إذا كانت النتائج التي تم الحصول عليها من اختبار المزرعة المعزولة تتوافق مع البيانات المذكورة أعلاه، فسيتم تحديد السلالة البكتيرية الناتجة على أنها مزرعة بكتيرية من النوع Yersinia enterocolitica.
إذا لم تكن المزرعة البكتيرية قيد الدراسة من نوع البكتيريا من النوع Yersinia enterocolitica، فمن الممكن إعادة استخدام المعلق البكتيري مع وسط تراكم مخزن في الثلاجة عند درجة حرارة +4 درجة مئوية.
الحل الأمثل هو تقديم ليس فقط عينة واحدة من العينة قيد الدراسة للبحث، بل سلسلة كاملة من العينات.
الإطار الزمني العام للفحص البكتريولوجي للمادة هو خلال 7 أيام.
يتم تحديد الأنواع بالطرق البيوكيميائية والمصلية.
لإجراء تشخيص سريع للمرض، يمكن استخدام بكتيريا الطاعون. يتم عزل عاثيات Y. الطاعونية من مصادر مختلفة، بما في ذلك أنسجة البشر والحيوانات المرضى، وكذلك البراغيث. يربط العديد من المؤلفين الانقراض الطبيعي السريع للمرض أثناء تفشي المرض بوجود العاثيات. إن خصوصيتها العالية وفوعتها بالنسبة لعصية الطاعون تجعل من الممكن استخدامها للتعرف على الطاعون عن طريق إضافتها إلى مادة الاختبار قبل التلقيح أو عن طريق زيادة عيار العاثيات في الوسط.
للكشف السريع، يتم أيضًا استخدام ATs المسمى بالفلوريسئين (مما يسمح باكتشاف يرسينيا بيستيس في كائنات مختلفة خلال أول ساعتين من الدراسة)، ورد فعل تحييد AT، وتفاعل الترسيب في ألواح أجار القياسية، وطريقة التعجيل. نمو Y. طاعون على وسائل الإعلام التخصيب.
كما تم تطوير طرق لتسريع الاختبار البيولوجي، على سبيل المثال، إعطاء الجلايكورتيكويدات أو صفار الدجاج للحيوانات المصابة، مما يجعل من الممكن تسريع تشخيص الطاعون في حالات انخفاض الضراوة أو عند استخدام جرعة معدية صغيرة.
يتم عرض الخصائص الكيميائية الحيوية الرئيسية التي تميز Y. السل الكاذب و Y. enterocolitica في الجدولين 15 و 16. يمكن أن تكون العلامات الإضافية هي نتائج تفاعل Voges-Proskauer: تكون سلبية دائمًا في Y. السل الكاذب وإيجابية عند 22-28 درجة مئوية في Y. التهاب القولون المعوي. في الآونة الأخيرة، تم اقتراح وسط انتقائي يحتوي على سيفسولودين وإيرجازان ونوفوبيوسين (CIN agar) لعزل Y. enterocolitica من البراز.
الوسائط المغذية لزراعة محلول يرسينيا الفوسفاتي (PBS)
الحل أ: KH 2 PO 4 – 9.08 جم في 1.0 لتر من الماء المقطر؛ المحلول B: Na2HPO42H2O – 11.87 جم في 1 لتر من الماء المقطر (الرقم الهيدروجيني 7.6-7.8). اجمع 150 مل من المحلول A مع 850 مل من المحلول B. صب 5 مل في أنابيب الاختبار، وقم بتعقيمها عند 1 ATM. في غضون 1 ساعة.
وسط الخميرة العازلة (BCD)
تحلل الكازين بدرجة متوسطة من الانقسام – 2.0 مل (معهد داغستان لأبحاث الوسائط المغذية)؛ خلاصة خميرة الخباز - 5.0 مل؛ محلول الفوسفات المنظم (الرقم الهيدروجيني 7.6-7.8) – يصل إلى إجمالي حجم 1 لتر. مستخلص خميرة الخباز: إلى 500 جرام من الخميرة، التي تم سحقها مسبقًا إلى كتلة متجانسة في ملاط خزفي في كمية صغيرة من الماء المقطر، أضف ما يصل إلى 1 لتر من نواتج التقطير. يُسكب المعلق في دورق ويُغلى لمدة 60 دقيقة على نار خفيفة مع التحريك. تبريد التعليق عند 5 درجة مئوية لمدة 16-18 ساعة. ثم استنزاف السائل طاف وتصفية من خلال مرشح ورقي واسع المسام. يُسكب مستخلص الخميرة المحضر في زجاجات ويُعقم تحت ضغط 0.5 ضغط جوي. 30 دقيقة؛ تخزينها في 5-8 درجة مئوية لمدة 12 شهرا.
أضف إلى 0.5 لتر من محلول الفوسفات المنظم 2.0 جرام من الكازين هيدروليزات (المعد مسبقًا وفقًا لتوجيهات الملصق) و5.0 مل من خلاصة الخميرة. امزج بالرج، وأضف محلول الفوسفات المنظم إلى إجمالي حجم 1 لتر وتحقق من الرقم الهيدروجيني للوسط المحضر (يجب أن يكون 7.6-7.8). بعد ذلك، صب الخليط في أنابيب اختبار سعة 5.0 مل وقم بتعقيمها تحت ضغط 0.5 ضغط جوي. في غضون 20 دقيقة. يمكن استخدام الوسيط خلال 7-10 أيام عند تخزينه في الثلاجة.
الفحص البكتريولوجي الكلاسيكي هو المعيار "الذهبي" للتشخيص الميكروبيولوجي.
الغرض من البحث البكتريولوجي هو عزل ثقافة نقية من العامل الممرض والتعرف عليه.
خوارزمية البحث البكتريولوجي:
الفحص المجهري الأولي للمادة قيد الدراسة (مرحلة اختيارية، حسب طبيعة المادة)؛
البذر الأولي لعزل ثقافة نقية؛
تراكم الثقافة النقية؛
دراسة الخصائص البيولوجية المعقدة للثقافة المعزولة.
التحديد النهائي للعامل الممرض.
اليوم الأول من الدراسة
1. الفحص المجهري الأولي
تعطي نتيجة الفحص المجهري الأولي فكرة تقريبية عن وجود الأشكال المورفولوجية المختلفة للكائنات الحية الدقيقة في المادة السريرية، وتسمح أيضًا بتحديدها الأولي من خلال الخصائص المورفولوجية والصبغية واختيار الوسائط للتلقيح الأولي.
إفرازات قيحية - الفحص المجهري الأولي مطلوب.
السائل النخاعي - مطلوب الفحص المجهري الأولي للرواسب.
البلغم - يتم إجراء الفحص المجهري الأولي من التخفيفات 10 4 -10 5.
مسحات من الحلق والأنف - لا يتم إجراء الفحص المجهري الأولي.
الدم - لا يتم إجراء الفحص المجهري الأولي.
البراز - لا يتم إجراء الفحص المجهري الأولي.
2. البذر الأولي
يتم تلقيح مادة الاختبار بعد الفحص المجهري الأولي أو بدونه (البراز، البول، مسحات الأنف والحنجرة، الدم) في الوسائط المناسبة لعزل مزرعة نقية:
مرق السكر وأجار الدم - للمكورات العقدية.
أجار ملح الصفار، أجار الدم - للمكورات العنقودية.
إندو المتوسطة - للبكتيريا من عائلة Enterobacteriaceae.
MPA (أجار ببتون اللحم) - للبكتيريا سالبة الجرام.
MPA (البذر وفقًا لطريقة Shukevich) - لعزل Proteus ؛
وسط Kitta-Tarozzi - لعزل اللاهوائيات؛
وسط سابورود - لعزل الفطريات.
البذر هو المرحلة الأولى من الفحص البكتريولوجي (إذا لم يتم إجراء الفحص المجهري الأولي).
ويتم البذر على النحو التالي:
البذر بخط وإطلاق الحلقة. يتم أخذ المادة بحلقة بكتريولوجية مكلسة ويتم تلقيح الحقل العلوي للكوب بكثافة باستخدام خط. بعد ذلك، يتم تحميص الحلقة مرة أخرى وإدخالها في قطاع كثيف البذور ويتم رسم 2-3 خطوط رأسية عبر الكوب بأكمله. بعد ذلك، يتم قلب الكأس، ويبقى قطاع البذور الكثيفة في الحقل السفلي من الكأس. يتم تسخين الحلقة مرة أخرى، ويتم نشر البذر عبر الكوب بضربات أفقية 2-3.
البذر مع ملعقة. يتم تطبيق المادة على سطح الوسط باستخدام ملعقة أو ماصة، ثم يتم نثرها على السطح بأكمله باستخدام ملعقة.
البذر بمسحة. للتلقيح، يتم وضع مسحة تحتوي على مادة الاختبار في كوب ويتم فرك محتوياتها في الوسط المغذي بحركة دائرية.
البذر حسب القطاعات. مع هذا البذر، يتم رسم الجزء السفلي من الكأس إلى القطاعات، ويتم البذر بحركات متقطعة من حافة الكأس إلى المركز وعلى طول القطاعات.
اليوم الثاني من الدراسة
1. تسجيل النمو على الوسائط المغذية على أنه متجانس أو غير متجانس.
2. إجراء وصف للممتلكات الثقافية.
خوارزمية لوصف المستعمرات
نتيجة للنمو على وسط غذائي، يتم تشكيل المستعمرات (أحفاد خلية واحدة). يتم اختيار المستعمرات المعزولة ودراستها - تبدأ المرحلة الثانية من الدراسة التي تهدف إلى دراسة الخصائص الثقافية للبكتيريا. تعد معرفة هذه الخصائص ضرورية لتحديد الثقافة النقية الناتجة، حيث أن كل نوع من الكائنات الحية الدقيقة، عندما ينمو على وسط غذائي معين، يتوافق مع خصائص ثقافية معينة.
دراسة المستعمرات:
مجهرياً: بالعين المجردة في الضوء المنقول والمنعكس؛
مجهريا: عند التكبير المنخفض لنظام المجهر الجاف.
في الضوء المنقول يدرسون:
حجم المستعمرات (كبير، متوسط، صغير، قزم)؛
شكل مستعمرة (منتظم، غير منتظم، مستدير)؛
شفافية المستعمرة (شفافة، معتمة).
في الضوء المنعكس حدد:
اللون (عديم اللون أو ملون)؛
طبيعة السطح (ناعم، وعر، لامع، خشن)؛
ارتفاع المستعمرات عن سطح الوسط (منخفض، منبسط، مرتفع).
التقييم المجهري:
الحافة (ناعمة، غير مستوية)؛
الهيكل (متجانس، غير متجانس).
تنتهي دراسة المستعمرات بتحضير اللطاخة وصبغة جرام والفحص المجهري.
عند أخذ مادة من مستعمرة لتحضير اللطاخة، يتم تقييم تماسكها (لينة، لزجة، جافة).
إذا تبين أن المزرعة نظيفة تحت المجهر، يتم زرعها في أجار مائل للتراكم.
اليوم الثالث من الدراسة
1. وصف نمط النموعلى أجار مائل:
غير متجانسة تجانسا؛
على طول السكتة الدماغية، مستمر، مستمر.
2. التحقق من نقاء الثقافة المتراكمة. يتم تحضير المسحات وصبغها بصبغة جرام وفحصها مجهريا. إذا تم تجميع ثقافة نقية، فإنها تخضع لمزيد من التحديد. يعتمد تحديد البكتيريا حسب الجنس والنوع على دراسة الخصائص الأيضية - تحديد الكيمياء الحيوية والبنية المستضدية - تحديد الهوية المصلية.
3. دراسة الخواص البيوكيميائية. الخصائص البيوكيميائية - قدرة البكتيريا على تحطيم ركائز معينة من خلال إنتاج الإنزيمات المناسبة. لدراسة الخواص البيوكيميائية، يتم استخدام وسائط التشخيص التفاضلي التي تحتوي على ركائز مختلفة (سلسلة متنوعة). وهي تشمل وسائط Hiss التي تحتوي على الكربوهيدرات وحليب عباد الشمس والجيلاتين والوسائط التي تحتوي على الأحماض الأمينية وMPB (مرق الببتون باللحم) مع مؤشرات لكبريتيد الهيدروجين والإندول.
تتم دراسة خصائص السكاروليتيك على وسائط Hiss. أنها تحتوي على ماء الببتون، الركيزة الكربوهيدرات (مختلف السكريات الأحادية والسكريات)، والكحولات متعددة الهيدرات ومؤشر.
إذا كان لدى البكتيريا إنزيمات تحطم الركيزة الكربوهيدراتية، فإنها تطلق منتجات أيضية (حمض أو حمض وغاز). عندما يتشكل الحمض، يغير المؤشر لون الوسط، وعندما يتشكل الغاز، يتم تسجيل التشققات في الوسط.
تمت دراسة خصائص التحلل البروتيني من خلال الزراعة على الجيلاتين وحليب عباد الشمس. إذا كانت البكتيريا تحتوي على البروتياز، فإن الجيلاتين يسيل. تظهر جلطة ذات لون كريمي في الحليب، وفوقها سائل - بيبتون الحليب (بسبب حقيقة أن البروتياز البكتيري يكسر كازين الحليب إلى ببتون).
خصائص التحلل. في كثير من الأحيان، تكون البكتيريا قادرة على تحطيم المنتجات الوسيطة لتحلل البروتين - الببتونات. منتجات هذه العملية: الأمينات (السكاتول، الإندول)، الأحماض الأمينية، الغازات (كبريتيد الهيدروجين، الأمونيا، ثاني أكسيد الكربون). يمكن اكتشافها باستخدام ورقة المؤشر:
اختبار عباد الشمس - للكشف عن الأمونيا.
مبلل بحمض الأكسالوسيتيك - للكشف عن الإندول.
مبلل بخلات الرصاص - للكشف عن كبريتيد الهيدروجين. يتم الكشف عن منتجات تبليل ونزع الكربوكسيل للأحماض الأمينية باستخدام شرائط الاختبار التي يتغير لونها عندما يتغير الرقم الهيدروجيني للوسط.
اليوم الرابع من الدراسة
1. تسجيل نتائج الاختبارات البيوكيميائية. بعد تحديد ثقافة لأنواعها، يتم دراسة عدد من الخصائص الإضافية، مثل الحساسية للمضادات الحيوية، والسمية، ووجود عوامل الفوعة، وملف البلازميد، ويتم أيضًا التمايز داخل النوع.
2. تكون نتائج التحديد الكيميائي الحيوي بمثابة الأساس لتحديد الهوية المصلية. يتم إجراء التحديد المصلي للمزرعة المعزولة في تفاعل تراص زجاجي باستخدام الأمصال المناعية الممتزة المناسبة، والتي يتم تحديد اختيارها من خلال نتائج التحديد الكيميائي الحيوي.
التمايز داخل النوع - تحديد ما إذا كانت السلالة تنتمي إلى فاجوفار معين، أو بكتريوسينوجينوفافار، أو باكتيريوسينوفار، أو بيوفار، أو ريستوفار، وما إلى ذلك. فهو يسمح لنا بتحديد الروابط الوبائية بين سلالات من نفس النوع.
يتيح لنا تحديد الثقافة المعزولة التوصل إلى استنتاج حول الكائنات الحية الدقيقة التي تعمل كعامل مسبب للمرض. عند عزل البكتيريا الانتهازية، من الضروري الالتزام بمعايير الأهمية المسببة:
وجود البكتيريا في المادة من البؤرة المرضية بكمية لا تقل عن 10 5 CFU ml/g؛
العزلة المتكررة عن مواد من نفس الثقافة؛
زيادة عيار الأجسام المضادة في مصل دم المريض إلى السلالة الذاتية بمقدار 4 مرات أو أكثر.
تحديد العاثيات البكتيرية (كتابة العاثيات)
يتم تحديد هوية الفاغوفار حسب المؤشرات الوبائية لإثبات الروابط الوبائية بين المرضى. لإجراء الدراسة، خذ أطباق بيتري التي تحتوي على MPA، وجفف السطح، ثم ارسم الجزء السفلي إلى مربعات ثم ضع علامة عليها. بعد ذلك، يتم زرع ثقافة لمدة 3-4 ساعات في المرق مع العشب، وتجفيفها، ويتم وضع قطرة من العاثيات القياسية المقابلة في التخفيف العملي على كل مربع. يتم وضع المحاصيل في منظم الحرارة لمدة يوم. بعد 24 ساعة، يؤخذ في الاعتبار مدى حساسية الثقافة لبعض العاثيات عن طريق العمل التحللي.
تحديد البكتيريا
لتحديد البكتريوسينوفار، تم تحديد حساسية السلالات المدروسة للبكتيريا المرجعية. مثل كتابة العاثيات، يتم تنفيذها وفقًا للمؤشرات الوبائية.
لإجراء الدراسة، يتم زرع الثقافات المنتجة القياسية المقابلة من البكتريوسينات النموذجية على الوسائط المغذية. يتم وضع المحاصيل في منظم الحرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
يتم تعطيل المستعمرات المزروعة من مزارع المؤشر باستخدام الكلوروفورم، وبعد ذلك يتم سكب 2-4 مل من الأجار المنصهر على السطح، حيث يتم أولاً إضافة 0.2 مل من ثقافة المرق التي تتم دراستها لمدة 4 ساعات. بعد أن يصلب الآجار، توضع المحاصيل مرة أخرى في منظم الحرارة لمدة 18-24 ساعة، وبعد الوقت المحدد، يؤخذ في الاعتبار وجود مناطق تثبيط النمو حول مزارع المؤشر، وبالتالي تحديد البكتيريا المدروسة للبكتيريا المدروسة.
©2015-2019 الموقع
جميع الحقوق تنتمي إلى مؤلفيها. لا يدعي هذا الموقع حقوق التأليف، ولكنه يوفر الاستخدام المجاني.
تاريخ إنشاء الصفحة: 2016-04-27
الثقافة البكتريولوجية (الثقافة البكتريولوجية) هي دراسة مخبرية ميكروبيولوجية للمواد البيولوجية البشرية عن طريق تلقيحها على أوساط مغذية معينة عند درجة حرارة معينة من أجل تحديد وجود أي عدد من الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض والانتهازية فيها وحل مشاكل العلاج النوعي بشكل أكبر.
عندما يتم عزل بعض الكائنات الحية الدقيقة، يتم إجراء تحليل مهم آخر - مضاد حيوي – تحديد حساسية مسببات الأمراض المكتشفة للأدوية المضادة للبكتيريا والعاثيات.
مزايا الثقافة البكتريولوجية هي:
خصوصية عالية للطريقة (أي أنه لم يتم ملاحظة أي ردود فعل كاذبة).
القدرة على فحص أي سائل بيولوجي بشري على الإطلاق.
الهدف العلاجي هو تحديد حساسية الميكروب المحدد لعامل علاجي معين (المضادات الحيوية)، مما يجعل من الممكن تنفيذ الوصفات العلاجية بدقة عالية بما فيه الكفاية.
مساوئ الثقافة البكتريولوجية:
مدة الحصول على النتيجة.
متطلبات عالية لجمع المواد.
متطلبات معينة لمؤهلات العاملين في المختبرات البكتريولوجية.
مؤشرات للفحص البكتريولوجي
إن استخدام أساليب البحث الميكروبيولوجية واسع الانتشار في الممارسة الطبية، ولا سيما في الأمراض المعدية وأمراض النساء والمسالك البولية والجراحة وطب الأنف والأذن والحنجرة والأورام وغيرها. المؤشر المطلق للحاجة إلى الثقافة البكتيرية هو أي مرض التهابي يصيب أعضاء وأنظمة الجسم البشري، أو الشك في وجود عملية إنتانية.
مادة للزراعة البكتيرية
يتم أخذ الوسائط البيولوجية التالية لجسم الإنسان للبحث: مخاط البلعوم الأنفي، مخاط البلعوم، إفراز الشعب الهوائية (البلغم)، البراز (البراز)، مخاط مجرى البول، قناة عنق الرحم، إفراز البروستاتا، البول، الدم، السائل النخاعي، حليب الثدي، الصفراء، محتويات الخراجات، بؤر الالتهابات، إفرازات الجرح.
ما هي الكائنات الحية الدقيقة التي يمكن اكتشافها عن طريق الثقافة البكتيرية؟
في مخاط الأنف والحنجرة، يمكن الكشف عن العقديات الانحلالية (العقدية المقيحة، العقدية agalactiae)، المكورات الرئوية (العقدية الرئوية)، المكورات العنقودية الذهبية (المكورات العنقودية الذهبية)، الوتدية الخناقية، المستدمية النزلية من النوع ب)، المكورات الرئوية (النيسرية السحائية) )، الليستيريا (الليستيريا).
في البراز، يحاولون تحديد مجموعة البكتيريا المعوية - السالمونيلا والشيغيلا (Salmonella spp., Shigella spp.)، واليرسينيا (Iersiniae spp.)، ومجموعة بكتيريا التيفوئيد نظيرة التيفية (السالمونيلا التيفية، والسالمونيلا نظيرة التيفية أ، والسالمونيلا نظيرة التيفية ب). )، مسببات الأمراض الانتهازية للالتهابات المعوية، والميكروبات اللاهوائية، ومسببات الأمراض المعدية السامة المنقولة بالغذاء، وكذلك فحص البراز بحثًا عن خلل العسر الحيوي المعوي.
يمكن اكتشاف الزائفة الزنجارية أو الزائفة الزنجارية في محتويات الجروح، والوخز الحيوي، والإفرازات القيحية.
يتم فحص مخاط الجهاز البولي التناسلي بحثًا عن مسببات الأمراض المنقولة جنسياً - المكورات البنية، المشعرة، الفطريات (النيسرية البنية، المشعرة المهبلية، الفطريات من جنس المبيضات)، الميورة (الميورة الحالة لليوريا)، الميكوبلازما (الميكوبلازما هومينيس)، الليستيريا (الليستيريا)، يمكنك أيضًا فحص اللطاخة بحثًا عن النباتات البكتيرية.
يمكن زراعة (فحص) الدم للتأكد من العقم.
يتم فحص مواد مثل حليب الثدي، والبول، وإفراز البروستاتا، والكشط، والمسحة، ومحتويات الجرح، وسائل المفاصل، والصفراء للتلوث العام (النباتات البكتيرية).
ما هي الثقافة البكتريولوجية؟
يتم وضع (تطعيم) المواد المخصصة للبحث في المختبر البكتريولوجي على وسائط مغذية خاصة. اعتمادًا على البحث المطلوب عن مسبب مرض معين أو مجموعة مسببات الأمراض، يتم إجراء البذر على وسائط مختلفة. على سبيل المثال، يمكن أن يكون هذا وسطًا مغذيًا انتقائيًا أو اختياريًا (لنمو أحد مسببات الأمراض، بينما يتم تثبيط نمو الميكروبات الأخرى)، ومن الأمثلة على ذلك مصل الحصان المتخثر لتحديد مسببات أمراض الخناق أو وسط يحتوي على السيلينيت أو مع الأملاح الصفراوية للكشف عن مسببات الأمراض المعوية.
مثال آخر هو وسائط التشخيص التفريقي (وسط هيس)، والتي تستخدم لفك تشفير الثقافات البكتيرية. إذا لزم الأمر، نقل من الوسائط المغذية السائلة إلى الوسائط الصلبة من أجل تحديد المستعمرات بشكل أفضل.
ثم يتم وضع الوسائط المغذية في منظم الحرارة (جهاز خاص)، حيث يتم تهيئة الظروف المواتية (درجة الحرارة والرطوبة وما إلى ذلك) لنمو وتكاثر مسببات الأمراض، ويتم الاحتفاظ بالوسائط في منظم الحرارة لفترة معينة.
بعد ذلك، يتم إجراء فحص مراقبة للمستعمرات المزروعة من الكائنات الحية الدقيقة، والتي تسمى "ثقافة الكائنات الحية الدقيقة". إذا لزم الأمر، يتم إجراء الفحص المجهري لمواد المستعمرة مع تلطيخ أولي بأصباغ خاصة.
ما الذي يتم تقييمه خلال فحص المتابعة؟ هذه هي شكل ولون وكثافة المستعمرات، وبعد بحث إضافي - القدرة على تحلل بعض المركبات غير العضوية والعضوية.
بعد ذلك، يتم حساب مسببات الأمراض. تأخذ الأبحاث الميكروبيولوجية في الاعتبار مفهومًا مثل وحدة تشكيل مستعمرة (CFU) - خلية ميكروبية واحدة قادرة على تكوين مستعمرة، أو مستعمرة مرئية من الميكروبات. باستخدام CFU، من الممكن تحديد تركيز أو عدد الكائنات الحية الدقيقة في عينة الاختبار. يتم إجراء عد CFU باستخدام طرق مختلفة: عد المستعمرات تحت المجهر، وأسلوب التخفيف التسلسلي، وأسلوب القطاع.
قواعد جمع المواد البيولوجية للثقافة البكتريولوجية
تعتمد جودة الثقافة البكتريولوجية التي يتم إجراؤها إلى حد كبير على المجموعة الصحيحة من المواد للبحث. عليك أن تتذكر قاعدة بسيطة: الأواني الزجاجية المعقمة والأدوات المعقمة!سيؤدي عدم الامتثال لهذه المتطلبات إلى التلوث (التلوث الخارجي للمادة بممثلي الجلد والأغشية المخاطية، والبيئة، التي ليس لها أهمية سريرية)، الأمر الذي سيجعل الدراسة بلا معنى تلقائيًا. لجمع المادة، يتم استخدام حاويات معقمة، يتم إعطاؤها للمريض في المختبر البكتريولوجي نفسه أثناء فحص العيادات الخارجية، لجمع البراز والبول. من بؤر الالتهاب المختلفة، يتم أخذ العينات فقط باستخدام أدوات معقمة (الملاعق والحلقات والملاعق) بواسطة عامل طبي مدرب خصيصًا (في العيادة، عادة ما تكون ممرضة في غرف الأمراض المعدية أو الفحص).
يتم جمع الدم والبول في أنابيب اختبار جافة، ويتم جمع المواد الأخرى في حاوية تحتوي على وسط مغذٍ للنقل.
قاعدة أخرى: جمع العينات قبل البدء في العلاج بالمضادات الحيوية!إذا تناولت المضادات الحيوية، فستكون النتيجة مشوهة بشكل كبير. إذا كنت قد تناولت مثل هذه الأدوية، توقف عن تناولها قبل 10 أيام من الدراسة وأبلغ طبيبك بحقيقة تناول أي أدوية مضادة للبكتيريا.
يجب ضمان التسليم السريع إلى المختبر!يمكن أن تموت الكائنات الحية الدقيقة عند الجفاف أو تغيير الحموضة. على سبيل المثال، يجب تسليم البراز دافئًا.
عند جمع البول:بعد إجراءات النظافة الصباحية، يتم أخذ جزء متوسط من بول الصباح بمقدار 10-15 مل في وعاء معقم. تسليم إلى المختبر في غضون ساعتين.
عند جمع المسحة من الحلق والأنف:لا يمكنك تنظيف أسنانك في الصباح، أو شطف فمك وأنفك بمحلول مطهر، أو الشرب أو الأكل.
جمع البرازيجب أن يتم ذلك في الصباح باستخدام ملعقة معقمة في وعاء معقم بحجم 15-30 جم. لا يجوز إدخال عينة البول. التسليم خلال 5 ساعات. لا يسمح بالتجميد أو التخزين طوال الليل. جمع البراز دون استخدام الحقن الشرجية أو المسهلات.
الدم لاستزراعيؤخذ قبل بدء العلاج بالمضادات الحيوية على خلفية ارتفاع درجة الحرارة في أنبوب معقم بكمية لا تقل عن 5 مل (للأطفال) و 15 مل على الأقل (للبالغين).
اللعابتم جمعها في الصباح على معدة فارغة في وعاء معقم أثناء نوبة السعال مع المخاط. قبل التجميع، قم بتنظيف أسنانك وشطف فمك بالماء المغلي. تسليم إلى المختبر في غضون 1 ساعة.
حليب الثديتم جمعها بعد إجراءات النظافة. تتم معالجة المنطقة المحيطة بالحليمة بمسحة مبللة بنسبة 70٪ من الكحول الإيثيلي. لا يتم استخدام أول 15 مل من الحليب المسحوب. ثم يتم التعبير عن 5 مل في وعاء معقم. تسليم في غضون 2 ساعة.
الإفرازات التناسلية:عند النساء، يتم إجراء التجميع في موعد لا يتجاوز 14 يومًا بعد الحيض، وفي موعد لا يتجاوز شهرًا واحدًا بعد إيقاف المضادات الحيوية، ويُنصح بعدم التبول لمدة ساعتين؛ أما عند الرجال فلا ينصح بالتبول لمدة 5-6 ساعات قبل أخذ العينة.
زمن الاستعداد للتلقيح البكتريولوجي
عند فحص المخاط من البلعوم الأنفي، ستكون النتيجة جاهزة خلال 5-7 أيام، وسيستغرق فحص البراز حوالي 4-7 أيام. عند فحص كشط الجهاز البولي التناسلي، فإن مدة الدراسة سوف تستغرق 7 أيام. البذر للنباتات العامة يستمر 4-7 أيام. أطول وقت يستغرقه تحضير الدم للعقم هو 10 أيام. ومع ذلك، يمكن إعطاء النتيجة الأولية المبكرة بعد 3 أيام.
نتيجة الفحص البكتريولوجي
نتيجة الثقافة البكتيرية هي تقييم نوعي (حقيقة وجود العامل الممرض في عينة الاختبار) وتقييم كمي (تركيز العامل الممرض في المادة).
يتم فك تشفير النتيجة الكمية بأبسط طريقة. هناك 4 درجات لنمو (التلوث) للكائنات الحية الدقيقة في المادة قيد الدراسة. تتميز الدرجة الأولى من النمو بنمو ضعيف فقط على وسط سائل، وعدم النمو على وسط صلب؛ للصف 2 - النمو في وسط كثيف يصل إلى 10 مستعمرات من نفس النوع؛ للصف 3 - من 10 إلى 100 مستعمرة؛ للصف الرابع - أكثر من 100 مستعمرة.
هذا مهم بالنسبة للنباتات الانتهازية، عند اكتشافها، لا تعتبر الدرجات 1 و 2 سببًا للمرض، بل تشير ببساطة إلى تلوث المادة المخصصة للبحث، وتشير الدرجات 3-4 إلى مسببات (سبب) المرض. إذا تم عزل النباتات المسببة للأمراض، فسيتم أخذ جميع المستعمرات المعزولة دون استثناء في الاعتبار، أي جميع الدرجات الأربع.
يتم تفسير نتيجة عد المستعمرات في CFU/ml على النحو التالي: 103/ml يعني الكشف عن مستعمرة واحدة؛ 104/مل - من 1 إلى 5 مستعمرات؛ 105/مل - نمو 5-15 مستعمرة؛ 106/مل – أكثر من 15.
النتيجة الكمية مهمة ليس فقط لتحديد درجة التلوث، ولكن أيضًا لمراقبة صحة العلاج.
يعد تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة المعزولة لدواء مضاد للبكتيريا معينًا عنصرًا مهمًا في الأبحاث البكتريولوجية. مجموعة الأدوية التي يكون العامل الممرض حساسًا لها أو مقاومًا لها هي مضاد حيوي .
حساسية العامل الممرض هي قابليته للدواء، أي أن المضاد الحيوي سيؤثر على نمو وتكاثر الميكروب. المقاومة هي مقاومة العامل الممرض لدواء معين، أي أن الدواء المضاد للبكتيريا لن يعمل.
يتم إصدار مخطط المضادات الحيوية في وحدات قياس معينة - الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC).
طبيب الأمراض المعدية N. I. بيكوفا
للحصول على نتيجة موثوقة، يجب إجراء التحليل بعد أسبوعين على الأقل من آخر جرعة من المضادات الحيوية و (أو) الأدوية المضادة للبكتيريا.
- التقطيع من الإحليل يوصى بإجراء الاختبار بعد ساعتين من آخر عملية تبول البلعوم والبلعوم الأنفي - على معدة فارغة (4-5 ساعات بعد الوجبة الأخيرة، في هذه الحالة من الضروري استبعاد تنظيف الأسنان بالفرشاة وشطف الفم)، أما بالنسبة للمواضع الأخرى فلا يلزم إعداد خاص.
- البول. موضوع الدراسة هو جزء متوسط من البول الذي يتم إطلاقه بحرية، بكمية 3-5 مل في حاوية بلاستيكية معقمة يمكن التخلص منها (يمكن الحصول على الحاوية في مكتب الاستقبال) بعد مرحاض شامل للأعضاء التناسلية الخارجية دون استخدام المطهرات . وقت التسليم إلى المختبر في درجة حرارة الغرفة هو 1-2 ساعات، عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية – 5-6 ساعات.
- الحيوانات المنوية بالنسبة للأبحاث البكتريولوجية، يتم جمعها في حاوية بلاستيكية معقمة يمكن التخلص منها ذات رقبة واسعة عن طريق الاستمناء (يمكن الحصول على الحاوية في مكتب الاستقبال). وقت تسليم المادة إلى المختبر في درجة حرارة الغرفة هو 1-2 ساعة.
- اللعاب وينصح بتجميعه في الصباح، على معدة فارغة بعد تعقيم تجويف الفم، في وعاء بلاستيكي معقم. وقت تسليم المادة إلى المختبر في درجة حرارة الغرفة هو 1-2 ساعات، عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية - 5-6 ساعات.
- سور إفراز البروستاتا يتم إجراؤه بواسطة طبيب مسالك بولية بعد التدليك الأولي للبروستاتا (يتم إجراء هذا التلاعب فقط في المكتب المركزي). قبل جمع إفرازات البروستاتا، يوصى بالامتناع عن ممارسة الجنس لمدة يومين على الأقل.
- البحوث البكتريولوجية حليب الثدي . يتم جمع حليب الثدي فقط قبل إرضاع الطفل أو بعد ساعتين من الرضاعة الطبيعية. تقوم المريضة التي تم فحصها بغسل الثديين الأيسر والأيمن بالماء الدافئ والصابون وتجفيفهما بمنشفة نظيفة. عالجي سطح الحلمات وأطراف الأصابع بقطعة من القطن المبللة باعتدال بنسبة 70٪ من الكحول الإيثيلي. يتم التخلص من الجزء الأول من حليب الثدي، حوالي 0.5 مل. بعد ذلك، دون لمس الحلمة بيديها، تضغط المرأة على 0.5 - 1 مل من الحليب من كل غدة في حاوية معقمة منفصلة (يمكن الحصول على الحاويات في مكتب الاستقبال). وقت التسليم إلى المختبر في درجة حرارة الغرفة هو 1-2 ساعات، عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية – 5-6 ساعات.
- سياج مع السائل الزليلي للفحص البكتريولوجي يتم إجراؤه بواسطة طبيب في حاوية بلاستيكية معقمة (يمكن الحصول على الحاوية من مكتب الاستقبال). لا يتم تنفيذ هذا الإجراء في بيئة المختبر. وقت تسليم المادة إلى المختبر في درجة حرارة الغرفة هو 1-2 ساعات، عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية - 5-6 ساعات.
- سور تفريغ الجرح يتم إجراء الفحص البكتريولوجي من قبل الطبيب، في حاوية يمكن التخلص منها مع وسط أميس (يمكن الحصول على الحاوية في مكتب الاستقبال). وقت تسليم المادة إلى المختبر في درجة حرارة الغرفة هو في غضون 6 ساعات، عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية - ما يصل إلى يومين.
- الصفراء بالنسبة للأبحاث البكتريولوجية، يتم جمعها أثناء الفحص، بشكل منفصل، في الأجزاء A وB وC في ثلاثة أنابيب معقمة، أو أثناء الجراحة باستخدام حقنة في أنبوب واحد، مع مراعاة قواعد التعقيم (لا يتم تنفيذ هذا الإجراء في المختبر). وقت تسليم المادة إلى المختبر في درجة حرارة الغرفة هو 1-2 ساعات، عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية - 5-6 ساعات.
تعد الدراسات البكتريولوجية إحدى الطرق الأكثر شيوعًا لاختبار مجموعة متنوعة من السوائل البيولوجية. إذا كان المقصود زراعة الدم، فنحن نتحدث عن اختبار يساعد في التعرف على الالتهابات البكتيرية في جسم الإنسان. مطلوب خزان الثقافة عندما لا تتمكن اختبارات الدم الروتينية من تحديد وجود تجرثم الدم. يتضمن خزان البذر أخذ المواد ووضعها في وسط غذائي يحتوي على مكونات تسمح للبكتيريا بالتكاثر بسرعة كبيرة.
يتضمن اختبار الدم البكتريولوجي زراعة أولية للثقافات في وسط غذائي. ولذلك يسمي الأطباء مثل هذه الاختبارات بالدراسات الثقافية. وعندما تبدأ البكتيريا في النمو بشكل نشط بعد عدة أيام، يتم إرسال العينة الناتجة للفحص المجهري. بمجرد أن تنمو المزارع بشكل كافٍ، لم يعد من الصعب تحديد البيلة الجرثومية. ومع ذلك، هذا ليس كل التحليل. في هذه الحالة، يتم إعطاء تقييم أولي فقط. لتحديد البكتيريا بشكل أكثر دقة، يتم تنفيذ الخطوة التالية. هذا عبارة عن خزان لتلقيح عينات الاستزراع السائل في وسط كثيف في طبق بيتري. يساعد هذا الاختبار في تحديد المستعمرات البكتيرية المتنامية. ويمكن الآن إجراء الاختبارات الكيميائية باستخدام عيناتها، مما سيسمح بتحديد أكثر دقة للنوع النهائي للكائنات الحية الدقيقة.
كل هذه المراحل تحضيرية لاختبار حساسية الأنواع البكتيرية لمختلف أنواع المضادات الحيوية. وهذا مطلوب للعثور على الدواء الأنسب لمكافحة العدوى.
عند إجراء فحص الدم البكتريولوجي، يمكنك الكشف عن:
- المكورات العنقودية.
- العقديات.
- البكتيريا المعوية.
- فطريات الخميرة.
اختبارات الدم للعدوى البكتيرية إلزامية للمرضى الذين يعانون من انخفاض المناعة. على سبيل المثال، غالبًا ما توجد بكتيريا السل لدى الأشخاص المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية. مثل هذا الفحص يساعد على القضاء على النتائج غير الصحيحة.
في الأمراض المعدية، تتاح للبكتيريا والكائنات الحية الدقيقة الفرصة لاختراق مجرى الدم والدخول إلى أجهزة الجسم الأخرى الموجودة بالقرب من المصدر نفسه. إذا أظهر اختبار ثقافة الدم نتيجة إيجابية، فهذا يعني أن العدوى قد تقدمت بالفعل. قد يكون ذلك مصحوبًا بارتفاع في درجة الحرارة وزيادة في خلايا الدم البيضاء وانقطاع في وظيفة القلب.
مميزات التحليل
طريقة البحث البكتريولوجي، مثل أي اختبار آخر، لها إيجابيات وسلبيات. ومن بين المزايا الخصوصية العالية للطريقة. هذا يتجنب ردود الفعل الخاطئة. أي سائل بيولوجي مناسب للبحث. يمكن إجراء ثقافة اللطاخة واختبار البول واختبار الدم وما إلى ذلك. الهدف العلاجي هو تحديد حساسية الميكروب المحدد لعامل علاجي معين. يتيح لك ذلك تدمير الكائنات الحية الدقيقة بسرعة دون إضاعة الوقت في العلاج غير الضروري.
وبطبيعة الحال، هناك بعض السلبيات. من بينها يمكن الإشارة إلى أن البذر البكتيري يستغرق وقتًا حتى يكتمل. عادة، يتم الاحتفاظ بالمادة قيد الدراسة في المختبر لمدة أسبوع على الأقل. هناك متطلبات جدية لجمع المواد، ومن المهم اتباع كل قاعدة لجمع المواد للبحوث البكتريولوجية. وبالإضافة إلى ذلك، يجب أن يكون لدى العاملين في المختبر مؤهلات خاصة.
عادة، يتم الحصول على نتائج الدراسة البكتريولوجية من عينات من أي سوائل بيولوجية بشرية: من المخاط من البلعوم الأنفي إلى السائل النخاعي. ثقافة الدم، مثل أي سائل آخر، لا تتطلب تحضيرا خاصا للتحليل. لمدة يومين أو ثلاثة أيام ينصح بالتخلي عن الأطعمة الدهنية والمقلية وعدم شرب الكحول. إذا كنت تتبرع بالدم، فيجب أن تتناول وجبتك الأخيرة قبل 12 ساعة على الأقل. تسمى ميزة الولادة هذه بشكل صارم على معدة فارغة. يمنع التدخين قبل عدة ساعات من الاختبار.
يتم أخذ الدم للثقافة، عندما يتعلق الأمر بالعقم، عدة مرات في فترة زمنية معينة. ويرجع ذلك إلى حقيقة أنه ليس من الممكن دائمًا تحقيق تلوث الوسط الغذائي من عينة واحدة، لذلك لا تعتبر عينة واحدة فعالة. لا يمكن القول بأن كائنًا حيًا دقيقًا معينًا كان هو المسبب لعدوى معينة إلا بعد إجراء دراسة تسلسلية مرتين على الأقل. ونتيجة للاختبار المتكرر، ينبغي تحديد البكتيريا المشتبه فيها. من الممكن إجراء اختبار متزامن ليس فقط للدم، ولكن أيضًا للسوائل البيولوجية الأخرى.
يجب جمع الدم عند أعلى درجة حرارة ممكنة. ومع ذلك، فإن العلاج بالمضادات الحيوية الأولية قد يؤدي إلى طمس النتائج. كملاذ أخير، يجب أن تمر 24 ساعة على الأقل منذ آخر جرعة مضاد حيوي. يتم أخذ عينات الدم في الصباح.
بعد الحصاد، يتم إجراء البذر في وسط غذائي مناسب لنمو البكتيريا. يتم الاحتفاظ بهذه العينات عند درجة حرارة 37-38 درجة لعدة أيام.
حاليا، يتم تنفيذ نوعين من البذر. نحن نتحدث عن الثقافة لتحديد الحساسية لطيف المضادات الحيوية الرئيسية والثقافة لتحديد الحساسية لمجموعة واسعة من الأدوية. عادة ما يستغرق الأمر ثلاثة أيام على الأقل للحصول على النتائج الأولى. في بعض الأحيان تستمر الدراسة لمدة تصل إلى أسبوعين.
عدوى فيروسية
عندما يدخل الفيروس إلى الجسم، يمكن تشخيص وجوده أو غيابه باستخدام فحص الدم العام. عادة، حتى المريض نفسه يمكنه تحديد وجود العدوى دون أي مشاكل، بعد أن تلقى نتائج الاختبار بين يديه. ومع ذلك، هذا لا يعني أنه يجب عليك استبعاد التشاور مع أخصائي.
لتحديد ما إذا كانت العدوى ناجمة عن فيروس أو بكتيريا، تحتاج إلى قراءة البيانات التي تم الحصول عليها بعناية. والحقيقة هي أن تكوين الدم الهيكلي يتغير بشكل مختلف، اعتمادا على ما إذا كان سبب العدوى هو فيروس أو بكتيريا.
إذا كان سبب اعتلال الصحة هو فيروس، فإن الكريات البيض ستكون طبيعية أو حتى أقل قليلاً، وفي الحالات النادرة هناك زيادة طفيفة. يتم تمثيل الخلايا الليمفاوية فوق المعدل الطبيعي، وكذلك الوحيدات. للفيروس تأثير مثبط على العدلات فيقل عددها. عادةً ما يظل معدل سرعة الترسيب (ESR) طبيعيًا أو يزيد بشكل طفيف جدًا.
حتى لو كان كل ما تم وصفه يتزامن مع تحليلك، فمن المهم أن تأخذ في الاعتبار الأعراض التي تطورت لديك. العدوى الفيروسية لها فترة حضانة أقصر. عادة لا تتجاوز خمسة أيام. في الوقت نفسه، ينبغي استبعاد إجراء تشخيص مستقل، لأنه في بعض الأحيان يحدث مظهر من مظاهر البكتيريا على خلفية تطور الفيروس، ولن يواجه مشكلة تحديد هذه المسببات سوى أخصائي.
عينات مختلفة
عند جمع البول للفحص البكتريولوجي يفترض جمع بول الصباح بحصته المتوسطة. يتم إجراء مرحاض الأعضاء التناسلية الخارجية أولاً. يتم إجراء التجميع في وعاء معقم بسعة 10-15 مل. ويجب تسليم الاختبار إلى المختبر خلال مدة لا تزيد عن ساعتين.
إذا كان عليك فحص مسحة من الحلق والأنف فيمنع في الصباح تنظيف أسنانك أو شطف فمك وأنفك بمحلول مطهر. يحظر تناول الطعام والماء. إذا كان من الضروري إجراء ثقافة بكتيرية للبراز، فسيتم جمع البراز من براز الصباح باستخدام ملعقة معقمة في وعاء معقم، ويجب أن يكون حجم التحليل 15-30 جرامًا. من المهم عدم دخول أي بول إلى العينة.
يجب أن يتم تسليم الاختبار في غضون خمس ساعات. يمنع تخزين الاختبار طوال الليل أو تجميده. يجب أيضًا استبعاد جمع البراز باستخدام حقنة شرجية وملين.
إذا كنت بحاجة إلى فحص البلغم، فسيتم إجراء التجميع في الصباح على معدة فارغة في حاوية معقمة أثناء هجوم السعال مع المخاط. قبل التجميع يجوز تنظيف أسنانك بالفرشاة، ولكن يجب استخدام الماء المغلي فقط للشطف. يتم تسليم التحليل إلى المختبر خلال ساعة.
يتم جمع حليب الثدي بعد إجراءات النظافة الأولية. يجب معالجة المنطقة القريبة من الحلمات بمسحة مبللة بنسبة 70 بالمائة من الكحول الإيثيلي. لا يمكن استخدام أول 15 مل للتبرع. يتم صب 5 مل من الجزء المتوسط. يجب أن يتم تسليم التحليل خلال ساعتين.
إذا تم إجراء تحليل للإفرازات التناسلية، فإن هناك حظرًا على إجراء الاختبارات أثناء الحيض بالنسبة للنساء، ويجب أن يمر أسبوع على الأقل بعد ذلك. إذا تم تنفيذ دورة المضادات الحيوية مسبقًا، فيجب أن يمر شهر عند الانتهاء. يتم إجراء مرحاض الأعضاء التناسلية الخارجية أولاً. وينصح بعدم التبول لمدة ساعتين. وينصح الرجال بتمديد الوقت الذي لا يذهبون فيه إلى المرحاض إلى خمس ساعات.