسية ، إذا كانت جزءًا من المستعمرة لا يتم أخذها بواسطة الحلقة ، يمكن إزالة المستعمرة بأكملها فقط).
عند مشاهدة اللطاخات ، ثبت أن المستعمرة ممثلة بنوع واحد من الميكروبات ، وبالتالي ، يمكن عزل الثقافات النقية للبكتيريا. للقيام بذلك ، من المستعمرات المدروسة ، تتم إعادة البذر على أجار مائل. عند إعادة البذر من المستعمرات ، يجب توخي الحذر لأخذ المستعمرات المقصودة بالضبط ، دون لمس حلقة المستعمرات القريبة. يتم توقيع الأنابيب واحتضانها في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
المرحلة الثالثة من البحث.تحديد الثقافة المعزولة. تحديد الميكروبات - تحديد الموقع المنهجي للثقافة المعزولة من المادة إلى النوع والمتغير. الشرط الأول لموثوقية التحديد هو النقاء غير المشروط للثقافة. لتحديد الميكروبات ، يتم استخدام مجموعة من العلامات: المورفولوجية (الشكل ، الحجم ، وجود الأسواط ، الكبسولات ، الجراثيم ، الترتيب المتبادل في اللطاخة) ، الصفيح (العلاقة بصبغة جرام أو طرق أخرى) ، الكيميائية (نسبة الجوانين + السيتوزين في جزيء الحمض النووي) ، ثقافي (متطلبات المغذيات ، ظروف الزراعة ، معدل وطبيعة النمو على وسائط المغذيات المختلفة) ، الأنزيمية (انقسام المواد المختلفة مع تكوين المنتجات الوسيطة والنهائية) ، السيرولوجي (التركيب المستضدي ، الخصوصية) ، البيولوجية (الفوعة للحيوانات ، السمية ، الحساسية ، تأثير المضادات الحيوية ، إلخ).
للتمايز البيوكيميائي ، قدرة البكتيريا على تخمر الكربوهيدرات مع تكوين وسيط و المنتجات النهائية ، والقدرة على تحلل البروتينات والببتون ، ودراسة إنزيمات الأكسدة والاختزال.
لدراسة الإنزيمات المحللة للسكريات ، يتم تلقيح الثقافات المعزولة في أنابيب الاختبار بوسائط شبه سائلة تحتوي على اللاكتوز والجلوكوز والكربوهيدرات والبوليولات الأخرى. في وسط شبه سائل ، يتم التلقيح عن طريق الحقن في عمق الوسط. عند البذر عن طريق الحقن ، يتم إمساك أنبوب الاختبار بالوسيط بزاوية ، ويتم إزالة السدادة ، ويتم حرق حافة أنبوب الاختبار. يتم أخذ المادة بحلقة معقمة وعمود من وسط المغذيات مثقوب تقريبًا إلى الأسفل.
لتحديد الإنزيمات المحللة للبروتين ، يتم تلقيح الثقافة المعزولة على ماء الببتون أو MPB. للقيام بذلك ، يأخذون أنبوب اختبار مع تلقيح أقرب إلى أنفسهم ، وأنبوب اختبار بالوسيط - بعيدًا عن أنفسهم. يتم فتح كل من أنابيب الاختبار في نفس الوقت ، وتلتقط سداداتهما بإصبع صغير وحافة راحة اليد ، ويتم حرق حواف أنابيب الاختبار ، ويتم التقاط القليل من الثقافة باستخدام حلقة مبردة مكلسة ونقلها إلى أنبوب الاختبار الثاني ، يسحق في وسط سائل على جدار أنبوب الاختبار ويغسل بالوسيط.
عند البذر وإعادة البذر ، يجب الانتباه إلى الامتثال لقواعد العقم ، حتى لا تلوث محاصيلهم بالنباتات الدقيقة الدخيلة ، وكذلك لا تلوث البيئة. يتم تمييز الأنابيب ووضعها في منظم حرارة للحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة يوم.
خاتمة
المحاسبة عن النتائج. استنتاج البحث. تؤخذ نتائج التحديد في الاعتبار ، وبناءً على مجمل البيانات التي تم الحصول عليها ، بناءً على تصنيف وخصائص سلالات النوع الموصوفة في الدليل (دليل بيرجي ، 1994-1996) ، يتم تحديد نوع الثقافات المعزولة.
| " |
4.2 العوامل البيولوجية والميكروبيولوجية
التشخيص البكتريولوجي لحمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية A و B و C
تاريخ التقديم: من لحظة الموافقة
1. وضعت: FGUN سانت بطرسبرغ NIIEM لهم. Pasteur of Rospotrebnadzor (L.A. Kaftyreva، Z.N. Matveeva، G.F. Trifonova) ؛ GOUVPO "أكاديمية سانت بطرسبرغ الطبية الحكومية تحمل اسم I.I. Mechnikov" من الوكالة الفيدرالية للصحة والتنمية الاجتماعية (A.G. Boytsov).
3. تمت الموافقة عليه من قبل رئيس الخدمة الفيدرالية للإشراف على حماية حقوق المستهلك ورفاهية الإنسان ، كبير الأطباء الصحيين للدولة في الاتحاد الروسي G.G. Onishchenko 29 ديسمبر 2007 0100 / 13745-07-34
4. مقدمة من لحظة الموافقة.
5. مقدمة للمرة الأولى.
1 مجال الاستخدام
1 مجال الاستخدام
1.1 حددت المبادئ التوجيهية المبادئ والخصائص الأساسية للتشخيص البكتيريولوجي لحمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية A و B و C ؛ يحتوي على معلومات حديثة حول الخصائص البيولوجية لمسببات الأمراض ، ومقاومة الأدوية المضادة للبكتيريا ، والوسائط الغذائية لعزلها ، وخصائص التمايز بين مسببات الأمراض التيفوئيدية ونظيرة التيفية عن المتغيرات المصلية الأخرى للسالمونيلا.
2. قائمة الاختصارات
ABP - دواء مضاد للجراثيم
BCA - أجار كبريتيت البزموت
MPU - مؤسسة طبية ووقائية
MIC - أدنى تركيز مثبط
ف - متوسط
ش - مستقر
H - حساس
RIF - تفاعل التألق المناعي
CNS - الجهاز العصبي المركزي
في الجداول:
"+" - رد فعل إيجابي في اليوم الأول ؛
"-" - رد فعل سلبي لمدة 4-20 يومًا ؛
"(+)" - رد فعل إيجابي متأخر لمدة 2-20 يومًا ؛
د - تفاعلات إنزيمية مختلفة.
التمايز إلى المتغيرات الأنزيمية ممكن.
3. أحكام عامة
3.1. حمى التيفوئيد والنظيرة التيفية A و B و C هي عدوى معوية بشرية المنشأ تسببها السالمونيلا التيفية ، السالمونيلا باراتيفي أ ، السالمونيلا باراتيفي ب ، السالمونيلا بارايفي سي نادرًا - نظيرة التيفية C.
3.2 تتميز الأمراض بآفات تقرحية في الجهاز الليمفاوي للأمعاء الدقيقة ، تجرثم الدم ، الحمى ، الدورة السريرية الدورية مع التسمم الحاد ، الطفح الجلدي الوردي على جلد الجسم ، تضخم الكبد والطحال. الإمساك أكثر شيوعًا من الإسهال. يؤدي تقرح بقع باير في الدقاق في حوالي 1٪ من الحالات إلى نزيف معوي وانثقاب في الأمعاء مع أكثر العواقب سلبية على المريض.
3.3 يتم تشخيص حمى التيفوئيد ومظلة التيفوئيد A و B و C على أساس العلامات السريرية للمرض ، مع مراعاة التاريخ الوبائي والبيانات من الفحص المعملي الشامل ، والذي يتضمن الطرق البكتريولوجية والمصلية الكلاسيكية. التشخيصات البكتريولوجية ذات أهمية ذات أولوية ، لأن في هذه الحالة ، من الممكن الحصول على أكمل المعلومات حول الخصائص البيولوجية للممرض ، بما في ذلك حساسيته للأدوية المضادة للبكتيريا.
3.4. إن استخدام العقاقير المضادة للميكروبات في العلاج الموجه للسبب من حمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية جعل من الممكن ، من ناحية ، خفض معدل الوفيات من 10-20٪ إلى أقل من 1٪ ، ومن ناحية أخرى ، أدى ذلك إلى تعقيد التشخيص المختبري ، لأنه غالبًا ما يتم أخذ عينات من المواد للأبحاث المخبرية بعد بدء العلاج بالمضادات الحيوية. هذه الحقيقة تجعل من الضروري التعامل مع مسألة اختيار المواد للبحث ، وأخذ المواد قيد الدراسة ، وتقنيات البحث بعناية أكبر.
3.5 السمة الحديثة لوبائيات حمى التيفوئيد هي الزيادة الحادة في وتيرة استيراد (حمل) العدوى من المناطق الموبوءة بهذا المرض ، والبلدان القريبة والبعيدة في الخارج ، وكذلك إصابة المقيمين الروس عند المغادرة إلى هذه البلدان و في عملية الهجرة داخل البلاد. ميزة أخرى هي وجود مجموعة كبيرة من المخاطر الوبائية عالية في شكل أشخاص ليس لديهم مكان إقامة ثابت ، ومن بينهم يتم تسجيل ارتفاع معدل الإصابة بحمى التيفود.
3.6 تم وضع هذه الإرشادات لتوحيد طرق التشخيص البكتريولوجي لحمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفوئيد A و B و C ، وكذلك التفسير الصحيح لنتائج الدراسة المعملية ، مع مراعاة السمات الحديثة للعيادة ، العلاج والوضع الوبائي في مناطق محددة.
4. مؤشرات للتشخيص البكتريولوجي
هناك حاجة للفحص من أجل الفحص الجرثومي للمواد البيولوجية لوجود مسببات أمراض حمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفوئيد A و B و C:
4.1) المرضى الذين يشتبه في إصابتهم بحمى التيفود ، وكذلك الحمى مجهولة السبب ، لمدة 5 أيام أو أكثر ؛
4.2) الأشخاص الذين كانوا على اتصال بمرضى يعانون من حمى التيفوئيد وحمى نظيرة التيفية A ، B ، C ؛
4.3) العاملين في بعض المهن والصناعات والمنظمات عند قبولهم في العمل ووفقًا لمؤشرات وبائية ؛
4.4) الأشخاص قبل دخولهم المستشفيات والمصحات المتخصصة حسب المؤشرات السريرية والوبائية ؛
4.5) الأشخاص عند التسجيل لعلاج المرضى الداخليين في المستشفيات (الأقسام) من الملف النفسي العصبي (النفسي) ، ودور رعاية المسنين ، والمدارس الداخلية للأشخاص المصابين بأمراض عقلية مزمنة وآفات الجهاز العصبي المركزي ، وأنواع أخرى من المؤسسات المغلقة مع على مدار الساعة يقضي؛
4.6) المرضى الذين يعانون من حمى التيفود والنظيرة التيفية بعد اختفاء الأعراض السريرية للمرض قبل الخروج من المستشفى ؛
4.7) الأشخاص الذين أصيبوا بحمى التيفوئيد والنظيرة التيفية أثناء المراقبة في المستوصف ؛
4.8) ناقلات البكتيريا المزمنة التي تم تحديدها بين العاملين في بعض المهن والصناعات والمنظمات ، عند إعادة توظيفهم في هذه المؤسسات والمنشآت ؛
4.9) مادة مقطعية في حالة الاشتباه في حمى التيفود والحمى نظيرة التيفية.
5. لوجستيات الطريقة
5.1 اختبار معياري ومعدات مساعدة ، أدوات قياس للمختبرات الميكروبيولوجية.
5.2 وسائط المغذيات والأمصال التشخيصية والكواشف الكيميائية للزراعة والعزل والتعرف وتحديد الحساسية للأدوية المضادة للبكتيريا للعوامل المسببة لحمى التيفوئيد والنظيرة التيفية A و B و C.
5.3 للتشخيص المختبري لأمراض التيفوئيد والنظيرة التيفية والكشف عن ناقلات البكتيريا ، يجب استخدام وسائط المغذيات والكواشف المعتمدة للاستخدام في أراضي الاتحاد الروسي وفقًا للإجراءات المعمول بها.
6. التشخيص المختبري للتيفوئيد و نظير التيفوئيد
6.1 يعتمد مبدأ الطريقة البكتريولوجية على الكشف عن الكائنات الحية الدقيقة في مختلف الركائز البيولوجية (الدم ، والبول ، والبراز ، والصفراء ، ونخاع العظام ، والطفح الوردي) حسب مرحلة المرض. للقيام بذلك ، يتم زرع كمية معينة من المواد البيولوجية على وسائط مغذية خاصة ، تليها حضانة في منظم حرارة وتحديد المستعمرات المزروعة للكائنات الدقيقة المميزة لـ S. Typhi ، S. Paratyphi A ، S. Paratyphi B و S. Paratyphi C ، وفقًا للخصائص الثقافية والإنزيمية وخصائص المستضدات.
6.2 يمكن فقط للدراسة البكتريولوجية أن توفر تشخيصًا دقيقًا للمسببات والتحكم في إطلاق الجسم من العامل الممرض. فيما يتعلق بالتشخيص التفريقي لحمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفوئيد ، فإن الطريقة الوحيدة هي دراسة معملية للمادة البيولوجية مع عزل العامل الممرض وتحديده إلى مستوى المتغير المصلي ، tk. لا يجعل المسار السريري للعملية المعدية من الممكن دائمًا التمييز بين هذه الأشكال التصنيفية.
7. الفحص البكتريولوجي
7.1 يتم عزل العوامل المسببة لحمى التيفوئيد و paratyphoids A و B و C وفقًا لنفس مخطط الفحص البكتريولوجي للمواد الحيوية.
7.2 يتم تحديد الإجراء الخاص بجمع المواد للاختبارات المعملية لأمراض التيفوئيد ونظير التيفوئيد بواسطة SP 3.1.1.2137-06.
7.3. تم وصف تقنية جمع ونقل المواد الحيوية إلى المعامل الميكروبيولوجية في MU 4.2.2039-05.
7.4. المواد المستخدمة في البحث البكتريولوجي لتشخيص حمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفوئيد هي:
دم؛
فضلات.
البول.
يمكن أيضًا عزل مسببات الأمراض من:
روزول.
نخاع العظم؛
حليب الثدي.
المواد المستخدمة في البحث البكتريولوجي للتعرف على ناقلات البكتيريا ، وفقًا للمواصفة SP 3.1.1.2137-06 ، هي:
فضلات.
البول.
الصفراء (محتويات الاثني عشر).
7.5 يتم إجراء دراسة المواد المقطعية من أجل توضيح التشخيص.
7.6. يتم جمع المواد البيولوجية للأبحاث المخبرية قبل بدء العلاج الموجه للسبب: بواسطة عامل طبي يشتبه في إصابته بعدوى التيفود نظير التيفوئيد ؛ في حالة المرض الجماعي والفاشي - من قبل المتخصصين في مؤسسات Rospotrebnadzor وموظفي المؤسسات الطبية. من المرضى في المستشفى ، يتم أخذ مواد الفحص البكتريولوجي في قسم الطوارئ بالمستشفى.
7.7 من الأشخاص الذين تواصلوا مع المرضى أو الناقلين (جهات الاتصال) ، يتم جمع المواد من قبل العاملين الطبيين في المرافق الصحية والمنظمات والمؤسسات الأخرى في المكان الذي يتم فيه تحديد المرضى.
7.8 المواد الحيوية للأبحاث المختبرية مصحوبة بتوجيه خاص. لا يُسمح بتسليم المواد من قبل الأشخاص أنفسهم. إذا كان تسليم المواد في الوقت المناسب مستحيلًا ، يتم استخدام المواد الحافظة ووسائط النقل (الجدول 1).
8. فحص الدم البكتريولوجي
مؤشر فحص الدم هو الاشتباه في الإصابة بأمراض التيفوئيد أو نظير التيفوئيد أو حالة حمى مجهولة المصدر (حمى مجهولة المنشأ) ، لوحظ لمدة 5 أيام أو أكثر (SP 3.1.1.2137-06).
يجب أن تكون نسبة الدم إلى وسط المغذيات 1: 10-1: 60. يتم تحديد عدد عينات الدم المأخوذة بشكل مستقل ووقت أخذها من قبل الطبيب المعالج وفقًا لـ MU 4.2.2039-05 للحمى مجهولة المنشأ أو وفقًا لـ MU 04-723 / 3 من وزارة الصحة في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية ( 1984) لأمراض التيفود نظيرة التيفية المشتبه بها. في المرضى الذين يتلقون الأدوية المضادة للبكتيريا ، يجب جمع العينات مباشرة قبل إدخال (استقبال) الجرعة التالية من الدواء.
في حالة وجود حمى ، من الأفضل أخذ الدم على خلفية ارتفاع درجة حرارة الجسم (ولكن ليس في ذروة درجة الحرارة!). يتم البذر على وسط المغذيات مباشرة على سرير المريض.
في حالة الاشتباه بأمراض التيفوئيد - نظير التيفوئيد ، يمكن استخدام وسط Rapoport ، 20٪ مرق الصفراء ، مرق ببتون اللحم مع إضافة 1٪ جلوكوز (في قوارير سعة 100 مل) لزراعة الدم. مزارع الدم المستخدمة سابقًا في ماء مقطر معقم (صنبور). ومع ذلك ، فمن الأفضل استخدام وسائط خاصة لزراعة الدم.
يمكن أن تكون كمية الدم المزروعة في ذروة الحمى 10 مل ، في وقت لاحق - حتى 20 مل (للأطفال - ما يصل إلى 5 مل).
بالنسبة للحمى مجهولة المصدر والتي تستمر لأكثر من 5 أيام ، كقاعدة عامة ، يجب فحص عدة عينات من الدم. يتم أخذ عينات الدم من الوريد وفقًا لـ MU 4.2.2039-05. هذا ضروري للتمييز بين تجرثم الدم الحقيقي والتلوث العرضي للدم أثناء بزل الوريد (احتمال تلوث العينة بسبب ثقب عرضي في الغدة الدهنية أو العرقية هو 3٪). في هذه الحالة ، يتم استخدام وسيلتين لثقافة الدم: 1) وسيط للأيروبس واللاهوائية الاختيارية و 2) وسيط اللاهوائية الملزمة (على سبيل المثال ، وسط "مزدوج" + ثيوجليكول وفقًا لأمر وزارة الصحة في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية بتاريخ 12.04.85 N 535) أو وسيط عالمي للأيروبس واللاهوائية.
يفضل استخدام الوسائط المنتجة صناعياً المعتمدة للاستخدام في روسيا.
يتم تحضين المحاصيل عند 37 درجة مئوية لمدة 10 أيام مع المشاهدة اليومية. في هذه الحالة ، تكون القوارير ذات الوسط "المزدوج" مائلة ، لتغسل الجزء الكثيف من الوسط.
في حالة عدم وجود بوادر للنمو في اليوم العاشر ، يتم إصدار إجابة سلبية.
إذا كانت هناك علامات نمو (عكارة ، احمرار وسط Rapoport ، ظهور مستعمرات مرئية على الجزء الكثيف من الوسط "المزدوج") ، تتم عملية البذر بالتوازي على وسط متعدد الكربوهيدرات ووسط كثيف في أطباق بتري ( أجار الدم في حالة الحمى مجهولة المنشأ ووسط إندو في حالة الاشتباه بأمراض التيفود نظيرة التيفوئيد).
يتم إجراء التلقيح المباشر على وسائط متعددة الكربوهيدرات لتقليل وقت الدراسة ، بناءً على افتراض أنه عندما يتم تلقيح الدم باحتمالية عالية ، سيتم ملاحظة نمو الزراعة الأحادية الممرضة. يعد الطلاء الموازي على وسط إندو أو أجار الدم ضروريًا للتحكم في هذا الافتراض وعزل ثقافة نقية عن طريق تقسيم المستعمرات الفردية.
إذا لوحظ نمو الزراعة الأحادية على هذه الوسائط ، فيمكن عندئذٍ مراعاة الخصائص الكيميائية الحيوية لوسط متعدد الكربوهيدرات. للتحكم في نقاء الثقافة ، من الضروري إجراء فحص مجهري للطاخة من وسط متعدد الكربوهيدرات ملطخ بالجرام. في هذه المرحلة ، من الممكن أيضًا إعداد تفاعل تراص على الزجاج مع تراص O- و H-salmonella sera وإصدار إجابة أولية.
يوضح الشكل 1 مخطط الفحص البكتريولوجي لدم المرضى الذين يشتبه في إصابتهم بحمى التيفود وحمى نظيرة التيفوئيد.
رسم بياني 1. مخطط الفحص البكتريولوجي لدم المرضى المشتبه في إصابتهم بالتيفوئيد والنظيرة التيفية
رسم بياني 1. مخطط الفحص البكتريولوجي لدم المرضى المشتبه في إصابتهم بالتيفوئيد والنظيرة التيفية
يظهر مخطط الفحص البكتريولوجي لدم المرضى الذين يعانون من حمى مجهولة المنشأ في الشكل 2.
الصورة 2. مخطط الفحص الجرثومي لدم مرضى حمى مجهولة المنشأ
الصورة 2. مخطط الفحص الجرثومي لدم مرضى حمى مجهولة المنشأ
يتم وصف مسار التعرف على الثقافة بشكل أكبر من خلال الخصائص الثقافية المورفولوجية والإنزيمية والخصائص المصلية في الأقسام ذات الصلة.
9. الفحص البكتريولوجي للبراز
يتم أخذ عينات البراز فورًا بعد التغوط من وعاء مطهر ومغسل جيدًا ، حيث يتم وضع ورقة سميكة ونظيفة في قاعها. يتم جمع المادة باستخدام ملعقة - ملعقة مثبتة في غطاء وعاء معقم. في حالة عدم وجود وعاء به ملعقة ، يتم استخدام أي أداة معقمة (ملعقة خشبية معقمة ، حلقة سلكية ، ملعقة ، إلخ) لأخذ المادة. في حالة وجود شوائب مرضية ، من الضروري تحديد المناطق التي تحتوي على مخاط ، صديد ، رقائق ، ولكنها خالية من الدم. يتم أخذ عينات من البراز السائل باستخدام ماصة بلاستيكية معقمة بخزان مغلق.
يجب ألا يقل حجم المادة المأخوذة عن 2 جم ، والمواد المثلى هي أخذ المادة في حالة الكرسي المزخرف - بمقدار حبة الجوز ؛ في حالة وجود براز رخو ، يجب أن تكون طبقته في الوعاء 1.5-2.0 سم على الأقل ، ويتم تسليم المادة الموضوعة في وعاء معقم إلى المختبر في غضون ساعتين.
إذا تعذر تسليم المادة إلى المختبر في غضون ساعتين ، يتم جمعها في مادة حافظة (نظام نقل مع وسيط). يجب ألا يتجاوز حجم المادة حجم الوسط.
يجب أن يكون البراز متجانسًا بعناية في الوسط. يمكن تخزين العينات قبل بدء الدراسة خلال النهار في الثلاجة (4-6 درجات مئوية).
يتم عرض وسائط النقل والمواد الحافظة المستخدمة لعزل العوامل المسببة لحمى التيفوئيد ومظلة التيفوئيد A و B و C ، بالإضافة إلى مسببات الأمراض الأخرى للعدوى المعوية الحادة ، في الجدول 1.
الجدول 1
وسائط النقل والمواد الحافظة الأكثر استخدامًا لنقل البراز
|
اسم البيئة |
يوفر الحفظ |
|
الأربعاء كاري بلير |
جميع مسببات الأمراض المعوية ، بما في ذلك العطيفة |
|
الأربعاء أميس |
كل البكتيريا المعوية |
|
الأربعاء ستيوارت |
السالمونيلا والشيغيلا |
|
خليط الجلسرين |
جميع البكتيريا المعوية باستثناء يرسينيا ؛ مفضل للشيغيلا |
|
خليط عازلة الفوسفات |
كل البكتيريا المعوية |
|
محلول بورات العازلة |
كل البكتيريا المعوية |
|
محلول ملحي |
جميع البكتيريا المعوية ، بما في ذلك العطيفة |
تُستخدم عينات البراز التي يتم جمعها مباشرة من المستقيم باستخدام مسحة من المستقيم في المقام الأول لتحديد التشخيص (MU 4.2.2039-05). يتم أخذ المواد من قبل الموظفين المساعدين الطبيين. كقاعدة عامة ، يعتبر المسبار الخاص لأخذ اللطاخة جزءًا من نظام النقل. من المهم ملاحظة أن دخول وسائط النقل على الغشاء المخاطي للمستقيم أمر غير مقبول! لذلك ، يجب غمر مسحة المستقيم في وسيط النقل فقط بعد أخذ المادة. يُطلب من المريض الاستلقاء على جانبه مع سحب الوركين إلى المعدة والأرداف مع راحة اليدين. يتم إدخال مسبار المسحة في فتحة الشرج على عمق 4-5 سم ، ويتم تدويره برفق حول المحور ، ويتم جمع المواد من خبايا فتحة الشرج. قم بإزالة مسبار المسحة بعناية واغمره في وسط النقل. لا يُسمح بنقل السدادات القطنية بدون وسيط.
في المختبر ، يتم تلقيح عينات البراز مباشرة على وسط كثيف من المغذيات التشخيصية التفاضلية وبالتوازي على وسط التخصيب.
يظهر مخطط الفحص البكتريولوجي للبراز في الشكل 3.
تين. 3. مخطط الفحص البكتريولوجي للبراز
تين. 3. مخطط الفحص البكتريولوجي للبراز
من البراز الأصلي ، يتم تحضير معلق في محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪ بنسبة 1: 5-1: 10 ، ويترك لمدة 30 دقيقة حتى تستقر الجزيئات الكبيرة. بعد ذلك ، يتم تلقيح نقطة واحدة من المادة الطافية في أطباق ذات وسائط مغذية كثيفة ويتم تلقيح 1 مل من المعلق في وسط التخصيب (يجب أن تكون نسبة المادة المتوسطة 1: 5).
يجب تجانس البراز الذي يتم تسليمه إلى المختبر في مادة حافظة (وسيط نقل) بعناية في الوسط قبل التلقيح ، وبعد ذلك يتم تلقيح المادة مباشرة على وسائط صلبة ووسط تخصيب بنفس نسب البراز الأصلي.
يتم فحص عينات البراز التي يتم جمعها باستخدام مسحة من المستقيم بطريقة مماثلة للبراز الذي يتم تسليمه في مادة حافظة. يجب أن نتذكر أن مسحة المستقيم تحتوي على عدد أقل من الكائنات الحية الدقيقة مقارنة بالبراز الأصلي ، لذلك يجب زيادة جرعة اللقاح.
يتم تحقيق أقصى قدر من الكشف عن S. Typhi و S. Paratyphi A و S. Paratyphi B و S. Paratyphi C في البراز باستخدام وسائط التخصيب ، على الرغم من أنه في المرضى في الفترة الحادة من المرض ، غالبًا ما يتم عزل العامل الممرض عن طريق التلقيح المباشر. التلقيح على وسائط التخصيب بالتوازي مع التلقيح المباشر إلزامي!
يتم تحضين جميع التطعيمات عند 37 درجة مئوية على وسائط التشخيص التفاضلي لمدة 18-24 ساعة ، على أجار البزموت والكبريتيت لمدة 24-48 ساعة. بعد 24 ساعة ، يتم البذر من وسائط التخصيب على وسائط صلبة (أجار البزموت-كبريتات أو إندو واسطة). يتم فحص المستعمرات المميزة لهذه العوامل الممرضة ، التي تنمو على وسط كثيف ، على وسط متعدد الكربوهيدرات.
وتجدر الإشارة إلى أن تقنية نشر المادة على سطح صفيحة ذات وسائط كثيفة يجب أن تضمن نمو مستعمرات معزولة من النوع النموذجي ، والتي يمكن استخدامها لتقييم الخصائص الثقافية للكائن الدقيق بصريًا.
أجار كبريت البزموت (BCA) هو الطريقة المفضلة لعزل S. Typhi. المستعمرات النموذجية من S. Typhi سوداء ومحاطة بحافة سوداء أو بنية مع لمعان معدني. ومع ذلك ، غالبًا لا ينتج S. Typhi اللون الأسود المميز لـ ICA عند حدوث نمو وفير ، لذلك يجب تلقيح الألواح للسماح بنمو مستعمرة واحدة.
يمكن تلقيح عينات البراز على وسائط انتقائية قياسية للبكتيريا المعوية المعتمدة للاستخدام في الاتحاد الروسي. ومع ذلك ، فإن أجار كبريتيت البزموت هو الطريقة المفضلة لعزل S. tymhi. تم وصف مسار التعرف على الثقافات من خلال الخصائص الأنزيمية والخصائص المصلية بمزيد من التفصيل في الأقسام ذات الصلة.
10. الفحص البكتريولوجي للبول
يتم إجراء زراعة البول للتشخيص من الأيام الأولى للمرض وحتى خروج المريض ، وكذلك من أجل التعرف على الناقل الجرثومي. نظرًا لأن إفراز التيفوئيد ونظير التيفوئيد في البول يحدث بشكل دوري ولفترة قصيرة ، يجب تكرار اختبارات البول على فترات تتراوح من 5 إلى 7 أيام.
يجب عليك الالتزام الصارم بالقواعد العامة لجمع البول ، المنصوص عليها في MU 4.2.2039-05. بغض النظر عن طريقة الحصول على البول ، يجب تسليمه إلى المختبر في غضون ساعتين ، وفي الحالات القصوى ، يمكن تخزين البول طوال الليل في الثلاجة.
يجب أن نتذكر أنه ، اعتمادًا على التركيب الكيميائي للبول ، يمكن للبكتيريا الموجودة فيه أن تموت أثناء التخزين وتتكاثر.
يمكن أن تؤدي زيادة العمر الافتراضي للمادة إلى صعوبة تفسير النتيجة.
يتم إجراء التلقيح المباشر للبول (أو الرواسب بعد الطرد المركزي) بدون تخصيب أولي وفقًا لأمر وزارة الصحة في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية N 535 على وسائط التشخيص التفاضلية الكثيفة الموصى بها للسالمونيلا ، بما في ذلك مسببات الأمراض التيفية ونظيرة التيفية. في الوقت نفسه ، يتم تلقيح البول الأصلي في وسائط تخصيب ذات تركيز مزدوج بنسبة 1: 1 ، أو يتم تلقيح رواسب البول في وسائط ذات تركيز طبيعي. يتم وضع التطعيمات في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة ، ثم يتم تلقيح وسط التخصيب على وسط تشخيص تفاضلي كثيف. يتم التعرف على المستعمرات التي تنمو على وسائط صلبة من خلال الخصائص الثقافية الإنزيمية والمصلية.
11. الفحص الجرثومي للصفراء (محتويات الاثني عشر)
يتم جمع الصفراء في ثلاثة أنابيب اختبار معقمة أو حاويات معقمة يمكن التخلص منها بشكل منفصل في الأجزاء A و B و C وفقًا لـ MU 4.2.2039-05 وتسليمها إلى المختبر.
قم بإجراء دراسة لكل جزء (أ ، ب ، ج) على حدة أو تحضير خليط من ثلاثة أجزاء. يتم تلقيح العينات:
على وسائط التشخيص التفاضلية الكثيفة (ICA ، Endo ، EMS ، إلخ) بحجم 0.5 مل ؛
في أنبوب اختبار (زجاجة) مع مرق مغذي بنسبة 1:10. ليست هناك حاجة لتلقيح الصفراء على وسائط التخصيب ، مثل الصفراء نفسها هي أرض خصبة جيدة لمسببات أمراض التيفوئيد والنظيرة التيفية.
يتم تحضين الوسائط الملقحة بمخلفات الصفراء عند 37 درجة مئوية.
بعد 18-24 ساعة ، يتم فحص التطعيمات على وسائط مغذية كثيفة (تؤخذ نتائج النمو على ICA في الاعتبار بعد 24 و 48 ساعة) ويتم إعادة بذر المستعمرات المشبوهة على وسط متعدد الكربوهيدرات.
من مرق المغذيات ، تصنع البذار على وسط تشخيص تفاضلي كثيف.
من الصفراء المتبقية في حالة النتيجة السلبية للبذر المباشر ، يتم إجراء بذر متكرر على وسائط تشخيص تفاضلية كثيفة بعد 18-24 ساعة وفي الأيام 3 و 5 و 7 و 10.
يتم التعرف على الكائنات الحية الدقيقة المزروعة من خلال الخصائص الثقافية المورفولوجية والإنزيمية والمصلية.
12. الفحص البكتريولوجي لمادة الوردية
يتم إجراء الفحص البكتريولوجي ("التجريف" بالطفح الوردي) في وجود روزولا واضحة المعالم. يتم جمع المواد معقمًا معقمًا. للقيام بذلك ، تتم معالجة منطقة الجلد فوق الوردية بنسبة 70٪ من الكحول الإيثيلي ، ثم تُمسح بقطعة قطن مبللة بمحلول معقم من كلوريد الصوديوم بنسبة 0.9٪ وتُجفف بمسحة معقمة.
يتم الحصول على مادة للبحث (سائل الأنسجة) عن طريق خدش الجلد فوق الوردية بمشرط. يتم وضع قطرتين أو قطرتين من مرق الصفراء أو محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر على الجلد التالف ، ويخلط مع سائل الأنسجة البارز ويتم جمعه باستخدام ماصة باستير أو جهاز معقم مماثل يمكن التخلص منه في أنبوب اختبار مع أحد وسائط التخصيب السائلة (الصفراء) مرق ، وسط Rapoport ، وما إلى ذلك). في المختبر ، يتم الاحتفاظ بالتلقيح عند 37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة ، يليها التلقيح على وسائط تشخيص تفاضلية كثيفة (Endo ، EMS ، ICA).
13. الفحص البكتريولوجي لنخاع العظام
من المعروف أنه في حالة التأكيد المختبري لتشخيص حمى التيفوئيد ، يكون الفحص البكتريولوجي لنخاع العظم هو الأكثر فاعلية (تطعيم الممرض 90-95٪). حتى في المرضى الذين يعانون من أشكال خفيفة وممحاة من حمى التيفود ، والتي يصعب التعرف عليها سريريًا ، وكذلك على خلفية تناول الأدوية المضادة للميكروبات ، فإن تلقيح زراعة النخاع أعلى بكثير من مزارع الدم.
ومع ذلك ، من الناحية العملية ، نادرًا ما يتم إجراء الفحص البكتريولوجي لنخاع العظام ، فقط لمؤشرات سريرية خاصة ، في غياب البيانات المختبرية الأخرى التي تؤكد تشخيص حمى التيفود أو الحمى نظيرة التيفية ، tk. هذا الإجراء الغازي مؤلم للغاية. يتم أخذ عينات من المواد للبحث فقط في المستشفى بحضور أخصائي مناسب.
يتم الحصول على مواد للفحص البكتيري (نضح) بكمية 0.50-0.75 مل بطريقة معقمة عن طريق ثقب القص (المقبض أو الجسم) وتلقيحها في أنبوب اختبار بأحد وسائط الإثراء (مرق الصفراء ، وسط Rapoport ، إلخ).
إذا تعذر تلقيح الناشف في وسط التخصيب فور حدوث ثقب ، يتم جمعه في أنبوب معقم وإرساله على الفور إلى المختبر ، حيث يتم إجراء التلقيح في وسط التخصيب. في المختبر ، يتم تحضين التطعيمات عند 37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة ، يليها التلقيح على وسط تشخيص تفاضلي كثيف.
يتم إجراء مزيد من البحث ، كما هو الحال في الفحص البكتريولوجي للمواد البيولوجية الأخرى.
14. المواد الغذائية والكواشف
قائمة الوسائط المغذية لعزل وتحديد مسببات الأمراض المعدية ، ولا سيما البكتيريا المعوية ، واسعة النطاق وتتوسع باطراد. يتم تحديد اختيار البيئات المحددة إلى حد كبير من خلال الظروف الاقتصادية المحلية والتقاليد. ومع ذلك ، يجب أن تسترشد بالعديد من المبادئ الأساسية.
14.1. يجب أن يشير وصف وسط الاستزراع إلى أنه يمكن استخدامه ليس فقط للكشف عن السالمونيلا ، ولكن أيضًا السالمونيلا التيفية و S. Paratyphi A و B و C.
14.2. يجب تفضيل وسائط الاستزراع المجففة من الشركات المصنعة ذات السمعة الطيبة على الوسائط المعدة مباشرة في المختبر.
14.3. يجب التحكم في كل دفعة من وسط الاستزراع في المختبر بواسطة سلالات اختبار (مراقبة الجودة الداخلية).
14.4. للتشخيص المختبري لأمراض التيفوئيد والنظيرة التيفية والكشف عن ناقلات البكتيريا ، يجب استخدام وسائط المغذيات والكواشف المعتمدة للاستخدام في أراضي الاتحاد الروسي وفقًا للإجراءات المعمول بها.
15. طرق دراسة الخصائص الأنزيمية
حاليًا ، لدراسة النشاط الأنزيمي للكائنات الدقيقة من عائلة Enterobacteriaceae ، بما في ذلك مسببات الأمراض التيفية والتيفية ، تم تطوير وإنتاج وتسجيل أنظمة اختبار تشخيصية مختلفة للإنتاج المحلي والأجنبي (من أبسط وسائط Hiss الكلاسيكية في أنابيب الاختبار والألواح إلى تلقائي محللات). إذا كانت أنظمة الاختبار تجعل من الممكن التعرف على الكائنات الحية الدقيقة على مستوى الجنس وتحديد خصائص النشاط الأنزيمي للسلالات ، فيمكن استخدامها لتحديد مسببات الأمراض من حمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية. يتم تفصيل إجراءات العمل مع أنظمة الاختبار في تعليمات الاستخدام ويجب اتباعها بدقة.
16. الخصائص البيولوجية لمسببات الأمراض
العوامل المسببة لحمى التيفوئيد و paratyphoids A و B و C تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae ، جنس Salmonella ، الأنواع المعوية ، الأنواع الفرعية I (enterica) ولها خصائص مورفولوجية وثقافية وأنزيمية مميزة لهذه الأنواع الفرعية والأنواع والجنس والعائلة.
لقد طور ممثلو جنس السالمونيلا المعوية تاريخياً حالة لم يتم فيها تحديد السيروفارس بواسطة صيغة مستضدية ، كما هو الحال في البكتيريا الأخرى ، ولكن من خلال أسماء الأمراض (الإنسان أو الحيوان) ، أو البلد ، أو المدينة أو الشارع الذي تم عزلهم فيه ، من الخطأ اعتبار أسماء هذه الأنواع بسبب ليس لديهم وضع تصنيفي. ومع ذلك ، فإن أسماء السالمونيلا المصلية الأكثر شيوعًا مألوفة للغاية بحيث يكاد يكون من المستحيل استبدالها بصيغ مستضدية. لذلك ، في مخطط Kaufman-White الحديث ، عند تعيين السالمونيلا فقط الأنواع الفرعية المعوية I ، بدلاً من تسمية الأنواع ، يتم استخدام اسم المصلي ، ولكن يتم كتابته بحرف كبير.
وبالتالي ، فإن الأسماء الكاملة للعوامل المسببة لحمى التيفود والحمى نظيرة التيفية هي كما يلي:
السالمونيلا المعوية subsp. التيفي المصلي المعوي
Salmonella enterica subsp. المعوية المصلي Paratyphi A ؛
Salmonella enterica subsp. المعوية المصلي Paratyphi B ؛
Salmonella enterica subsp. المعوية المصلي Paratyphi C
في الممارسة الشائعة ، من الممكن استخدام نسخ مختصرة من الأسماء:
سر السالمونيلا. Typhi أو Salmonella Typhi أو S. Typhi ؛
سر السالمونيلا. Paratyphi A أو Salmonella Paratyphi A أو S. Paratyphi A ؛
سر السالمونيلا. Paratyphi B أو Salmonella Paratyphi B أو S. Paratyphi B ؛
سر السالمونيلا. Paratyphi C أو Salmonella Paratyphi C أو S. Paratyphi C
16.1. الخصائص الثقافية والصرفية
لا تشكل قضبان سالبة الجرام المتنقلة جراثيم وكبسولات ، وتنمو اللاهوائية الاختيارية جيدًا على وسائط المغذيات العادية.
على أجار المغذيات البسيط - المستعمرات محدبة قليلاً بحافة ناعمة وسطح أملس ، رطب مع لمعان يزيد عن 1 مم.
على وسائط التشخيص التفاضلي (التي تحتوي على اللاكتوز كمادة مميّزة) - شفافة ، عديمة اللون أو مزرقة ، وأحيانًا زهرية أو لون بيئة المستعمرة (Endo ، Ploskirev ، EMS ووسائط أخرى مماثلة).
على مستعمرات SS-arape متوسطة اللون مع مركز أسود.
على وسط البزموت-الكبريتيت ، تكون المستعمرات المعزولة من S. Typhi ، S. Paratyphi B سوداء مع لمعان معدني مميز ، والوسط تحت المستعمرة مصبوغ باللون الأسود. مستعمرات S. Paratyphi A مخضرة ، فاتحة في لون الوسط ، رقيقة.
يمكن أن تشكل سلالات S. Paratyphi B (العامل المسبب للمظاهرة B) على أجار ببتون اللحم جدارًا مخاطيًا مرتفعًا على طول محيط المستعمرات. يتطور العمود المخاطي لمدة 2-5 أيام عندما يتم تخزين المحاصيل في درجة حرارة الغرفة. هذه الأعراض ليست دائمة ولا تشخيصية.
16.2. الخصائص الأنزيمية
يتم إجراء دراسة الخصائص الأنزيمية فيما يتعلق بمجموعة من الكربوهيدرات والكحولات متعددة الهيدروكسيل والأحماض الأمينية والمركبات العضوية الأخرى المستخدمة في تحديد ودراسة السالمونيلا والبكتيريا المعوية الأخرى. كقاعدة عامة ، في المختبرات العملية ، يتم استخدام عدد صغير من الاختبارات لتحديد الأجناس الرئيسية التي تشكل جزءًا من عائلة البكتيريا المعوية. يتم عرض خصائص الخصائص الأنزيمية للسالمونيلا ، بما في ذلك العوامل المسببة لحمى التيفوئيد والمظلة A و B و C في الجدول 2.
الجدول 2
الخصائص الأنزيمية لمسببات الأمراض من حمى التيفوئيد و paratyphoids A ، B ، C
|
المادة المتفاعلة |
S. Paratyphi أ |
||||
|
الجلوكوز (الغاز) |
الطريقة البكتريولوجيةيشمل التنظير الجرثومي للمادة من المريض ، وعزل الثقافة النقية للممرض وتحديدها مع تحديد الحساسية للمضادات الحيوية وأدوية العلاج الكيميائي.
اختيار الموادللفحص الجرثومي يعتمد على المسببات المزعومة للمرض ، ومرحلة المرض ، مع الأخذ في الاعتبار التسبب في المرض ، والخصائص البيولوجية للممرض وعوامل أخرى.
1. للأمراض المعديةتحدث مع تجرثم الدم (حمى التيفوئيد ، الأشكال المعممة والتفسخية من السالمونيلا) ؛ مع تعفن الدم من أي مسببات ، ليس فقط بسبب البكتيريا المقيحة المقيحة ، Pseudomonas aeruginosa ، ولكن أيضًا عن طريق مسببات الأمراض النادرة (Serratia Salinaria ، البكتيريا غير المخمرة ، اللاهوائية ، L- شكل العقديات (طريقة Suknev) والكائنات الحية الدقيقة الأخرى) ، حالات للمحاصيل على وسائط مغذية خاصة. يجب التأكيد على أن نجاح تواتر وطيف مسببات الأمراض المعزولة من الدم والأسرار البيولوجية الأخرى للمريض تعتمد على سعة الاطلاع وفضول ومثابرة ومثابرة العاملين في المختبر البكتريولوجي.
2. السائل الدماغي النخاعي (التهاب السحايا القيحي ، التهاب السحايا السلي مع الزراعة المطولة (أكثر من شهر) على وسط غذائي خاص لعزل البكتيريا السلية.
3. البلغم (الالتهاب الرئوي الحاد والتهاب القصبات الهوائية ، السل ، السعال الديكي ، الطاعون ، الأشكال النادرة من حمى التيفوئيد (التيفوئيد) ، داء الفيلقيات ، الميكوبلازما التنفسية والكلاميديا).
4. المخاط والقيح من اللوزتين (التهاب اللوزتين العقدية والمكورات العنقودية).
5. اللويحات والمخاط من اللوزتين، من الحلق والأنف ، إفرازات من الملتحمة والأعضاء التناسلية (الدفتيريا).
6. كشط من الغشاء المخاطي للأنف (الجذام).
7. إفرازات من الأنف والبلعوم (الجيوب الأنفية ، الأوزينا ، التصلب الأنفي).
8. السائل المتورم ، وقطع من العضلات المصابة ، والأنسجة الميتة (الالتهابات اللاهوائية). إفرازات الجرح (التسمم الغذائي ؛ إذا لزم الأمر ، الكزاز).
9. تنقيط من الغدد الليمفاوية المتضخمة (السل ، داء المقوسات).
10 محتويات الجمرة والقطرات من العقد الليمفاوية المتقيحة (الطاعون ، التولاريميا ، تسمم الدم ، الجمرة الخبيثة).
الدراسات البكتريولوجيةفي حالة العدوى الخطيرة بشكل خاص (الطاعون ، التولاريميا ، الحمى المالطية ، الكوليرا (حيث يتم فحص البراز فقط (!)) يتم إجراؤها في مختبرات النظام الخاصة ، والتي تستبعد إمكانية إصابة موظفيها بالعدوى الذاتية عند العمل مع الثقافات البكتيرية و انتشار مسببات الأمراض خارج هذه المختبرات.
الدراسات المصلية. تم إدخالهم إلى العيادة في وقت لاحق إلى حد ما من الطريقة البكتريولوجية التي اقترحها R. Koch. في عام 1896 ، اكتشف ف. فيدال أنه بحلول نهاية الأسبوع الأول من المرض ، يكتسب مصل الدم للمرضى المصابين بحمى التيفود القدرة على تلويث عصيات التيفوئيد ، العامل المسبب لحمى التيفوئيد (رد فعل فيدال الإيجابي). في حالة المسببات متعددة الميكروبات للأمراض المعدية ، بعد اكتشاف فيدال ، بدأوا أيضًا في اللجوء إلى تحديد عيار راصات المصل لعدة أنواع من البكتيريا المعزولة من المواد المرضية (رد الفعل الذاتي) والتحكم في دينامياتها اعتمادًا على مرحلة المرض. يشهد أعلى عيار من الراصات في أحد أنواع البكتيريا المعزولة لصالح مشاركته المسببة الأكبر في تطور المرض.
بالفعل في البداية تطبيقات تفاعل فيدالفي العيادة ، لوحظ أن أشد أشكالها ، على سبيل المثال ، حمى التيفود ، يمكن أن تحدث في غياب الراصات في الدم (رد فعل فيدال السلبي) ، مما يشير إلى القيمة التشخيصية النسبية لهذه الطريقة في كل من حمى التيفود وفي الأمراض المعدية الأخرى. تم استبداله لاحقًا بطرق مصلية أكثر حساسية. لكن القيمة ذات الأولوية لاكتشاف فيدال ستبقى إلى الأبد.
حالياً للتشخيص المصليالعدوى البكتيرية ، يتم استخدام طرق أكثر حساسية عندما يتم امتصاص المستضد البكتيري على سطح كريات الدم الحمراء (تشخيص الكريات الحمراء 1). وهكذا ، تم تطوير اختبارات مصلية جديدة بشكل أساسي: التراص الدموي المباشر (TPHA) وغير المباشر (RIHA). تستخدم على نطاق واسع للتشخيص المصلي للعديد من الالتهابات البكتيرية والفيروسية وغيرها (حمى التيفوئيد ، السالمونيلا ، داء الشيغيلات ، الحمى المالطية ، التولاريميا ، إلخ). يحتفظ تفاعل هطول الأمطار بقيمته التشخيصية في بعض الأمراض (التسمم الغذائي والجمرة الخبيثة - تفاعل أسكولي لتشخيصه في الحيوانات). في التشخيص المصلي ، يتم حاليًا استخدام تفاعل التثبيت التكميلي (RCC) الذي اقترحه في عام 1901 الباحثان الفرنسيان بوردي وتشانغو (الزهري ، والسيلان ، وداء الحمى المالطية ، وداء المقوسات ، والسل ، والجذام ، والرعام) على نطاق واسع. يعتبر RSK من الأهمية بمكان للتشخيص المصلي للعدوى الفيروسية (الأنفلونزا ، والتهابات فيروسية تنفسية حادة أخرى ، والهربس ، والتهاب الدماغ ، والنكاف ، والببغائية ، وما إلى ذلك) ، بالإضافة إلى العديد من داء الريكتسيات.
الغرض من الدرس: يعرف مبادئ زراعة الكائنات الحية الدقيقة ، وسائط المغذيات ، تصنيفها ؛ طرق التعقيم والتطهير المستخدمة في علم الأحياء الدقيقة والطب ؛ مراحل الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية.
يكون قادرا على استخدام معدات زراعة البكتيريا (الهوائية واللاهوائية) ، واختيار الوسائل وطريقة التعقيم والتطهير وفقًا لمهام محددة ، وتنفيذ المرحلة الأولى من الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية (تلقيح مادة الاختبار على كثيفة وسائلة وسائط المغذيات من أجل عزل الثقافات النقية من الكائنات الحية الدقيقة الهوائية).
1. أسئلة للدراسة الذاتية:
1. تكوين ومتطلبات وسائط المغذيات
2. تصنيف وسائط المغذيات
3. مطهر ومعقم
4. التطهير وطرق التحكم في فاعلية التطهير
5. التعقيم وطرق ومعدات وطرق التعقيم
6. طرق تحديد فاعلية التعقيم
7. الأنواع ، السلالة ، المستعمرة ، الثقافة النقية للكائنات الحية الدقيقة
8. طرق عزل الثقافات النقية من الكائنات الحية الدقيقة
9. الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية. الغرض وتسلسل المرحلة الأولى من الطريقة البكتريولوجية لعزل الأيروبس
10. تقنية تلقيح الكائنات الحية الدقيقة على وسائط المغذيات السائلة والصلبة
11. ملامح زراعة الكائنات الحية الدقيقة اللاهوائية. الأجهزة والمعدات المستخدمة في زراعة البكتيريا اللاهوائية
2. أسئلة الأمان:
1) اكتب متطلبات وسائط المغذيات
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
2) اكتب تصنيف الوسائط الغذائية
أ) بالتناسق (مع الأمثلة ، حدد تركيز أجار أجار): ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
ب) وفقًا للغرض المقصود (حدد ، أعط أمثلة)
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
3) اكتب طرق التعقيم
أ) استخدام درجات حرارة عالية ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
ب) بدون استخدام درجات حرارة عالية ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4) ضع قائمة بمعدات التعقيم ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
5) اكتب في دفتر ملاحظات أ) طرق التحكم في نظام التعقيم
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
ب) طرق مراقبة عقم وسط المغذيات ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
ج) طرق التحكم في عقم الأدوات والضمادات ومواد الخياطة ، إلخ. ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
6) ضع قائمة بجميع طرق زراعة الأيروبس
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
7) ضع قائمة بجميع طرق زراعة اللاهوائية
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
8) دراسة مخطط طريقة التشخيص البكتريولوجي ، وتسمية مراحل الطريقة
اكتب الغرض من طريقة البحث البكتريولوجي ومخططها
الغرض من الطريقة البكتيرية
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
مخطط الطريقة البكتيرية
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
تعرف على وسائط المغذيات واملأ الجدول "وسائط المغذيات".
- إملأ الجدول "طرق التعقيم الأساسية".
| طريقة التعقيم | معدات | وضع التعقيم: درجة الحرارة ، الضغط ، فردي أو كسري (كم مرة) ، إلخ. | الموثوقية: التعقيم الكامل أو الكائنات الحية الدقيقة القابلة للحياة (الجراثيم والفيروسات) باقية | مواد قابلة للتعقيم |
| 1. الاشتعال | ||||
| 2. الغليان | ||||
| 3. التعقيم بالبخار بالبخار تحت الضغط | ||||
| 4. التعقيم بالبخار مع تدفق البخار | ||||
| 5. تعقيم الهواء (حرارة جافة) | ||||
| 6. البسترة | ||||
| 7. الإشعاع المؤين | ||||
| 8. تشعيع الأشعة فوق البنفسجية | ||||
| 9. التصفية | ||||
| 10. تعقيم الغاز | ||||
| 11. المحاليل الكيميائية |
نص أساسي
تكوين ومتطلبات وسائط المغذيات
تعد الوسائط الغذائية ضرورية للحصول على مزارع نقية من الكائنات الحية الدقيقة ، ودراسة خصائص مورفولوجيا وعلم وظائف الأعضاء ، وكذلك للحفاظ على الكائنات الحية الدقيقة في شكل مزارع نقية في المختبر وظروف الإنتاج.
يجب أن يفي وسط المغذيات بالمتطلبات التالية:
1. القيمة الغذائية (الامتلاء) - محتوى العوامل الضرورية لحياة الميكروبات - مصادر الكربون ، النيتروجين ، الكبريت ، مصادر الطاقة ، الأيونات غير العضوية الضرورية في شكل يسهل على الكائنات الدقيقة امتصاصه.
2. تماثل التوتر الناتج عن كلوريد الصوديوم بنسبة 0.85٪ (يجب أن يتوافق تركيز الأملاح في وسط المغذيات مع تركيزها في الخلية الميكروبية).
3. القيم المثلى لعدد من البارامترات البيوكيميائية: تركيز أيونات الهيدروجين (نطاق الأس الهيدروجيني 4.5-8.5 ، عادة 7.2-7.4) ، إمكانات الأكسدة والاختزال (Eh للكائنات اللاهوائية - منخفضة 0.0120-0.060 فولت ، للأيروبس - أعلى من 0.080 V) ، الضغط الاسموزي.
4. لديها رطوبة كافية (على الأقل 60٪ للوسائط الكثيفة) ، لأن الميكروبات تتغذى على قوانين الانتشار والتناضح.
5. لزوجة معينة (الأمثل لانتشار المواد).
6. الشفافية ، لتصور نمو البكتيريا.
7. العقم.
مكونات الإعلام الثقافي
البروتينات هي مصدر النيتروجين للكائنات الحية الدقيقة ، ولكن معظم الميكروبات غير قادرة على استيعاب البروتين الأصلي ، لذلك يتم استخدام منتجات انقسام البروتين الحمضي والإنزيمي: الببتون ، الكازين. المكونات الأولية لوسط المغذيات الاصطناعية هي ماء اللحم ، كما يضاف التحلل الحمضي والإنزيمي للكازين والببتون وكلوريد الصوديوم إلى القاعدة. تحتوي مياه اللحوم على المعادن والكربوهيدرات والفيتامينات. الكازين الغذائي هو نفايات صناعة الألبان ، ويحتوي على مجموعة كاملة من الأحماض الأمينية ويتميز بقيمة غذائية عالية. الببتون هو نتاج هضم البروتين غير الكامل الذي يتم الحصول عليه عن طريق التحلل المائي الأنزيمي أو الحمضي لمنتجات النفايات من إنتاج اللحوم أو منتجات الأسماك أو كازين الحليب. تحتوي على ألبومات وببتونات وببتيدات من الأحماض الأمينية بكميات صغيرة ، ويعتمد تكوينها على عمق انقسام البروتين. الببتون مسحوق أصفر فاتح ، قابل للذوبان في الماء ، لا يتخثر عند تسخينه. يتم استخدامه كمصدر للنيتروجين والكربون.
يتم تحضير وسائط المغذيات الكثيفة من السوائل مع إضافة مادة مانعة للتسرب. عادة ما يستخدم أجار أجار كمادة مانعة للتسرب. Agar-agar - منتج يتم الحصول عليه من الأعشاب البحرية ، عبارة عن مسحوق أو ألواح صفراء ، يحتوي على عديد السكاريد الجزيئي العالي ، ولا يتم تكسيره بواسطة معظم الكائنات الحية الدقيقة ، ولا يتم تدميره عن طريق التعقيم ، ولا يغير القيمة الغذائية للوسائط ، ولا يمنع نمو الميكروبات. إنه قادر على تكوين المواد الهلامية في الماء ، والذوبان عند 100 درجة مئوية والضغط عند 45 درجة مئوية وما دون ، ولا تستخدمه الكائنات الحية الدقيقة كركيزة مغذية. لا تؤثر عدة دورات من الذوبان والتصلب على قدرة الأجار على تكوين مادة هلامية ، لذلك يمكن تعقيم وسائط الأجار عدة مرات.
أيضًا ، تشتمل تركيبة الوسائط الغذائية على الدم والمصل والأملاح غير العضوية. تحتوي جميع وسائط المغذيات ، كقاعدة عامة ، على 0.5 ٪ من كلوريد الصوديوم ، وهو ما يتوافق مع الظروف التناضحية المتساوية للبيئة ، والتي تعتبر مثالية لحياة الميكروبات. تتمثل وظيفة العناصر المعدنية في استقلاب الميكروبات بشكل أساسي في تنشيط الإنزيمات المختلفة. بالإضافة إلى ذلك ، تشارك الأيونات غير العضوية (بشكل رئيسي Na + و K +) في نقل المواد عبر أغشية الخلايا ، في تنظيم تخليق البروتين.
عوامل التصالحية.تتم إضافة عوامل الاختزال إلى الوسائط المخصصة لزراعة الكائنات الحية الدقيقة اللاهوائية من أجل تقليل إمكانات الأكسدة والاختزال (Eh) وتحقيق التوازن بينها عند المستوى الأمثل. Eh هو مقياس لقدرة الحل على التبرع بالإلكترونات أو قبولها. عند زراعة اللاهوائية ، عادة ما تستخدم ثيوجليكولات الصوديوم (0.1٪) ، السيستين (0.1٪) ، حمض الأسكوربيك (0.1٪) كعوامل اختزال.
الكربوهيدرات والكحول متعدد الهيدروكسيل والمؤشرات. الكربوهيدرات هي أفضل مصدر للكربون لمعظم الكائنات الحية الدقيقة غير المتجانسة. إنها جزء من وسائط التشخيص التفاضلي المصممة لتحديد الخصائص الكيميائية الحيوية للميكروبات.
يتضمن تكوين الوسائط الغذائية ، بالإضافة إلى الكربوهيدرات والكحولات متعددة الهيدروكسيل ، العديد من العناصر المؤشرات، في الغالب حمض القاعدة. يشير التغيير في لون الوسط أثناء تلقيح الكائنات الحية الدقيقة إلى تكوين حمض أو قلوي أثناء النشاط الأنزيمي للكائنات الحية الدقيقة. كمؤشرات ، عادة ما يتم استخدام اللون الأحمر المحايد ، والأزرق البروموثيمول ، والأحمر الكونغولي ، ومزيج من حمض الروزوليك والأزرق المائي (BP) ، ومؤشر Andrede.
الأصباغ.تُستخدم قدرة الأصباغ على التغيير بسهولة وعكس من الشكل الملون إلى الشكل المصغر (عديم اللون) على نطاق واسع في الممارسة البكتريولوجية ، على وجه الخصوص ، للتمييز بين البكتيريا التي تتحلل اللاكتوز من سلبية اللاكتوز. نتيجة لهذه العملية ، تشكل البكتيريا موجبة اللاكتوز مستعمرات ملونة على الوسط ، في حين أن المستعمرات سلبية اللاكتوز تكون عديمة اللون. أكثر الأصباغ شيوعًا التي تشكل جزءًا من وسائط المغذيات هي الفوشسين الأساسي والأزرق الميثيلين ويوزين.
مثبطات.عند فحص وجود البكتيريا المسببة للأمراض ، من الضروري قمع نمو البكتيريا المصاحبة. لهذا الغرض ، يتم استخدام مثبطات مختلفة. كمثبطات للكائنات الدقيقة سالبة الجرام ، تشتمل تركيبة الوسائط على رباعي تراثيونات الصوديوم والبوتاسيوم ، تيلوريت البوتاسيوم ، أسيتات الثاليوم ، كبريتات الثاليوم ، سيلينيت الصوديوم. لمنع نمو الميكروبات موجبة الجرام ، يتم استخدام أصباغ الأنيلين: الأخضر اللامع ، والبنفسجي الكريستالي ، والبنفسجي الإيثيلي ، والأزرق الأنيلين. تعد الأملاح الصفراوية والصفراوية جزءًا من الوسائط الانتقائية لتنمية البكتيريا المعوية المسببة للأمراض. خليط من الأحماض الصفراوية التي تم الحصول عليها نتيجة التحلل القلوي للصفراء هو جزء من وسط بلوسكيرف. في الخارج ، كجزء من الوسائط الانتقائية ، يتم استخدام أملاح الأحماض الصفراوية الفردية ، وخاصة ديوكسيكولات الصوديوم.
وسائط المغذيات الجافة.يعد تحضير الوسائط الغذائية أحد أهم مجالات عمل المختبر البكتريولوجي. في هذا الصدد ، تنتج الصناعة الحيوية وسائط مغذيات جافة ومعلبة قياسية ، لأغراض مختلفة ، لزراعة الكائنات الحية الدقيقة. إنها مساحيق مبللة بنسبة رطوبة تصل إلى 10٪. قم بإعداد الوسائط وفقًا للتوجيهات الموضحة على الملصق. إن ثبات التركيب ، وتوحيد الوسط ، والبساطة والراحة في العمل ، وسهولة النقل والتخزين هي المزايا العظيمة لوسائط المغذيات الجافة. بعد تحديد الأس الهيدروجيني المناسب ، يتم غليان الوسيط ، وتصفيته ، وتوضيحه ، وصبه في قوارير ، وأنابيب اختبار ، وتعقيمه. يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه بعد التعقيم تصبح البيئة أكثر حمضية.
جوهر الطريقة البكتيرية: الكشف عن الميكروبات في مادة الاختبار ؛ دراسة خصائصها المورفولوجية والصغيرة ، وطبيعة الموقع في اللطاخة البكتريولوجية في مجال الرؤية.
تقنية التنفيذ. تتم دراسة المادة من المريض بصريًا ، ويتم اختيار جزء يمكن من خلاله اكتشاف العامل المسبب للمرض (كتل المخاط ، سدادات قيحية) بأكبر درجة من الاحتمال. يتم تطبيقه على شريحة زجاجية (في بعض الأحيان يتم استحلاب المادة مسبقًا في محلول ملحي ، وغالبًا ما يتم طردها بالطرد المركزي). يتم توزيع القطرة على الزجاج وتجفيفها وتثبيتها. بعد ذلك ، يتم تلطيخ اللطاخة ويتم فحص المستحضر تحت المجهر. عادة ما تكون اللطاخة ملطخة بالجرام. في بعض الأحيان ، يتم استخدام إحدى طرق التلوين البسيطة الأكثر لطفًا ، ثم يتم طلاء المستحضر بصبغة واحدة (على سبيل المثال ، في تشخيص عدوى المكورات السحائية ، الكوليرا).
يتم استخدام طرق تلطيخ معقدة خاصة عند الضرورة ، مثل طريقة Burri-Gins لاكتشاف الكائنات المحفظة أو طريقة Ziehl-Neelsen للكشف عن البكتيريا المقاومة للحموضة. في بعض الحالات (على وجه الخصوص ، عند دراسة النشاط الحركي للكائنات الدقيقة) ، يتم تحضير محضرات "القطرة المعلقة" و "القطرة المسحوقة" ويتم فحص البكتيريا غير الملوثة بالميكروسكوب.
مزايا الطريقة البكتيرية:سهولة التنفيذ ، والقدرة على الحصول بسرعة على النتائج ، وإمكانية الوصول التقني والاقتصادي.
عيوب الطريقة:لتحديد نوع الكائنات الحية الدقيقة ، غالبًا ما يكون غير كافٍ لتحديد خصائصها المورفولوجية ، لأنها متطابقة في ممثلي الأنواع ذات الصلة. بالإضافة إلى ذلك ، غالبًا ما تخضع البكتيريا ذات التشكل المميز لتغييرات ، خاصةً تحت تأثير المضادات الحيوية ، وتصبح غير معروفة ؛ أخيرًا ، يمكن أن يكون تركيز مسببات الأمراض في مادة الاختبار منخفضًا للغاية ، ومن ثم يصعب اكتشافها.
في ضوء ما سبق ، نادرًا ما يتم استخدام الطريقة البكتيرية باعتبارها الطريقة الوحيدة والأخيرة لتحديد مسببات المرض. في كثير من الأحيان يتم استخدامه كدليل أولي ، وفي تشخيص بعض الأمراض المعدية ، لا يتم توفيره على الإطلاق.
كيف نفهم التوجيه والأولى؟ هذا ينطبق على الطبيب وعلم الجراثيم. يستخدم الطبيب ، الذي يتلقى إجابة أولية (إيجابية أو سلبية) ، إلى حد أكبر أو أقل ، المعلومات الواردة في دراساته الإضافية حتى يتم الحصول على النتيجة النهائية لطريقة التشخيص البكتريولوجي. بعد أن تلقى عالم الجراثيم معلومات إرشادية حول العامل الممرض المشتبه به ، وتركيزه في المادة المستخدمة ، ووجود النباتات الدقيقة المصاحبة ، يحدد طرق معالجة المادة وعزل الثقافة النقية للممرض ، ويختار وسائط المغذيات للزراعة اللاحقة.
الطريقة البكتريولوجية
جوهر هذه الطريقة هو عزل الثقافة النقية للميكروب - الممرض عن المواد المرضية ، ودراسة مفصلة لخصائصه المورفولوجية والتنكيرية والثقافية والكيميائية الحيوية والمصلية بهدف التحديد اللاحق للعامل الممرض. عند تنفيذ طريقة البحث البكتريولوجية ، يتم تمييز 4 مراحل.
أ. مع الأخذ في الاعتبار البيانات التي تم الحصول عليها أثناء الفحص البكتيري ، يتم اختيار وسائط المغذيات الأكثر فعالية ، والتي من خلالها ، بأكبر درجة من الاحتمال ، سيكون من الممكن الحصول على نمو ثقافة الميكروبات المزعومة - مسببات الأمراض.
ب. تُزرع مادة الاختبار على عدد من وسائط المغذيات: سائلة وصلبة ، عامة ، اختيارية انتقائية ، تشخيصية تفاضلية. في الوقت نفسه ، يتم إجراء الزراعة على أطباق بتري ذات الوسائط المغذية الكثيفة بحلقة بكتريولوجية بضربة من أجل ضمان إمكانية الحصول على نمو مستعمرات ميكروبية معزولة عن بعضها البعض (يمكنك أيضًا استخدام طريقة Drygalsky أو غيرها طريقة فصل مزارع الكائنات الحية الدقيقة).
أ. تمت دراسة الخصائص الثقافية للكائنات الدقيقة التي تنمو على وسط المغذيات ؛ يتم اختيار المستعمرات المشبوهة. يجب التأكيد على أن اختيار المستعمرات المشبوهة هو أهم وأصعب مرحلة من مراحل العمل. يعتمد بشكل أساسي على تحديد السمات المميزة للمستعمرات الميكروبية ، ولكن في كثير من الأحيان لا يسمح هذا بالتمييز بين المستعمرات الميكروبية للأنواع الفردية ومن الضروري أيضًا دراسة مورفولوجيا الميكروبات في المسحات من المستعمرات المشبوهة ، وخصائص نمو الكائنات الحية الدقيقة على وسائط التشخيص التفاضلي ، إلخ. يمكن إجراء عزل الثقافات النقية للبكتيريا ودراستها عن طريق إجراء تلقيح أولي على وسط تراكم السائل ، ولكن يتم قضاء وقت بحث إضافي في هذه الحالة.
ب- يتم تحضير مسحة بكتريولوجية من المستعمرات المشبوهة ، ملطخة حسب الجرام والميكروسكوب (يتم تحديد هوية الكائنات الدقيقة مع تلك التي تمت دراستها أثناء الفحص المجهري في المرحلة الأولى). C. من بقية المستعمرة المشبوهة ، يتم نقل المزرعة إلى أجار ببتون اللحم المشطوف (يمكن استخدام وسائط مغذية أخرى ، حيث يتوقع نمو الكائنات الحية الدقيقة المعزولة بشكل جيد). الهدف هو تراكم ثقافة نقية للميكروب - العامل المسبب للمرض المزعوم ، لأن. في المرحلة التالية من الدراسة ، ستكون هناك حاجة إلى الكثير من الكتلة الميكروبية.
تمت دراسة العامل الممرض المقترح لخصائص الحالة للسكريات (يتم إجراء التلقيح على وسائط متنوعة ، Olkenitsky ، وسائط Ressel ، إلخ) ، النشاط التحلل للبروتين (التلقيح على الجيلاتين ، الحليب وفقًا لـ Tukaev ، تحديد تكوين الإندول وكبريتيد الهيدروجين أثناء النمو على مرق اللحم الببتون). تمت دراسة حساسية الثقافات المعزولة للمضادات الحيوية (في كثير من الأحيان بطريقة الأقراص الورقية القياسية ، وفي كثير من الأحيان بطريقة التخفيف المتسلسل). يتم إجراء التنميط المصلي في تفاعل التراص على الزجاج بمصل تشخيصي جماعي ونموذجي ؛ كتابة العاثيات مع العاثيات التشخيصية القياسية. في بعض الحالات ، يتم دراسة عوامل الإمراضية في البكتيريا لتحديدها.
تؤخذ نتائج البحث الذي تم إجراؤه في الاعتبار. بناءً على مقارنة الخصائص التي تم تحديدها في الكائنات الحية الدقيقة (المورفولوجية ، والتفاعلية ، والثقافية ، والكيميائية الحيوية ، والمصلية ، وما إلى ذلك) ، يتم تحديد الميكروبات. يتم إصدار إجابة نهائية بنتائج الدراسة البكتريولوجية ، والتي تشير إلى نوع العامل الممرض (أحيانًا نمطه المصلي ، والحيوي ، ونوع العاثية) وحساسيته للمضادات الحيوية.
في كثير من الأحيان ، من أجل الحصول على نتائج موثوقة ، فإن إصدار الاستجابة يسبقه طرق بحث بيولوجية أو حساسية أو غيرها.
مزايا طريقة التشخيص البكتريولوجي:موثوقية عالية لنتائج البحث ؛ إمكانية الحصول على بيانات إضافية عن حساسية مسببات الأمراض المعزولة للمضادات الحيوية ؛ إمكانية إجراء دراسات وبائية.
من مساوئ الطريقةيمكن أن تشمل مدة الدراسة (4-5 أيام على الأقل) ، وكذلك استحالة استخدامها في الحالات التي لا تنمو فيها عدوى مسببات الأمراض (على سبيل المثال ، الريكتسيا ، الكلاميديا) على وسائط المغذيات الاصطناعية.
الطريقة البيولوجية
في بعض الحالات ، لتحسين تشخيص الأمراض المعدية ، يتم استخدام طريقة بيولوجية (اختبار حيوي) ، والتي تتضمن إصابة حيوانات المختبر بالعدوى. في هذه الحالة ، قد يكون للباحث أهداف مختلفة:
استنساخ الصورة السريرية والتشريحية المرضية للمرض (على سبيل المثال ، في تشخيص التيتانوس وداء البريميات) ؛
العزلة في وقت قصير من ثقافة نقية للممرض (في تشخيص عدوى المكورات الرئوية) ؛
تحديد الفوعة والقدرة المرضية للممرض (في تشخيص مرض السل) ؛
تحديد نوع ونوع السموم (في تشخيص التسمم الغذائي)
تستخدم الحيوانات المختلفة لتشخيص الأمراض المعدية. يتم تحديد اختيارهم من خلال حساسية الأنواع لمختلف العوامل المسببة. على سبيل المثال ، الفئران عرضة للإصابة بعدوى المكورات الرئوية والجمرة الخبيثة والتيتانوس. خنازير غينيا - لمسببات أمراض السل ، الحمى المالطية ، التولاريميا ؛ الأرانب - للمكورات العنقودية ، العقديات ، التسمم الغذائي. تم اختيار الحيوانات السليمة فقط من عمر ووزن معين للدراسة.
قبل إدخال المادة ، يتم إصلاح الحيوانات. يتم الاحتفاظ بالحيوانات الصغيرة من قبل المجرب ؛ بالنسبة للحيوانات الكبيرة ، يتم استخدام أجهزة خاصة. يتم معالجة موقع حقن المادة المصابة بالكحول أو اليود. يتم إعطاء المادة المصابة تحت الجلد ، أو الجلد ، أو الوريد ، أو داخل الصفاق ، أو داخل المخ ، وما إلى ذلك ، اعتمادًا على خصائص التسبب في المرض قيد الدراسة.
في طريقة الجلدتقوم العدوى بقطع الصوف مسبقًا ، وخدش الجلد ، ثم فرك المادة فيه.
طريقة تحت الجلد:يتم التقاط جلد الحيوانات في ثنية ، ويفضل أن يكون ذلك باستخدام ملاقط ، ويتم إدخال الإبرة في منتصف الطريق ، وبعد الحقن ، يتم وضع مسحة قطنية بالكحول وإزالة الإبرة.
الطريقة العضلية:يتم حقن المادة في النسيج العضلي للجزء العلوي من الطرف الخلفي.
طريقة داخل الصفاق:يتم الاحتفاظ بالحيوان رأسًا على عقب حتى لا تؤذي الأمعاء. يتم الحقن في أسفل البطن ، على جانب خط الوسط. يتم ثقب جدار البطن بحركة متشنجة ، وتكون المحقنة بزاوية قائمة.
طريقة الحقن الوريدي:يتم حقن الفئران والجرذان بالمواد - في وريد الذيل أو داخل القلب. يتم حقن الأرنب - في أوردة الأذن ، التي توجد بشكل سطحي ومرئية بوضوح (من الأفضل ثقب الوريد الخارجي). يتم تثبيت موضع الحقن بعد الحقن بقطن قطني بالكحول حتى لا يحدث نزيف. يتم حقن خنازير غينيا المصابة بعدوى داخل القلب بإبرة في ذروة "صدمة" القلب في الفراغ الوربي. إذا تم إدخال الإبرة بشكل صحيح ، سيظهر الدم في المحقنة.
تحضير الأدوات والمواد: يتم تعقيم المحاقن والمشارط والإبر بالغليان. تُسحب المادة إلى المحقنة (أكثر قليلاً من اللازم للدخول) ، وتدور عموديًا لأعلى ، وتغطي الإبرة بقطعة قطن معقمة وتدفع فقاعات الهواء خارج المحقنة بمكبس. يتم إجراء هذا التلاعب باستخدام محلول مطهر.
عند تشخيص الالتهابات الناجمة عن عمل مادة سامة (البوتولينوم ، الجمرة الخبيثة) ، يتم وضع المادة ، التي يُفترض أنها تحتوي على العوامل الممرضة والسموم ، في محلول ملحي ، ثم يتم ترشيحها من خلال مرشح ورقي يفرك بالتلك (يمتص السم جيدًا). تصاب الحيوانات الحساسة بمسحات الترشيح. في بعض الحالات ، عندما يكون التسبب في المرض ناتجًا عن الخصائص المسببة للأمراض للعامل الممرض نفسه ، تصاب الحيوانات بتعليق جرثومي.
يتم تمييز الفئران البيضاء المصابة ووضعها في عبوات زجاجية خاصة ؛ يتم لصقها بعلامة تشير إلى تاريخ الإصابة ونوع الكائن الدقيق الذي تم تنفيذ العمل به. بنفس الطريقة ، يتم توقيع أقفاص بها أرانب مصابة أو خنازير غينيا. يتم مراقبة الحيوانات. في حالة الوفاة ، يتم فتحها على الفور.
قبل تشريح الفئران البيضاء ، يتم قتل الحيوانات مبدئيًا بأبخرة الأثير. يتم غمر الفئران لفترة وجيزة في محلول مطهر ثم يتم تثبيتها في كفيت مع رفع البطن من الكفوف. لوحظ وجود أو عدم وجود تغييرات مرضية خارجية. يتم إجراء شق الجلد طوليًا من العانة إلى الفك السفلي وعرضيًا نحو الأطراف. يلاحظ التغيرات في أنسجة الجلد وحالة الغدد الليمفاوية. من هذا الأخير جعل بصمات مسحات. لفحص تجويف الصدر ، يتم إزالة القص عن طريق قطع الأضلاع على كلا الجانبين بالمقص. بعد الفحص الخارجي ، يتم قطع أجزاء من القلب ووضعها في غرفة تبادل معلومات السلامة الأحيائية. يتم البذر مباشرة على مسحات MPA من القلب والرئتين.
يتم فتح تجويف البطن ، أثناء الفحص الخارجي ، يتم ملاحظة حالة الأعضاء الداخلية (الحجم واللون والاتساق ووجود بؤر قيحية). عمل محاصيل الكبد والطحال ومسحات البصمات.
يتم تنفيذ العمل بأدوات معقمة ، بعد كل أخذ للعضو ، يتم إنزال الملاقط والمقص في كوب من الكحول وحرقه.
بعد تشريح الجثة ، تم صب المطهر على الجثة والحوض حيث تم إجراء التشريح لمدة يوم.
يتم تحضين المحاصيل لمدة 24 ساعة (أو أكثر إذا لزم الأمر) في
t 37 حول C. ثم يتم فحصهم ، وعزل مزرعة نقية لمسببات الأمراض ويتم التعرف عليها باستخدام الطريقة البكتريولوجية.
مزايا الطريقة: موثوقية النتائج التي تم الحصول عليها ، لا حاجة لمعدات معقدة.
عيوب: التكلفة العالية والاستخدام المحدود وخطر الإصابة.
معلومات مماثلة.