ELISA هو اختبار معملي حديث يبحث عن أجسام مضادة محددة في الدم (أو مستضدات) لأمراض معينة من أجل تحديد ليس فقط المسببات، ولكن أيضًا مرحلة المرض.
- البحث عن أجسام مضادة محددة لأي مرض معدي؛
- البحث عن مستضدات أي أمراض معدية.
- دراسة الحالة الهرمونية للمريض.
- فحص وجود أمراض المناعة الذاتية.
مثل أي طريقة للتشخيص المختبري، فإن ELISA لها مزاياها وعيوبها. تشمل مزايا الطريقة ما يلي:
- خصوصية وحساسية عالية للطريقة (أكثر من 90٪)؛
- القدرة على تحديد المرض وتتبع ديناميكيات العملية، أي مقارنة عدد الأجسام المضادة في فترات زمنية مختلفة؛
- إمكانية الوصول وسرعة هذا البحث؛
- طريقة غير جراحية لجمع المواد، وليس البحث؛
عيب هذه الطريقة هو أنه أثناء التحليل من الممكن تحديد ليس العامل المسبب للمرض نفسه، ولكن فقط الاستجابة المناعية له (الأجسام المضادة).
جوهر طريقة ELISA
هناك عدة أنواع من ELISA: طريقة مباشرة، غير مباشرة، طريقة الحجب، تنافسية. ومع ذلك، في الممارسة العملية، يتم استخدام مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم غير المتجانس، أو ELISA، في أغلب الأحيان.
أساس المقايسة المناعية الإنزيمية هو التفاعل المناعي للمستضد والجسم المضاد مع تكوين مركب مناعي، مما يؤدي إلى تغيير في النشاط الأنزيمي لعلامات محددة على سطح الأجسام المضادة.
بشكل أساسي، يمكن تقسيم هذه العملية إلى عدة مراحل:
- يوجد على سطح آبار قرص نظام الاختبار مستضد منقى لمسبب مرض محدد. عند إضافة مصل الدم الحيواني، يحدث تفاعل محدد بين هذا المستضد والجسم المضاد المطلوب؛
- بعد ذلك، تتم إضافة كروموجين خاص (مترافق مع البيروكسيديز) إلى البئر. ويحدث تفاعل إنزيمي يؤدي إلى تكوين مادة ملونة في بئر الصفيحة. وتعتمد شدة لونه على كمية الغلوبولين المناعي (الأجسام المضادة) الموجودة في مصل الحيوان؛
- ثم يتم تقييم النتيجة. وباستخدام مقياس الطيف الضوئي متعدد القنوات، تتم مقارنة الكثافة البصرية لمادة الاختبار مع الكثافة البصرية لعينات التحكم وتتم معالجة النتائج رياضيًا. تعتمد كمية الأجسام المضادة لدى المريض بشكل مباشر على ارتفاع الكثافة البصرية لبئر معين.
يجب أن نتذكر: لكل نظام اختبار، يتم تطوير مؤشرات فردية لتسجيل النتائج، ومؤشرات الحالة الطبيعية وعلم الأمراض ("القيم المرجعية"). ويجب أن يؤخذ ذلك في الاعتبار عند تقييم نتائج كل دراسة محددة.
من غير الصحيح تفسير نتائج أحد المختبرات بناءً على "القيم المرجعية" لمختبر آخر. ومن غير الصحيح أيضًا مقارنة نتائج المختبرات المختلفة مع بعضها البعض.
عند تقييم النتائج لعدوى معينة، فإن فئة الأجسام المضادة المكتشفة وكميتها مهمة. لا تعتمد على ذلك مسألة مسببات العدوى فحسب، بل تعتمد أيضًا على المرحلة المتوقعة من المرض (الحادة والمزمنة)، وكذلك وجود عدوى نشطة (حادة أو تفاقم مزمن) في وقت الفحص.
ما هو الإطار الزمني التقريبي لظهور الأجسام المضادة؟
أقرب الأجسام المضادة هي IgM. يمكن اكتشافها بعد 1-3 أسابيع من الإصابة المحتملة، والتي تميز المرحلة الحادة من العملية المعدية. الوضع الثاني لظهور الأجسام المضادة IgM هو تفاقم العملية المزمنة. يدور IgM في المتوسط لمدة 3 أشهر تقريبًا، ثم تختفي كميته تدريجيًا. ومع ذلك، في بعض المرضى، يمكن اكتشاف كميات ضئيلة من IgM خلال 1-2 سنة بعد الإصابة.
من الأسبوع الرابع بعد الإصابة، تبدأ الأجسام المضادة IgG في الظهور. في معظم حالات العدوى، يزداد عيارها تدريجيًا بحد أقصى في أوقات مختلفة (في المتوسط بعد 1.5-2 شهرًا)، ثم يظل العيار عند مستوى منخفض ويشير إلى المناعة. في بعض الأمراض، مستويات IgG ليست عالية.
خيارات الكشف عن الأجسام المضادة
- يشير الكشف المعزول عن الأجسام المضادة IgM إلى وجود عدوى أولية.
- يعد الكشف المتزامن عن IgM و IgG في الدم أمرًا نموذجيًا للعدوى الأولية في الأشهر 2-3 السابقة، وكذلك أثناء تفاقم المرض المزمن.
- قد يشير اكتشاف IgG المعزول إلى المناعة ضد المرض والعدوى المزمنة. في الحالة الثانية، تعتبر كمية الأجسام المضادة (العيار) والتغير في هذا العيار مع مرور الوقت أمرًا مهمًا. عادة، يتم إجراء الدراسات على فترات 2-4-6 أسابيع.
تحليل ELISA (مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم) هو إجراء تشخيصي حديث يهدف إلى تحديد أجسام مضادة محددة في الدم لمسببات الأمراض لعدد من الأمراض، وتحديد مرحلة تطور علم الأمراض ومسبباته. يتم استخدامه كوسيلة لمراقبة عملية العلاج وفعاليتها. خلال عملية البحث، يتم تحليل المؤشرات النوعية والكمية.
تعتبر طريقة ELISA غنية بالمعلومات، حيث تصل دقة النتائج إلى أكثر من 96%. التشخيص متاح في أي مختبر ومؤسسة طبية تقريبًا.
المؤشرات الرئيسية
يوصف اختبار مناعي إنزيمي للتأكد من وجود الأمراض المعدية التي تنتقل عن طريق الاتصال الجنسي:
- داء المشعرات.
- الكلاميديا.
- داء اليوريا.
- مرض الزهري ، إلخ.
يستخدم ELISA أيضًا لتشخيص الأمراض الفيروسية:
- الهربس.
- الهربس من النوع 4 (فيروس ابشتاين بار)؛
- التهاب الكبد الفيروسي؛
- عدوى الفيروس المضخم للخلايا.
كيفية الاستعداد للبحث
المادة البيولوجية للبحث هي الدم. قبل أيام قليلة من الاختبار، يجب ألا تتناول الأدوية. يتم إيقاف المضادات الحيوية ومضادات الديدان ومضادات الفيروسات خلال 14 يومًا.
يتم جمع المادة في الصباح على معدة فارغة. قبل ساعة من الإجراء، يسمح لك بشرب كوب من الماء الثابت، ويتم استبعاد تناول الطعام.
مميزات التحليل
لإجراء الدراسة، يتم أخذ الدم الوريدي بحجم لا يقل عن 5 مل. في بعض الحالات، يتم استخدام السائل النخاعي أو السائل الأمنيوسي أو محتويات الجسم الزجاجي كمادة حيوية.
يتم أخذ عينات الدم باستخدام إبرة الحقن بشكل صارم على معدة فارغة لتجنب النتائج الإيجابية الكاذبة. يجب عليك التوقف عن التدخين وشرب المشروبات الكحولية قبل 12 ساعة. عند استخدام المواد المخدرة تكون نتائج التحليل مشوهة.
إذا كان الاستنتاج يشير إلى قيم سلبية للجلوبيولين المناعي G، A، M، فهذا يشير إلى المرحلة الأولية لتطور العملية المرضية أو غيابها. يتم تسجيل هذه النتيجة عند الشفاء التام بعد العلاج.
تشير نتيجة IgM وIgA السلبية ونتيجة IgG الإيجابية إلى تكوين المناعة بعد الإصابة بمرض معدٍ أو التطعيم.
تشير نتيجة IgM الإيجابية ونتيجة IgG السلبية أو الإيجابية إلى وجود أمراض معدية حادة.
يتم إجراء تحليل ELISA بسرعة كبيرة، وتكون النتائج جاهزة خلال يوم واحد بعد جمع المادة.
في التشخيص المختبري الحديث للأمراض المعدية، وجدت طريقة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)، المستندة إلى الكشف عن أجسام مضادة محددة مميزة لمسببات الأمراض، استخدامًا واسع النطاق.
ما هو جوهر الطريقة؟
لفهم ذلك، عليك أن تعرف كيف يعمل جهاز المناعة البشري، وما هي المستضدات والأجسام المضادة، وما هي الوظائف التي تؤديها.
- المستضد الموجود في جسمنا هو جزيء يرتبط على وجه التحديد بجسم مضاد. يحمل معلومات معينة عن الخلية.
- عندما يدخل مستضد غريب إلى الدم، يبدأ إنتاج الأجسام المضادة (الجلوبيولين المناعي Ig)، التي تتعرف عليه وتسعى إلى تدميره.
- يُطلق على هذا التفاعل اسم المجمع المناعي، والذي تعتمد عليه طريقة تشخيص ELISA.
- يتيح لك التحليل تحديد مستوى الهرمونات والجلوبيولين المناعي والمجمعات المناعية وغيرها من المواد النشطة بيولوجيا، لذلك من المهم للتشخيصات المعقدة.
لمن يتم التشخيص؟
يجوز للأخصائي أن يطلب إجراء دراسة من أجل:
بالمقارنة مع طرق البحث الأخرى، ELISA لديها عدد من المزايا:
اطرح سؤالك على طبيب التشخيص المختبري السريري
آنا بونيايفا. تخرجت من أكاديمية نيجني نوفغورود الطبية (2007-2014) والإقامة في التشخيص المختبري السريري (2014-2016).
تشمل العيوب ما يلي: احتمال عدم دقة فك التشفير. في بعض الأحيان يظهر التحليل نتيجة سلبية أو إيجابية كاذبة، خاصة إذا كان التحضير غير صحيح أو تم مخالفة التقنية.
كيف يتم ذلك؟
الإجراء لا يختلف عن أخذ المواد.
- بعد وصف الاختبار، يتم إرسال المريض إلى المختبر لجمع الدم الوريدي. يتم تنفيذ الإجراء في الصباح على معدة فارغة.
- يتم إرسال المادة إلى المختبر، حيث يتم الحصول على مصل يحتوي على أجسام مضادة من الدم.
- يتم وضع المصل في أنابيب الاختبار مع مجموعات المستضدات. في الممارسة العملية، يتم استخدام العديد من هذه المجموعات. يمكن أن تكون هذه مسببات حساسية مختلفة (حبوب اللقاح والصوف والحمضيات والحليب وغيرها)، ومسببات الأمراض المعدية والفيروسية وغيرها.
- بعد الحصول على التفاعل، يتم تصريف مصل اللبن المتبقي. يتم تحديد كمية الأجسام المضادة باستخدام مؤشرات خاصة.
وقت إنتاج التحليل
يعتمد الوقت المستغرق على المختبر المحدد. توفر بعض المختبرات النتائج خلال 1-2 أياموالبعض الآخر في غضون أسبوع واحد. قد يحدث تأخير بسبب تراكم كمية معينة من المصل.
التحضير للدراسة
قبل إجراء الاختبار، يجب عليك اتباع قواعد التحضير البسيطة:
- تجنب تناول أي أدوية عشية الاختبار. إذا لم يكن ذلك ممكنا، تأكد من إخطار الطبيب الذي يصف التشخيص. ويولى اهتمام خاص لأدوية الحساسية. إذا كان المريض يتناول مضادات الهيستامين، فيجب عليك استشارة طبيبك قبل كم من الوقت يجب عليك التوقف عن تناولها قبل بدء الدراسة. وهذا ينطبق أيضًا على بعض أدوية الغدة الدرقية. وبخلاف ذلك، قد يتم تحديد تركيز TSH بشكل غير صحيح وسيتم الحصول على نتيجة طبيعية ومرضية بشكل غير صحيح. كقاعدة عامة ، مضاد للجراثيم ، مضاد للفيروسات ، يجب إيقاف مضادات الهيستامين قبل 10 إلى 16 يومًا من التشخيص.
- يتم سحب الدم بدقة على معدة فارغة. يجب أن تكون الوجبة الأخيرة عادة قبل 8-12 ساعة من الرحلة إلى المختبر.
- يجب عدم شرب المشروبات الكحولية أو التدخين، وإلا سيؤثر ذلك على النتائج الطبيعية.
- وينبغي استبعاد أي عوامل الإجهاد أو النشاط البدني. تأكد من الحصول على ليلة نوم جيدة.
كل ما تحتاج لمعرفته حول التحليل باستخدام مثال أحد المختبرات
ما الذي يمكن أن يؤثر على النتائج؟
تحليل ELISA هو طريقة بحث دقيقة إلى حد ما. تحدث الأخطاء في الحالات التالية:
- انتهاك إجراءات أخذ المواد؛
- بسبب النقل والتخزين غير السليم للمواد؛
- أثناء تناول بعض الأدوية (أدوية الغدة الدرقية، على سبيل المثال، والتي يمكن أن تؤثر على تركيزات هرمون TSH)؛
- في وجود أمراض خفية (بما في ذلك الأمراض المنقولة جنسيا، الكلاميديا، على سبيل المثال)، واضطرابات التمثيل الغذائي، ونقص المناعة.
- خلال فترة حديثي الولادة، عندما تكون الأجسام المضادة للأمهات موجودة بشكل طبيعي في الجسم.
الشرح والمعاني (المعايير والأمراض)
عندما يصبح التحليل جاهزا، يتلقى المريض نموذجا يشير إلى النتائج السلبية (-) والإيجابية (+) لتحديد كل فئة من الجلوبيولينات المناعية. التفسير يمكن أن يكون مثل هذا:
- تتم الإشارة إلى تعافي المريض نتيجة IgM سلبية، دون تحديد IgA، IgG.
- الأمراض المعدية المزمنة تعني فك تشفير: (-) IgM و IgG السلبي، الإيجابي، IgA.
- تتم الإشارة إلى عدم وجود رد فعل وقائي للعدوى من خلال (-) قيم IgM، IgG، IgA.
- يتم الكشف عن العدوى الحادة عن طريق الأجسام المضادة IgG و IgA (+) IgM السلبية أو الإيجابية.
- مناعة ما بعد العدوى مع (-) IgM وIgA وIgG الإيجابي.
- تفاقم مرض مزمن - (+) مؤشرات IgM، IgG، IgA.
عرض مرئي لتحليل ELISA
أين تفعل ذلك؟
يعتبر فحص الدم باستخدام طريقة Ifa وسيلة تشخيصية شائعة ويتم تقديمه في العديد من المختبرات والعيادات في المدينة.
في موسكو، يمكن إجراء تحليل ELISA:
- في مختبر نيرميديك،
- في المختبر،
- العيادة الملكية،
- دلتاكلينيك،
- أقل البلدان نمواً كوتوزوفسكي،
- ميدسنترسيرفيس,
- شبكات أونكلينيك،
- الطبيب المعجزة,
- طبيب العائلة
- ك+31،
- أوه الطب وغيره.
في سانت بطرسبرغ، يتم إجراء تحليل ELISA
- في ماديس،
- العيادة الطبية الأمريكية،
- عيادة الدكتور فيلاتوف،
- ميديم،
- عيادة دكتور بيهل،
- ليكا فارم,
- منحدر,
- اكسبريس وغيرها.
فيلم تعليمي مفيد جداً عن تحليل الاليزا
تكلفة الدراسة
يعتمد ذلك على عدد العلامات المطلوبة. كلما زاد عدد العلامات، ارتفع السعر.
سعر تحديد الأجسام المضادة ل
- يتراوح مستوى Igm/IgG للفيروس المضخم للخلايا بين 350-700 روبل،
- للميكوبلازما 340-520 روبل ،
- للمبيضات 320-450 روبل ،
- مكافحة الكلاميديا آر. IgA + مضاد الكلاميديا tr. مفتش 1000-1300،
- الأجسام المضادة IgM للكلاميديا 500-600 روبل ، إلخ.
- متوسط عينات الدم 150-250 روبل.
توفر بعض العيادات والمختبرات خدمة إرسال النتائج عبر البريد الإلكتروني. الخدمة مجانية.
يأخذ تشخيص ELISA مكان خاصفي تشخيص الأمراض.ويتميز مجموعة واسعة من العملوالسرعة والراحة والدقة العالية للنتائج والتكلفة المعقولة. وهو مطلوب، ولذلك فهو متوفر في مختلف العيادات والمختبرات في المدينة.
محتوى
لتقييم قدرة الجسم على مقاومة الأمراض المعدية أو لتحديد مرحلة علم الأمراض، يتم استخدام اختبار الدم. تحتل طريقة ELISA مكانًا مهمًا بين الاختبارات المعملية، فهي تساعد على دراسة نشاط الوظيفة الوقائية للدم بشكل شامل، وتحديد نقص المناعة في الأمراض المعدية وأمراض الدم والعمليات الهرمونية والمناعة الذاتية.
ما هو اختبار الدم المناعي الإنزيمي؟
تشير هذه الطريقة إلى الأبحاث المخبرية التي تحدد وجود عوامل الدم الوقائية ذات الطبيعة البروتينية (الأجسام المضادة) لبعض العوامل المسببة للأمراض (المستضدات). يكشف اختبار الممتص المناعي المرتبط بالإنزيم عن الجلوبيولين المناعي، والذي يمكن العثور عليه في شكل معقدات مناعية. تظهر عندما تحدث تفاعلات عصبية هرمونية معقدة للدفاع المناعي البشري، والتي تصبح استجابة لإدخال مستضدات غريبة.
ينتج الجسم أجسامًا مضادة محددة ضد كل نوع من مسببات الأمراض. بعد ذلك، يتم ربط الكائنات الحية الدقيقة المرضية أو المستضد ويتم تشكيل مركب "مستضد-جسم مضاد" معقد. ثم يتم تحييده، ويحدث التحلل الأنزيمي، ويحدث تفاعل البلعمة، وتنتهي العملية بإزالته من الجسم. يشير وجود مجمعات محددة، يتم تحديدها بواسطة ELISA، إلى نوع العامل الممرض أو المادة الضارة لدى المريض.
فئات الغلوبولين المناعي
اكتشف العلماء ودرسوا 5 أنواع من الغلوبولين المناعي: IgE، IgD، IgG، IgM، IgA. وهناك فئات أخرى، لكنها لا تزال في مرحلة البحث، ولم يتم فهم دورها بشكل كامل. في الطب العملي تعتبر A، M، G مهمة، ويعتمد محتوى المعلومات ودقة التحديد على الفترات الزمنية التي تظهر خلالها، وتصل إلى الحد الأقصى وتختفي.
مؤشرات لفحص الدم باستخدام ELISA
باستخدام هذا التحليل، يمكنك تقييم فعالية العلاج، وإجراء دراسة شاملة قبل عمليات زرع الأعضاء، وتحديد حالة نقص المناعة والأجسام المضادة لأكثر من 600 نوع من مسببات الحساسية. يستخدم اختبار الدم باستخدام ELISA كوسيلة إضافية للكشف عن الخلايا السرطانية. يوصف التحليل إذا كان من الضروري اكتشاف الأجسام المضادة للميكروبات التي تثير الأمراض المنقولة جنسياً:
- داء المشعرات.
- مرض الزهري؛
- داء المقوسات.
- داء المفطورات.
- داء اليوريا.
في حالة الإصابة بالديدان الطفيلية، سيشير تحليل ELISA إلى زيادة في كمية الغلوبولين المناعي. يتم إجراء الدراسات للتأكد مما إذا كان المريض لديه:
- فيروس ابشتاين بار؛
- الالتهابات الهربسية.
- فيروس مضخم للخلايا؛
- مجموعة التهاب الكبد الفيروسي.
اختبار الدم المناعي الإنزيمي ليس هو الخيار الوحيد لتحديد الغلوبولين المناعي. في بعض الأحيان، يتم جمع السائل النخاعي والأنسجة الزجاجية والسائل الأمنيوسي في هذه الدراسة. عند استخدام الدم، يتم جمعه من الوريد المضاد للأكواب باستخدام إبرة الحقن. يجب إجراء الاختبار على معدة فارغة، قبل إجراء اختبار ELISA، لا ينصح بتناول أدوية قد تؤثر على النتيجة. يجب عليك الإقلاع عن الكحول والتدخين وتعاطي المخدرات قبل التبرع بالمواد الحيوية. خيارات نتيجة الاختبار:
- إذا كانت نتائج الغلوبولين المناعي IgG وIgM وIgA سلبية، يقول الأطباء أنه لا يوجد أي علم أمراض أو مرحلة أولية. نفس النتيجة (سلبية) تكون بعد الشفاء التام بعد فترة طويلة.
- إذا كانت نتيجة IgG إيجابية، ولكن لم يتم اكتشاف IgM وIgA، فهذا يشير إلى تكوين مناعة بعد التطعيم أو الإصابة بمرض معدي.
- مع ارتفاع عيار IgM و IgA السلبي، يتم تشخيص IgG لمرض معدٍ حاد.
- إذا كانت نتائج IgG وIgM وIgA إيجابية، يتحدث الأطباء عن المرحلة الحادة من انتكاسة مرض مزمن موجود.
- بالنسبة للعدوى المزمنة التي تكون في مرحلة التراجع (الهدأة)، يُظهر اختبار ELISA عيار IgM سلبيًا، في حين أن IgA وIgG سيكونان إيجابيين.
مزايا وعيوب تحليل ELISA
الجانب السلبي الرئيسي لهذه الدراسة هو إمكانية الحصول على نتائج إيجابية أو سلبية كاذبة. سبب عدم الموثوقية هو استخدام الأدوية والعيوب الفنية في المختبر. يمكن لعملية الاضطرابات الأيضية في الجسم تزوير التحليل. المزايا الرئيسية لتحليل ELISA هي:
- الدقة والخصوصية التشخيصية.
- انخفاض تكلفة التحليل.
- سرعة الحصول على النتائج؛
- إمكانية المراقبة الديناميكية لمرحلة علم الأمراض وفعالية العلاج؛
- سهولة البحث؛
- القدرة على إجراء فحوصات جماعية لبؤر العدوى؛
- غير مؤلم، سلامة للمريض.
- التطبيق في معالجة تكنولوجيا المعلومات.
فيديو