السمات المميزة:
- تحتوي مجموعة الكواشف "MPBA - Blot -HIV-1,HIV-2" على بروتينات فيروسية منقاة من فيروس نقص المناعة البشرية 1 والببتيد - المحدد المستضدي gp36 لفيروس نقص المناعة البشرية-2؛
- يوفر الكشف عن الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-1، فيروس نقص المناعة البشرية-1 المجموعة O، فيروس نقص المناعة البشرية 2 على شريط واحد؛
- إجراء بسيط لإعداد وإجراء الاختبارات؛
- مراقبة جودة التفاعل الداخلي*
- السرعة القصوى للتحليل (3 ساعات)؛
- حجم صغير من عينة الاختبار - 20 ميكرولتر؛
- لا يتطلب معدات إضافية للبحث؛
- يتم ضمان جودة المجموعة من خلال استخدام العينات القياسية الروسية والدولية**
* يتم ضمان مراقبة الجودة الداخلية من خلال وجود:
- شرائط التحكم الداخلية، توفر التحكم في إدخال عينة المصل أو البلازما؛
- السيطرة على المصل السلبي (K-) ؛
- التحكم في المصل الإيجابي (K+)، والذي يسمح بتحديد النطاقات المكتشفة على الشريط؛
- التحكم في المصل الإيجابي الضعيف (K+cl)، والذي يوفر التحكم في حساسية مجموعة الكاشف.
**تاكيد الجودة:
تم تحديد خصائص مجموعة كاشف MPBA-Blot-HIV-1 وHIV-2 عن طريق اختبار عينات من عينة عشوائية من المتبرعين، والمرضى الذين تم تشخيص إصابتهم بفيروس نقص المناعة البشرية، ولوحات التحويل المصلي التجارية، واللوحات القياسية، والعينات التي "يحتمل أن تتداخل مع" مكونات القرار".
مجموعة الكواشف لا تعطي نتائج إيجابية كاذبة عند فحص الأمصال القياسية التي لا تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1،2 ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية -1 ("AT (-) معيار فيروس نقص المناعة البشرية"، رقم FSR 2007/00953 بتاريخ 25.10.2007 ). الخصوصية - 100%.
تم تحديد خصوصية التشخيص من خلال دراسة عينة عشوائية من 200 متبرع من مراكز وعيادات الدم المختلفة مع عدم وجود عدوى بفيروس نقص المناعة البشرية (HIV-1) وفيروس نقص المناعة البشرية (HIV-2) المؤكدة مسبقًا. كانت الخصوصية عند دراسة عينة عشوائية من المتبرعين 100%؛
وتم تحديد خصوصية مجموعة الكاشف من خلال اختبار 250 عينة، بما في ذلك عينات المصل أو البلازما التي تم الحصول عليها من النساء الحوامل، والمرضى في المستشفيات، والمرضى المصابين بالتهاب الكبد الوبائي C وE، والعينات التي تحتوي على مكونات "يحتمل أن تتداخل". عند استخدام مجموعة MPBA-Blot-HIV-1,HIV-2 لهذه العينات، لم يتم اكتشاف أي نتائج إيجابية كاذبة.
تم تحديد الحساسية التشخيصية باستخدام:
- عينات البلازما من لوحة Boston Biomedica, Inc فيروس نقص المناعة البشرية-1 (WWRB 301) من مناطق مختلفة تحتوي على أنواع فرعية مختلفة من فيروس نقص المناعة البشرية-1: المجموعة M (الأنواع الفرعية A، B، C، D، E، F)، والمجموعة O؛ وكانت حساسية مجموعة الكاشف 100%؛
تم تحديد حساسية مجموعة الكاشف في دراسة أجريت على لوحات التحويل المصلي الدولية Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences)، قطة. nrs. PRB 903، PRB 904، PRB 909، PRB 912، PRB 916، PRB 917، PRB 918، PRB 919، PRB 921، PRB 923، PRB 924، PRB 927، PRB 928، PRB 932، PRB 940.
تكتشف مجموعة الكواشف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-1 في أمصال لوحة قياسية تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-1 ("AT (+) معيار فيروس نقص المناعة البشرية-1"، رقم FSR 2007/00953 بتاريخ 25 أكتوبر 2007)، وتكتشف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-1. فيروس نقص المناعة البشرية-2 في الأمصال القياسية التي تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-2 ("AT (+) معيار فيروس نقص المناعة البشرية-2"، رقم FSR 2007/00953 بتاريخ 25 أكتوبر 2007). الحساسية - 100%.
شهادة التسجيل رقم FSR 2010/07958 بتاريخ 13 يوليو 2011 (صلاحية غير محدودة)
مُجَمَّع:
- مناعي. شرائح من غشاء النيتروسليلوز الأبيض مع بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية-1 الفردية (gp160، gp120، p66، p55، p51، gp41، p31، p24، p17) تم امتصاصها عليها عن طريق النقل الكهربائي وتطبيقها على الشريط باستخدام الببتيد الاصطناعي لـ HIV-2، وهو تناظري. بروتين gp36 ومضاد IgG للإنسان (التحكم الداخلي) - 18 قطعة؛
- ك- - السيطرة على المصل السلبي. يتم تعطيل مصل الدم البشري الذي لا يحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1،2، وفيروس التهاب الكبد الوبائي، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية، HBsAg، عن طريق التسخين عند درجة حرارة 560 درجة مئوية؛ سائل أصفر فاتح شفاف - أنبوب اختبار واحد (0.08 مل). يحتوي على مواد حافظة: الثيميروسال وأزيد الصوديوم.
- K+ - السيطرة على المصل الإيجابي. يتم تعطيل مصل الدم البشري الذي يحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية -1،2 (عيار لا يقل عن 1: 10000)، ولا يحتوي على HBsAg، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية، والأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد الوبائي (HCV)، عن طريق التسخين عند درجة حرارة 560 درجة مئوية؛ سائل أصفر فاتح شفاف - أنبوب اختبار واحد (0.08 مل) يحتوي على مواد حافظة: الثيميروسال وأزيد الصوديوم؛
- K+sl - التحكم في المصل الإيجابي الضعيف. مصل الدم البشري الذي يحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية -1،2 (عيار لا يزيد عن 1: 200)، ولا يحتوي على HBsAg، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية، والأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد الوبائي، يتم تعطيله عن طريق التسخين عند درجة حرارة 560 درجة مئوية؛ سائل أصفر فاتح شفاف - أنبوب اختبار واحد (0.08 مل). يحتوي على مواد حافظة: الثيميروسال وأزيد الصوديوم.
- RPOKk (x10) - محلول لتخفيف العينات والمقترنة. مركز - عازل تريس يحتوي على مصل الماعز الطبيعي المعالج مسبقًا؛ سائل رمادي معتم - 1 زجاجة (10 مل). يحتوي على مادة حافظة: الثيميروسال؛
- PRk (x20) - محلول الغسيل. التركيز - المخزن المؤقت تريس الذي يحتوي على توين-20؛ سائل شفاف عديم اللون - 1 زجاجة (70 مل). يحتوي على مادة حافظة: الثيميروسال؛
- المترافقة. الأجسام المضادة IgG المضادة للإنسان في الماعز مترافقة مع الفوسفاتيز القلوي؛ سائل شفاف عديم اللون - أنبوب اختبار واحد (0.06 مل)؛
- الركيزة (محلول التلوين). محلول من 5-برومو-4-فلورو-إندوليل فوسفات (BCIP) ونيتروبلو تيترازوليوم (NBT)؛ سائل أصفر فاتح شفاف - 1 زجاجة (50 مل)؛
- مسحوق للتحصين المناعي. مسحوق الحليب الخالي من الدسم - مسحوق أبيض أو أصفر فاتح غير متبلور - 5 عبوات × 1 جرام؛
- قرص بغطاء لإعداد التفاعل - قطعتان؛
- ملاقط بلاستيكية - قطعة واحدة.
يتم سحب الدم من الوريد. ثم تستمر الدراسة وفق التعليمات:
- يتم وضع العينة في هلام للفصل الكهربي، مما ينتج عنه بروتينات محددة حساسة للفيروس؛
- يتم تطبيق ورق النيتروسليلوز على الجل المعالج.
- يتم وضع العينة المحضرة في جهاز النشاف.
لتحديد إنزيمات معينة، من الضروري إعداد الورق بشكل صحيح للاختبارات المعملية. للقيام بذلك، يتم تطبيق الأجسام المضادة والاقتران المشع المسمى عليه. يتم تقييم نتيجة الدراسة بصريًا، ويتم فحص سلاسل الإنزيمات المبنية.
فك تشفير النتائج
بعد التلاعب، تبقى الشرائط على الورق. وهي تقع في مكان حدوث الاقتران، أي أن الدواء المطبق يتفاعل مع بروتين الفيروس. بهذه الطريقة يمكنك اكتشاف أجزاء من البروتين:
- من قلب فيروس نقص المناعة البشرية-1 – ص17، ص24، ص55؛
- العامل الممرض فيروس نقص المناعة البشرية-2 – ص16، ص26، ص56.
تعتبر نتائج النشاف المناعي إيجابية إذا تم الكشف عن 2 من 3 بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية-1 أو فيروس نقص المناعة البشرية-2. نظرًا لأن اللطخة الغربية (الاسم الثاني للدراسة) تُستخدم غالبًا لتأكيد اختبار ELISA إيجابي، يتم فحص التفاعل بحثًا عن بروتينات محددة: gp120/160، gp41 أو p24. وهي جزء من جينات الإيدز الثلاثة الرئيسية - gag، pol، وenv. أثناء التشخيص الأولي، يتم إجراء الاختبار فقط للبروتينات p25 وgp110/120 وgp160؛ وإذا أعطت نتيجة إيجابية، يتم إجراء الاختبار لـ p24. ويسمح هذا الجزء من البروتين باكتشاف الفيروس في مرحلة مبكرة.
النتيجة الإيجابية هي سبب للبحث عن تشخيصات أكثر تعقيدًا. ولا يصح إلا في ثلاث حالات:
- في المرضى الذين يعانون من مستويات عالية من البيليروبين.
- عند الاتصال بالمستضدات الفيروسية.
- لأمراض النسيج الضام.
إذا لم يكن لدى المريض خطوط تتوافق مع بروتينات الإيدز، فسيتم تقييم النتيجة على أنها سلبية. وهذا يعني أن الشخص غير مصاب بفيروس نقص المناعة البشرية أو أنه في فترة النافذة. وهذا الأخير يعني أن الفيروس كان من الممكن أن يدخل الجسم، لكنه لم يتطور فيه بعد. ولزيادة دقة التشخيص، يتم استخدام أنظمة الاختبار:
- المؤتلف-فيروس نقص المناعة البشرية؛
- مولد المضاد؛
- بيبتوسكرين.
وبعد فحصها تعتبر النتيجة سلبية إذا لم يتم العثور على البروتينات gp120، gp160، Sp4 في العينة.
هناك خيار تفسير آخر - نتيجة محايدة أو مشكوك فيها. ويحدث عند أولئك الذين لديهم اتصال جنسي مع شريك مصاب بفيروس نقص المناعة البشرية. تم العثور على الأجسام المضادة للبروتينات gp120 و gp160 في دمائهم. أيضًا، يتم تقديم إجابة مشكوك فيها أثناء النشاف عندما تكون العدوى بدون أعراض، أي أنها في حالة سبات.
من المهم التحقق بدقة من النتيجة المشكوك فيها. ولهذا الغرض، يتم استخدام دراسة ديناميكية لمصل الدم، أي إجراء فحوصات منتظمة باستخدام طرق التطعيم المناعي وELISA لمدة ستة أشهر. توصف أيضًا فحوصات إضافية، نظرًا لأن وجود الأجسام المضادة الذاتية والمجمعات المناعية في الدم قد يكون بسبب:
- أمراض معدية؛
- وجود أورام سرطانية.
- الحساسية.
تكتشف الكتلة المناعية لفيروس نقص المناعة البشرية الأجسام المضادة للبروتينات الفيروسية الموضوعة على غشاء خاص من النيتروسليلوز. هذه دراسة دقيقة للغاية تحدد وجود الكسور التي توجد فيها البروتينات الرئيسية على شكل أشرطة صغيرة.
يحتوي غلاف فيروس نقص المناعة البشرية-1 على بروتينات سكرية ذات وزن جزيئي يتراوح بين 41 كيلو دالتون إلى 160 كيلو دالتون (كيلودالتون). من الأهمية بمكان بالنسبة للتخثر المناعي بروتين سكري فيروس نقص المناعة البشرية -2 الذي يتراوح وزنه الجزيئي من 32 كيلو جرام إلى 140 كيلو جرام. يتم تمثيل البروتينات الأساسية لفيروس نقص المناعة البشرية-1 والإنزيمات الفيروسية بالبروتينات p17، p24، p55.
يتكون العامل المسبب لفيروس نقص المناعة البشرية-2 من البروتينات المعينة p16، p25، p56. يشكلون قوقعتها الداخلية. يتضمن الجينوم 6 جينات تنظيمية و 3 جينات هيكلية. في كثير من الأحيان، أثناء انقسام الخلايا، تنشأ أخطاء وراثية وتظهر عدة أنواع فرعية من العامل الممرض.
اختبارات إيجابية
للقضاء على الأخطاء في التشخيص المختبري لعدوى فيروس نقص المناعة البشرية، يوصف للمريض اختبار إضافي. يتم دمج نتائجها على أنها إيجابية إذا تم اكتشاف أجسام مضادة لـ 2 أو 3 بروتينات من فيروس نقص المناعة البشرية-1 أو فيروس نقص المناعة البشرية-2.
يؤكد Immunoblot جميع نتائج ELISA الجيدة. في هذه الحالة، تم الكشف عن الأجسام المضادة لـ gp120/160، gp41 أو p24، وهي وحدات هيكلية لجينات الإيدز الثلاثة الرئيسية - gag، pol، وenv. في بعض المرضى الذين لديهم نتائج ELISA وPCR سلبية، تظهر الكتلة المناعية عدة خطوط إيجابية. يصف الطبيب اختبار P24 إضافي لإجراء التشخيص الصحيح واستبعاد المرحلة المبكرة من الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية.
إذا كانت النتائج التي تم الحصول عليها موضع شك، يُطلب من المريض تكرار الاختبار خلال الأشهر الثلاثة القادمة. يتم تأكيد جميع حالات الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية تقريبًا باستخدام نظام التطعيم المناعي - جهاز سانوفي. في معظم الحالات، يتم اكتشاف مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية، بروتينات p25 وgp110/120 وgp160، مما يشير إلى الإصابة بالفيروس. يتم تسجيل اختبار إيجابي كاذب في المرضى الذين يعانون من أمراض النسيج الضام مع ارتفاع مستويات البيليروبين عند التفاعل مع المستضدات الفيروسية المختلفة.
نتيجة سلبية
إذا كان هناك نقص في الخطوط الإيجابية المقابلة لبروتينات فيروس الإيدز، يتم تفسير الكتلة المناعية على أنها نتيجة سلبية. ويؤكد التحليل بوضوح عدم الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية أو يشير إلى "فترة النافذة". إذا أعطت الكتلة المناعية نتيجة سلبية، فإن الشخص ليس حاملاً لفيروس الإيدز.
يتم أخذ عينات مصل الدم من المرضى المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية للدراسة. يتم تخزينها مجمدة عند -20 درجة مئوية. يتم التحليل باستخدام أنظمة الاختبار:
- مولد المضاد؛
- المؤتلف-فيروس نقص المناعة البشرية؛
- بيبتوسكرين.
يشير تسجيل النتيجة السلبية إلى عدم وجود أجسام مضادة للبروتينات السكرية المغلف لفيروس نقص المناعة البشرية gp120، gp160، Sp41 في المصل.
غالبًا ما يهتم المريض بمسألة ما إذا كان المريض الذي لديه شريك جنسي مصاب يمكن أن يكون لديه نتيجة مناعية سلبية لفيروس نقص المناعة البشرية. بعد الدراسة، غالبًا ما يتم الحصول على نتيجة مشكوك فيها أو يتم اكتشاف الأجسام المضادة لبروتينات gp120 وgp160، مما يشير إلى الغياب التام للبيانات السلبية. في بعض الأحيان يتم تسجيل استجابة مشكوك فيها لدى المرضى الذين يعانون من عدوى بدون أعراض.
نتائج غير قابلة للتفسير
تكون الاختبارات التي يتم إجراؤها باستخدام اختبارات الأجسام المضادة المختلفة لفيروس نقص المناعة البشرية في بعض الأحيان سلبية ولا تستوفي معايير الإيجابية المصلية. يصعب على الطبيب تحديد سبب النتيجة المشكوك فيها.
بعض المرضى ليسوا معرضين لخطر الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. قد يخطئ الطبيب في تفسير نتائج الاختبار إذا كانت العدوى ناجمة عن نمط مصلي مختلف.
يجب فحص مصل دم المريض مع مرور الوقت. إذا لم يتم ملاحظة أي مظاهر سريرية للإيدز خلال 6 أشهر ولا توجد عوامل خطر، يتم تسجيل المريض على أنه ليس لديه عدوى.
يتم الحصول على نتائج اختبار مشكوك فيها في المرضى المعرضين لخطر منخفض للإصابة. في بعض الحالات، يكون سبب ظهور بيانات غير واضحة هو المجمعات المناعية والأجسام المضادة الذاتية الموجودة في مصل الدم.
في بعض المرضى، يحدث حدوث نتائج مشكوك فيها بسبب تطور العمليات المرضية:
- أمراض معدية؛
- ورم سرطاني
- رد فعل تحسسي.
يعاني المريض من تغيرات في فحص الدم السريري، أو زيادة في بروتين سي التفاعلي أو زيادة في معدل سرعة ترسيب الدم (ESR). في الأشخاص الذين يعانون من الأمراض المعدية، غالبا ما يتم الكشف عن رد فعل مناعي مشكوك فيه لفيروس نقص المناعة البشرية.
لا يمكن للمرضى الذين لديهم نتائج غير محددة التبرع بالدم والمواد البيولوجية.
الطريقة الخطية
يتضمن مبدأ التطعيم المناعي ما يلي:
- استخدام المادة الفيروسية الأصلية بتنسيق فيروس نقص المناعة البشرية أو المستضدات بتنسيق Western Blot.
- مزيج من بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية مع الأجسام المضادة الفردية المكتشفة في مصل الدم.
- عملية الحضانة التي تحدث مع إضافة الأجسام المضادة الموسومة إلى Ig البشري.
- تفسير المشارب الملونة.
يسمح التحليل للطبيب بتفسير نتائج الدراسة في الوقت المناسب. يتم فك تشفير اللطخة الإيجابية على أنها 2ENV+/- GAG+/POL، غير محددة - 1 ENV+/- GAG+/POL. النتيجة السلبية تعني عدم وجود خطوط.
لإجراء التحليل، يتم استخدام الكتل المناعية المؤتلفة والمتحللة. الدراسة محددة وهي 99.5٪.
يتساءل المرضى عما إذا كان من الممكن تفسير نتيجة الاختبار على أنها خاطئة. يمكن إنشاء البيانات التي تم الحصول عليها نتيجة لتحفيز دفاعات الجسم (الحمل، غسيل الكلى). في حالة الاشتباه في الإصابة بمتلازمة الفيروسات القهقرية الحادة ويوصى بالاتصال بمريض مصاب بعدوى فيروس نقص المناعة البشرية، يوصى المريض بالتبرع بالمصل لإجراء تفاعل PCR. ويتم تأكيد الاختبارات المصلية المتكررة عن طريق قياس الحمل الفيروسي في العينة المقدمة من المادة البيولوجية.
تشخيص فيروس نقص المناعة البشرية عند الأطفال حديثي الولادة
يتم إجراء اختبار الإيدز لدى طفل صغير إذا تم الاتصال بأم مصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. يمكن أن تكون التفاعلات المصلية إيجابية لمدة 1.5 سنة. يتم الكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم لدى الأطفال حديثي الولادة باستخدام تفاعلات ELISA وRIF والتطعيم المناعي.
خلال 9 أشهر من عمر الطفل تظهر نتيجة إيجابية بسبب وجود الأجسام المضادة للأم في مصل الدم. تبلغ خصوصية المستضد p24 حوالي 65٪. في بعض الحالات، لا يمكن اكتشاف الأجسام المضادة لدى الطفل المريض إذا تم تشخيصه بانخفاض مستويات الجلوبيولين الخلقي في الدم. لا تضمن النتيجة المناعية السلبية المؤكدة غياب العدوى.
يتم الاختبار على عدة مراحل:
- 1-2 أيام بعد الولادة؛
- في 1-2 أشهر؛
- في عمر ستة أشهر.
يتم إجراء مزيد من الدراسة للأجسام المضادة حتى يتم الحصول على نتيجتين سلبيتين للطخة المناعية. من الممكن تشخيص الإصابة بالإيدز لدى الطفل المولود لامرأة مصابة بفيروس نقص المناعة البشرية بناءً على نتيجتين إيجابيتين لتفاعل البوليميراز المتسلسل. يتم استبعاد انتقال مسبب فيروس نقص المناعة البشرية إلى الوليد إذا لم ترضع المرأة رضاعة طبيعية.
إختبار الحمل
يتم وصف اختبار المناعة والنشاف الخطي للأم الحامل إذا تم الحصول على نتيجة إيجابية لفيروس نقص المناعة البشرية بواسطة ELISA. إذا تم تأكيد اللطخة، فإن المريض مصاب بالإيدز. في هذه الحالة، ابتداء من الأسبوع الرابع عشر من الحمل، يوصف العلاج لمنع إصابة الطفل.
هل يمكن للأخصائي أن يخطئ عند إجراء فحص مصل الدم أثناء الحمل، يسأل المرضى الطبيب المعالج. وهو ملزم بإعطاء المرأة الحامل نسخًا من اختبارات PCR و ELISA لإزالة الشكوك حول موثوقيتها.
تنشأ مشاكل في بعض الأحيان عند إجراء التطعيم المناعي، ولكن إذا كانت نتائج اختبار ELISA وblot وPCR إيجابية، يتم تأكيد تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية أخيرًا. احتمال الحصول على اختبار إيجابي كاذب أثناء الحمل مرتفع. إذا كانت قيمة اختبار ELISA (+) والبقعة المناعية (-)، يُطلب من المرأة إعادة أخذ مصل الدم.
بطاقة الصرف الخاصة بالحامل تشير إلى نتيجة الدراسة. وإذا كانت قيمته موجبة، يحرم على المرأة إرضاع طفلها بعد الولادة، حتى لا تصاب بفيروس الإيدز. يتم التوصل إلى الاستنتاجات النهائية على أساس الدراسات المختبرية والسريرية والوبائية. فقط بعد فك رموزها يتم تشخيص إصابة المريض بفيروس نقص المناعة البشرية.
في تواصل مع