Антинуклеарный фактор как сдавать. Лаборатория диагностики аутоиммунных заболеваний

Антинуклеарные антитела (АНА,ANA, антиядерные антитела, антинуклеарный фактор-АНФ)- метод НИФ на линии клеток HEp-2 с определением тип свечения. - показатель аутоиммунных заболеваний соединительной ткани. АНА представляет собой группу аутоантител к белкам и другим компонентам (включая ДНК), находящимся в ядрах клеток. Основные показания к применению: исключение диагноза - системная красная волчанка (считается, что АНА появляются в 90% случаев СКВ, иными словами, отрицательный результат с вероятностью около 90% исключает диагноз СКВ), дифференциальная диагностика системных коллагенозов (системная красная волчанка, склеродермия, узелковый периартериит, дерматомиозит), хронический активный гепатит.

К настоящему времени описано более 200 разновидностей АНА, направленных против нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеоротеинов, белков ядрышек и центромер. При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани. Под термином «антинуклеарный фактор» понимают тест для выявления антинуклеарных антител с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции.

Одним из способов выявления антинуклеарного фактора в крови (антинуклеарных антител) является метод непрямой иммунофлюоресценции путем нанесения сыворотки пациента на клетки тканей перевиваемой линии человеческих клеток HEp-2 (клетки эпителиальной карциномы гортани человека линии Hep-2, содержащие различные ядерные антигены), используя меченый конъюгат с человеческими антителами. В качестве субстратов могут применяться и другие человеческие клеточные линии, однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линий Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. Метод обнаружения АНФ был разработан Tan в 1982, применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2. Это клеточная линия, полученная из аденокарциномы гортани человека, представляет собой крупные полиплоидные неороговевающие плоские эпителиоциты, образующие монослой на стекле. Сыворотку больного инкубируются с тканевым субстратом, при этом антинуклеарные антитела из сыворотки больного (если они присутствуют) связываются с соответствующими ядерным антигенами. Места связывания аутоантител детектируются с помощью античеловеческой антисыворотки, меченной флюоресцеином. Результаты реакции оцениваются микроскопией с помощью люминисцентного микроскопа и визуальной оценки характера свечения связавшихся антител. Среди преимуществ HEp-2 (при сравнении с криосрезами тканей животных) можно отметить высокую частоту деления клеток, позволяющую выявлять антитела к антигенам, экспрессирующимся только при делении клетки, и отсутствие клеточного матрикса ткани, затрудняющего визуализацию специфического свечения при сравнении с гистологическими срезами. При некоторых заболеваниях, например СКВ, системной склеродермии (системный склероз), некоторых инфекциях, иммунная система пациентов воспринимает ядра (белки ядер) клеток собственных тканей, как чужие, и продуцирует к ним антитела (антинуклеарные антитела - AHA). При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани.

При интерпретации данных следует учитывать, что спектр AHA включает в себя большую группу аутоантител к ДНК, нуклеопротеидам, гистонам, ядерным рибонуклеопротеидам и другим компонентам ядра. Таким образом, тест направлен на обнаружение различных антител к компонентам ядра и цитоплазмы, которые впервые были обнаружены при СКВ. В дальнейшем диагностические критерии теста были расширены в связи с обнаружением данных антител и при других заболевания соединительной ткани.

В скрининговых тестах для определения суммарных АНА обычно используется набор следующих антигенов, являющихся основными маркерами аутоиммунных заболеваний соединительной ткани: SS-A (Ro), SS-B (La), BNP70, Sm, RNP/Sm, J01, центромере B.
Основные антигены, применяющиеся в современных наборах для выявления ядерных антител класса IgG представлены следующим набором:

1. SS-A (Ro) - ядерные рибонуклеопротеины, (полипептиды). Антитела на них обнаруживаются, чаще, при системной склеродермии (60 % случаев), синдроме Шегрена (до 70% случаев) и при СКВ (до 30% случаев). Считается, что если данные антитела обнаруживаются в крови у беременных, то это является показателем риска увеличения возникновения неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденного ребенка (неонатальный люпус-синдром). Данные антитела матери проходят через плаценту и вызывают поражение плода, приводящие к гемолитической анемии и тромбоцитопении. К тяжелым последствиям относят поражение проводящей системы сердца ребенка (вплоть до постоянной кардиостимуляции). Отмечено, что у женщин у которых во время беременности был выявлен значительный титр данных антител, без явных клинических признаков, в дальнейшем развивается какое либо аутоиммунное заболевание, включая СКВ.
2. SS-B (La) - ядерные белки. Антитела к ним выявляются до 60% случаев при синдроме Шегрена и в 15% случаев при СКВ.
3. Scl-70 - белок-фермент, участвующий в обмене нуклеиновых кислот (топоизомераза-1). Антитела на данный белок наиболее специфичны при системной склеродермии (до 70% случаев).
4. Двухцепочечная ДНК - нативная ДНК. Антитела к ДНК наиболее специфичны при СКВ (до 80% случаев) и практически не определяются при ревматоидном артрите и склеродермии.
5. RNP/Sm - Комплекс антигенов RNP/Sm состоит из U1-рибонуклеопротеидов: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а также из Sm-полипептидов: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Антитела, образующиеся к этим антигенам наиболее специфичны для смешанных заболеваний соединительной ткани - т.е. при наличии симптомов склеродермии, ревматоидного артрита, СКВ, полимиозита (около 95% случаев) и в меньшей степени для СКВ (до 30% случаев).
6. Jo-1 - фермент - синтетаза аминоацилтранспортной РНК. Аутоантитела к данному белку являются диагностически значимыми при миозите (полимиозит/дерматомиозит).
7. CENP-B (Центромера) - для выявления Антицетромерных антител (Anti-Centromer B), с целью диагностики CREST-синдрома (данный синдром представляет собой совокупность кальциноза кожи, синдрома Рейно, нарушения моторики пищевода, склеродактилии, телеангиэктазии). CREST-синдром относится к варианту системной склеродермии (системный склероз). Данные антитела у больных свидетельствуют о благоприятном течении системной склеродермии и говорят о небольшом поражении внутренних органов.
8. Hep-2 клетки - клетки эпителиальной карциномы гортани человека линии Hep-2, содержащие много различных ядерных антигенов, включая антиген SS-A (Ro) и антигены центромеры. Антитела к Hep-2 обнаруживаются у больных с полимиозитом и дерматомиозитом до 90% случаев.
9. Митохондрии (PDC) - PDC - пируватдегидрогеназный комплекс. Большая группа антимитохондриальных антител представляют собой аутоантитела, которые образовались на ферменты пируватдегидрогеназного комплекса, располагающегося в митохондриях клеток и участвующего в окислительном декарбоксилировании пирувата.

Часто АНА обнаруживаются при билиарном циррозе печени.

AHA обычно не проникают в живые клетки и поэтому безвредны. Но иногда они образуют комплексы антиген-антитело, которые вызывают повреждение ткани (как, например, при СКВ поражение почек). В связи с вовлечением в патологический процесс многих органов диагностическое значение определения AHA невелико и результаты анализа лишь частично подтверждают клинические данные.

Помимо ревматических заболеваний, АНА обнаруживаются и при хроническом активном гепатите до 50% случаев. Появление (низкие титры) возможно при воспалительных заболеваниях, онкологии и вирусных инфекциях.

• Сравнительная частота выявления антинуклеарных антител.
  

  Заболевание и состояние	Частота выявления, %
  СКВ	95-100
  Люпоидный гепатит (новое название - хронический аутоиммунный гепатит)	70 -80%
  Синдром Фелти (Felty. 1924 г.) - ревматоидный артрит + спленомегалия + нейтропения + лейкопения + лимфоаденопатия.	95-100
  Системная склеродермия	75-80
  Лекарственный волчаночныи синдром (гидралазин, прокаинамид, изониазид)	Около 50
  Синдром Шегрена (Аутоиммунное системное поражение соединительной ткани. Характеризуется вовлечением в патологический процесс желез внешней секреции, главным образом слюнных и слезных, и хроническим прогрессирующим течением).	40-75
  Клинически здоровые родственники пациента с СКВ	Около 25
  Дискоидная красная волчанка	15-50
  Хронический ювенильный артрит, ревматоидный артрит	15-30
  Узелковый периартериит	15-25
  Дерматомиозит и полимиозит	10-30
  Ревматизм	Около 5
  Синдром Рейно	15-20

Давно я хотела написать про антинуклеарный фактор, но меня все время что-то останавливало. Почему? Ну потому что писать об этом — это пытаться объять необъятное, а краткость — явно не сестра моего таланта)))

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) -основной метод выявления антинуклеарных антител, который позволяет выявить большинство разновидностей антинуклеарных антител. Результатом определения АНФ является сам факт присутствия аутоантител, конечный титр разведения сыворотки и тип свечения ядра клетки.

АНФ-это не одно антитело!

Метод выявления АНФ был разработан Таном (1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (вы могли видеть это название в бланке анализа). Это клеточная линия получена из опухоли гортани человека (аденокарциномы). Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции (нРИФ) с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ.

В качестве субстратов могут применяться и другие клеточные линии (см карусель), однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линия Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. В англоязычной литературе иногда этот метод обозначают как FANA(Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).

Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории называют тесты, как основанные на методах иммуноферментного и иммунохимическом анализе, так и метод иммунофлюоресценции.
Антинуклеарный фактор (АНФ) — это антитела, обнаруженные иммунофлюресцентным методом.
Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленных другими классами иммуноглобулинов не имеет самостоятельного значения.

Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, которое обладает четкой флюоресценцией (свечением) ядер клеток. При использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80, в этом случае в норме титры АНФ менее 1:160. Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом х2 (1:160-1:320 — 1:640 — 1:1280 – 1:2560 – 1:5120 и т.д.).

На фоне обострения заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры могут снижаться до 1:160-1:320.

Балльная оценка результатов выявления («в крестах» +++) позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным❌

Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнять присутствие в сыворотке аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.

ТИПЫ СВЕЧЕНИЯ ЯДРА

Тип свечения ядра — одна из ключевых характеристик при выявлении АНФ. Каждая разновидность антинуклеарных антител (ANA) имеет конкретные мишени в клетке и отражает взаимодействие сыворотки больного с структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в крови, на основе чего, можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей антител, которые имеются в данной сыворотке. Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ.

Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, однако для клинической практики достаточно выделить основные. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с теми антигенами, которые распределены в ядре диффузно, т.е. входят в состав хроматина.

За счёт чего? Антитела против нуклеосом, ДНК, гистонов.

Когда? У больных с СКВ и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией.

Часто обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз СКВ.

Периферический тип свечения могут выделять отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно при СКВ, заболеваниях печени.

Гранулярный тип (крапчатый, сетчатый) является наиболее частым встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим.

За счёт чего? Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA.

Когда? СКВ, болезнь/синдром Шегрена, склеродермия, дерматомиозит/полимиозит, РА и ряда других болезней. Низкие титры (1:160-1:320) АНФ с гранулярным типом свечения могут быть в сыворотках крови у клинически здоровых лиц БЕЗ признаков системного заболевания.

Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз и требует дообследования для выявления RNPантигена.

Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции.

За счёт чего? PHК полимераза 1, NOR, U3RNP, PM/Scl.

Когда? Склеродермия и ее разновидности.

Центромерный тип отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST-синдроме (вариант склеродермии).

Цитоплазматический тип свечения.

За счёт чего? Антитела к тРНК–синтетазам, в частности Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: при аутоиммунном гепатите, при первичном билиарном циррозе.

Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения. Антитела к Scl-70 дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 — светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках.

Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70.

Иногда в низких разведениях преобладает один тип свечения, например гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА.

Метод исследования с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2, который позволяет обнаружить антинуклеарные антитела – один из маркеров системных заболеваний соединительной ткани.

Синонимы русские

АНФ, антиядерные антитела, антинуклеарные антитела (АНА).

Синонимы английские

Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).

Метод исследования

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.

Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.

При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.

При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.

Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.

Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).

Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.

Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.

Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.

Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.

Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.

У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.

В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
• Для дифференциальной диагностики ревматических болезней.
• Чтобы оценить эффективность терапии аутоиммунных заболеваний.
• Для наблюдения за течением системных заболеваний соединительной ткани.

Когда назначается исследование?

• При симптомах аутоиммунного заболевания (длительное повышении температуры, боли в суставах, усталость, потеря массы тела, изменение кожных покровов).
• При выявлении изменений, характерных для системных заболеваний соединительной ткани (повышение СОЭ, уровня С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов).

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательно.

Титр: 1:160.

Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:

• cистемная красная волчанка (в 95 % случаев),
• дерматомиозит/полимиозит,
• системная склеродермия (в 60-90 % случаев),
• синдром Шегрена (в 40-70 % случаев)
• смешанное заболевание соединительной ткани (синдром Шарпа),
• синдром Рейно,
• дискоидная волчанка,
• лекарственная волчанка,
• ревматоидный артрит,
• некротизирующий васкулит,
• инфекционный мононуклеоз,
• лейкемия,
• злокачественные новообразования (преимущественно лимфома),
• тяжелая миастения,
• инфекционный эндокардит,
• хронический аутоиммунный гепатит,
• первичный билиарный цирроз печени,
• туберкулез,
• пневмокониоз,
• интерстициальный фиброз легких.

Типы свечения

Что может влиять на результат?

• Ложноположительному результату способствует:

• • возраст старше 60-65 лет (в 10-37 % случаев);
  • применение лекарственных препаратов, которые могут привести к лекарственной волчанке (ацетазоламид, карбидопа, хлоротиазид, хлорпромазин, клофибрат, этосуксимид, соли золота, гризеофульвин, гидралазина, изониазида, соли лития, метилдопа, пероральные контрацептивы, пенициллин, фенилбутазон, фенитоин, примидон, прокаинамид, пропилурацил, хинидин, резерпин, стрептомицин, сульфаниламид, тетрациклин, тиазидные диуретики).

• Прием глюкокортикостероидов (преднизолон, дексаметазон, метипред) иногда приводит к ложноотрицательному результату.

Важные замечания

• В 5 % случаев СКВ возможен отрицательный результат данного анализа (АНФ-отрицательная СКВ). В таких ситуациях для уточнения диагноза необходимо определить антитела к SS-антигенам (Ro).
• Положительный результат теста не является абсолютным доказательством наличия аутоиммунного заболевания. У здоровых людей в 3-13 % случаев титр АНФ повышен и достигает 1:320.
• Результаты теста необходимо оценивать в комплексе с клиническими данными и другими лабораторными показателями.
• При положительном результате исследования рекомендовано определить специфичность АНА иммуноблотом.

• Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
• Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
• Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
• Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
• Антинуклеарные антитела (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENT-B, Jo-1, гистонов, нуклеосом, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: титр.

Интерпретация результатов

Результатом определения АНФ является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки, при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Высокие титры разведения сыворотки отражают высокую аффинность и концентрацию аутоантител.

Выявление высоких тиров (1/640 и выше) указывает на высокую вероятность системного ревматического заболевания или аутоиммунного заболевания печени и требует внимательного клинического, лабораторного и инструментального обследования. Отсутствие повышенных титров антинуклеарного фактора значительно снижает вероятность системных аутоиммунных заболеваний.

В низких титрах (до 1/160) антинуклеарный фактор может отмечаться у 1-2% здоровых лиц и родственников больных с системными заболеваниями. Частота положительных титров в популяции несколько увеличивается с возрастом. Низкие титры антинуклеарных антител могут встречаться при многих аутоиммунных, инфекционных и онкологических заболеваниях. Отсутствие высоких титров антинуклеарных антител значительно снижает вероятность системного ревматического процесса и может использоваться скорее для исключения, чем подтверждения диагноза.

Повышение титров АНФ в динамике указывает на обострение системного заболевания, так при СКВ титр коррелирует с тяжестью процесса и снижается при эффективной терапии.

Кроме титра сыворотки, при положительном результате анализа описывается тип свечения ядра. Он обусловлен широким спектром антител, которые находят свои мишени внутри клетки. Описано более 20 типов свечения, однако в клинической практике используется 8 из них:

Референсные значения: < 1:160

Иногда могут быть описаны 2 типа свечения, при котором один в низких титрах маскирует другой. При выявлении положительного результата АНФ необходимо постараться установить антигенные мишени антинуклеарных антител, с помощью тестов выявления антител к двуспиральной ДНК (№126) и антител к нуклеосомам (№956), иммуноблота антинуклеарных антител (№827), иммуноблота антител при склеродермии (№826), иммуноблота антител при полимиозите (№ 939) и определения антител к кардиолипину (№№ 967- 969, 997).

Антинуклеарный фактор

Антинуклеарный фактор – лабораторный анализ, направленный на определение различных видов специфических иммуноглобулинов к структурам клеточного ядра. Показатель АНФ повышается при системных заболеваниях соединительной ткани. Тест выполняется с целью их диагностики, дифференциации, контроля лечения, выявления обострений. Назначается при клинических и лабораторных признаках системной красной волчанки, склеродермии, синдрома Шарпа, Шегрена, ревматоидного артрита, воспалительной миопатии. Исследованию методом РНИФ подвергается сыворотка венозной крови. Нормальный показатель – титр не выше 1:160. Сроки подготовки данных теста – 8 рабочих дней.

В основе ревматических болезней лежит аутоиммунная реакция против структур ядра клетки – комплексов из протеинов и нуклеиновых кислот. Антигены образуются при программированной гибели эпителиоцитов и лимфоцитов. Ультрафиолетовые лучи, инфекционные агенты, лекарства ускоряют разрушение клеток, замедляют удаление апоптозных телец, провоцируют развитие аутоиммунных процессов. Антитела к структурам ядра представлены множеством видов, при исследовании антинуклеарного фактора выделяется около восьми. Преимуществом теста является высокая специфичность – определяются антитела, которые невозможно очистить для ИФА . Однако часть иммунных комплексов экстрагируется в плазму при выполнении РНИФ, поэтому существует вероятность ложноотрицательного результата.

Показания

Исследование антинуклеарного фактора показано при системных патологиях соединительной ткани. Основанием для назначения теста служат:

• Симптомы ревматического заболевания . Характерные проявления – лихорадка, усталость, слабость, снижение массы тела, мышечные и суставные боли , кожные высыпания. Тест используется для выявления и дифференциации СКВ , склеродермии , синдрома Шегрена , Шарпа, ревматоидного артрита , воспалительных миопатий .
• Результаты лабораторных тестов . Подозрение на ревматическую патологию возникает при повышении СОЭ , уровня С-реактивного белка и ЦИК . Тест назначается для подтверждения диагноза.
• Диагноз ревматической болезни . Анализ производится несколько раз в год (частота определяется индивидуально) с целью контроля течения патологии, после курса применения иммуносупрессоров – для оценки эффективности терапии.

Подготовка к анализу

Биоматериал для определения антинуклеарного фактора – венозная кровь. Процедура забора осуществляется утром. Правила подготовки следующие:

1. Последний прием пищи должен быть совершен не позже чем за 4 часа. Пить воду разрешено в любое время.
2. Алкоголь, физические нагрузки, эмоциональные переживания следует исключить за день до процедуры.
3. Применение лекарств необходимо обсудить с врачом. Некоторые препараты провоцируют производство антител, развитие лекарственной волчанки. На фоне приема глюкокортикостероидов возможно получение ложноотрицательных данных.
4. Инструментальные диагностические процедуры, сеансы физиолечения должны производиться после сдачи крови.
5. Курение запрещено в последние 30 минут перед процедурой.

В лаборатории из крови выделяют сыворотку. Определение в ней антиядерных АТ выполняется методом РНИФ с применением клеточной культуры НЕр-2. Титр оценивается по наибольшему разведению биоматериала, при котором обнаруживается свечение ядерных структур, вид иммуноглобулинов – по характеру флуоресценции. Сроки выполнения анализа – 6-8 дней.

Нормальные значения

В норме результат исследования антинуклеарного фактора отрицательный. Титр не выше 1:160 для взрослых и детей. При интерпретации итогового значения учитываются замечания:

• Низкие титры ANA уменьшают вероятность аутоиммунной патологии, но не исключают ее. При СКВ в 5% случаев результат отрицательный, производится тест на антитела к SS-антигенам.
• Получение нормального результата после курса иммуносупрессивной терапии подтверждает ее успешность.
• Отрицательный результат на фоне симптомов аутоиммунной патологии требует проведения дополнительных анализов (NCA , ANA методом ИФА).

Повышение показателя

Антиядерные АТ не обладают цитотоксическими свойствами, но после их связывания с антигенами образуются иммунные комплексы, запускающие процессы воспаления в сосудистых стенках. Они проявляются поражениями кожи, почечных клубочков, оболочек суставов, плевры. Развивается симптоматика, характерная для системных патологий. По типу свечения с минимальным разведением сыворотки определяются возможные заболевания:

• Гомогенный . Диффузная флуоресценция указывает на наличие АТ к ds ДНК , гистонам. Определяется при СКВ и лекарственной волчанке .
• Периферический . Тип свечения обусловлен расположением хроматина, выявляется при наличии Ig к компонентам ДНК, специфичным для СКВ.
• Гранулярный . Антигенами являются комплексы нуклеопротеинов. Свечение неспецифично, обнаруживается при многих ревматических болезнях. Высокий титр и крупногранулярная флуоресценция наиболее характерны для синдрома Шарпа .
• Нуклеарный . Отражает наличие специфических Ig к структурам ядрышка. Выявляет склеродермию и синдром Шегрена. Редко отмечается при эндокринопатиях, кожных патологиях, пересадке органов.
• Центромерный. Антигенами являются центромеры хромосом. Свечение подтверждает лимитированную склеродермию.
• Цитоплазматический . Провоцируется наличием антител к тРНК-синтетазе (Jo-1), рибосомам, органеллам. Позволяет определить воспалительные миопатии, аутоиммунные поражения печени.
• Митохондриальный. Антигенами являются компоненты пируватдекарбоксилазного комплекса. Свечение характерно для первичного билиарного цирроза .
• Точечный . Связан с циркуляцией АТ к нуклеопротеинам, ассоциируется с аутоиммунными поражениями печени.

Снижение показателя

Снижение показателя имеет прогностическую ценность при мониторинге системных заболеваний соединительной ткани. Уровень ANA коррелирует с активностью патологических процессов, поэтому уменьшение их концентрации – признак ремиссии, успешности терапии.

Лечение отклонений от нормы

Тест на антинуклеарный фактор позволяет выявить наличие антител к ядерным антигенам и определить их вид. Благодаря этому анализ широко применяется для дифференциальной диагностики ревматических болезней. За интерпретацией результата и назначением лечения необходимо обратиться к врачу – ревматологу , иммунологу, дерматовенерологу .