, диагностические препараты, применяемые для выявления аллергической реакции у лиц, инфицированных туберкулёзными бактериями. Впервые получен Р. Кохом. В СССР выпускают: жидкий туберкулин, или альттуберкулин Коха (АТК), - получают путём выпаривания жидкой среды, на которой выращивались бактерии туберкулёза; сухой очищенный туберкулин (ППД) - посредством добавления к фильтрату бактерий осаждающих белок химических веществ, с последующей очисткой; жидкий очищенный туберкулин (ППД-Л) - путём стандартных разведений сухого очищенного туберкулина. Применяют для ( реакция, Пирке реакция), посредством которых выявляют лиц, подлежащих прививкам против туберкулёза, как метод ранней диагностики и оценки течения туберкулёзного процесса. Для массовых обследований в СССР применяется только внутрикожная .

В ветеринарии туберкулин применяют для аллергической диагностики туберкулёза. Препарат вводят под кожу (поменяется редко), внутрикожно и в конъюнктавальный мешок. Положительно реагирующие животные (воспалительный отёк при внутрикожном введении и гнойный конъюнктивит при глазной пробе) считаются больными туберкулёзом.
Большая советская энциклопедия

Туберкулин в его классическом виде был изобретен в 1890 известным немецким врачом Робертом Кохом, открывшим и возбудитель туберкулеза - микобактерию, названную в его честь палочкой Коха. Вначале туберкулин представлял собой продукт распада микобактерий туберкулеза,которых лишали активности путём нагревания, и он содержал много примесей: остатки питательной среды, на которой выращивали бактерии, соли и другие вещества, влиявшие на чистоту реакции и затруднявшие оценку результата проб.
С конца 60-х годов ХХ-го столетия были разработаны более чистые препараты туберкулина, лишенные примесей, содержащие белковый компонент туберкулёзной палочки,так называемый PPD (Purified Protein Derivate – очищенный дериват белка). Во всех республиках бывшего Советского Союза и по сей день применяется полученный русской ученой М.А.Линниковой в 1965 году препарат ППД-Л- туберкулин, очищенный от белковых фракций питательной среды.

Современный препарат туберкулина для массовой туберкулинодиагностики представляет собой очищенный туберкулезный аллерген и в стандартном разведении содержит в 0,1 мл 2 ТЕ (туберкулиновые единицы). Он представляет из себя смесь фильтратов туберкулезных культур (человеческий и бычий вид), которые убиты нагреванием, осаждены трихлоруксусной кислотой, обработаны этиловым спиртом и наркозным эфиром, растворены в фосфатном буферном растворе (играет роль стабилизатора) и феноле (играет роль консерванта).

Действующим началом туберкулина является аллерген туберкулопротеин, вызывающий при внутрикожном введении у инфицированных или вакцинированных пациентов специфическую реакцию гиперчувствительности по замедленному типу, которая проявляется как местная реакция – гиперемия и инфильтраты (папулы).

Показания к применению туберкулина

Туберкулин предназначается для массовой туберкулинодиагностики населения, чтобы:
отобрать контингент для ревакцинации , и также перед первой вакцинацией детей возрастом от 2 месяцев и старше;
диагностировать , в том числе, чтобы выявить в ранней стадии начальные и локальные формы туберкулеза у маленьких детей и в подростковом возрасте;
определить инфицирование микобактериями туберкулеза.

Противопоказания к применению туберкулина

Согласно инструкции к Туберкулину, вакцинацию препаратом нельзя осуществлять при: распространенных кожных заболеваниях, эпилепсии, острых, хронических инфекционных и соматических заболеваниях в период обострения, аллергических состояниях (ревматизме в острой и подострой фазе, бронхиальной астме, идиосинкразии, которая имеет выраженные кожные проявления в период обострений). Пробу можно ставить через месяц после того, как исчезнут все клинические симптомы или сразу после того, как был снят карантин. Нельзя проводить в таких детских учреждениях, где есть карантинный срок по детским инфекциям. Профилактические прививки обладают способностью влиять на повышенную чувствительность к туберкулину. В связи с этим,туберкулинодиагностика должна быть запланирована до того, как будут проводиться профилактические прививки против разнообразных инфекций. В случае проведения профилактической прививки туберкулинодиагностика должна производиться не раньше, чем через месяц после нее. Чтобы выявить противопоказания, врач или медицинская сестра в день, когда ставится туберкулиновая проба, проводят осмотр и опрос лиц, подвергаемых пробе.

Побочные эффекты Туберкулина

Реакция на вводимый Туберкулин находится в прямой зависимости от того уровня специфической реактивности, на котором находится данный организм.
Согласно отзывам к Туберкулину у отдельных пациентов, которые имеют высокую степень гиперчувствительности по замедленному типу к туберкулину, местные реакции могут проходить совместно с лимфаденитами и лимфангоитами. Также иногда наблюдается общая реакция в виде общего недомогания, головных болей, повышенной температуры. Здоровым лицам, у которых реакция пробу

Туберкулин знаком почти всем. Практически каждому из нас в детском саду или школе хоть раз делали «пуговку». Этот препарат спас не одну человеческую жизнь от смертельно опасного недуга под названием туберкулез. Давайте разберемся, насколько он эффективный и безопасный. А также узнаем принцип действия, и какие есть аналоги туберкулинодиагностики, включая Диаскинтест.

Чтобы лучше понять, что такое Туберкулин, давайте слегка углубимся в историю его создания. Началось все с того, что в 1882 году мир узнал о существовании туберкулезной палочки, которая и является возбудителем тяжелейшего заболевания. Это произошло благодаря немецкому микробиологу Роберту Коху. В честь него бактерия и была названа «палочкой Коха». Спустя 8 лет всевозможных испытаний, в 1890 году он же изобрел Туберкулин, с помощью которого планировал бороться с болезнью. На деле все оказалось не совсем так, как было задумано. Лекарство оказалось не только безвредным, но и совершенно бездейственным.
К счастью, препаратом заинтересовался педиатр из Австрии Клеменс Пирке. После многочисленных исследований и наблюдений он заметил, что реакция здоровых людей отличается от той, которая проявлялась у заболевших. В 1907 году он официально заявил о том, что это своего рода катализатор, и может применяться в качестве диагностического средства.

Многие слышали о пробе Пирке, названной в честь выше упомянутого австрийца. Она делалась накожно, то есть капля вещества втиралась через небольшую царапину на коже. Привычный всем способ введения предложил уже французский медик Шарль Манту. Наблюдая за пациентами, он пришел к выводу, что подкожное введение дает более точный результат. Такой метод быстро был принят во всем мире, как более удобный и менее болезненный. Так в 1908 году появилась одноименная проба Манту. Со временем был изобретен аналог Диаскинтест с большей точностью определения в организме вирусной палочки.

Состав и форма выпуска

Основной состав туберкулина – это фильтрат неживых, человеческих и бычьих туберкулезных микробактерий, которые предварительно убиваются нагреванием. Остаются только продукты их жизнедеятельности. После этого они очищаются при помощи ультрафильтрации или других способов, и осаждаются трихлоруксусной кислотой. Затем обрабатываются этиловым спиртом и эфиром, который применяется для наркоза, и растворяются в стабилизирующей фосфатно-буферной жидкости. Напоследок в качестве консерванта добавляется фенол. Таким образом, получается основное действующее вещество – аллерген-туберкулопротеин. Он и вызывает реакцию при наличии в организме живого вируса после постановки Туберкулином или аналогом типа Диаскинтеста.

Препарат представляет собой прозрачный раствор для инъекций и расфасовывается в стеклянные ампулы объемом 0,6 мл, 1 мл или 3 мл.

Показания к применению

Препарат не является ни прививкой, ни лекарством. Он не лечит и не защищает. Его предназначение – это выявление опасного заболевания на начальной стадии, задолго до проявления видимых симптомов.

Ежегодная туберкулиновая проба проводится:

• детям с 2-х месяцев перед постановкой БЦЖ;
• перед ревакцинацией;
• для ранней диагностики туберкулеза.

Два раза в год:

• при контакте с больными;
• при отсутствии прививки от туберкулеза;
• при наличии заболеваний, снижающих иммунитет: сахарный диабет, ВИЧ, заболевания крови, при кортикостироидной терапии более 1 месяца, язвенные болезни, онкологические патологии и т. д.;
• детям из социальных групп риска.

А также при появлении симптомов, характерных для туберкулеза, с целью опровержения или подтверждения инфицирования. Делается это независимо от сроков и результатов предыдущей пробы.

Как действует туберкулин

Основу препарата составляют неживые туберкулезные микобактерии. Их жизнеспособность настолько слаба, что они просто не в состоянии спровоцировать инфицирование. При попадании под кожу раствор не сразу рассасывается, а остается какое-то время в одном месте. На него незамедлительно реагируют лимфоциты, которые находятся рядом в кровеносных сосудах. Это вызывает покраснение и уплотнение, которое называется папулой или инфильтратом. Если в организме есть туберкулезные микобактерии, значит, лимфоциты уже успели с ней «познакомиться». Увеличивается их количество, и они начинают более активно работать. При появлении новых элементов знакомого вируса они устремляются к ним и начинают атаковать. Поскольку все провокационные частички сконцентрированы в папуле, то реакция происходит именно в ней. От этого значительно увеличивается ее размер. Одним словом, происходит аллергия на Туберкулин.

Календарь проб

Туберкулин и его аналог Диаскинтест предназначены для ранней диагностики у детей наличия туберкулезной палочки. Первая проба ставится не раньше, чем ребенку исполнится 12 месяцев. До этого возраста иммунная система имеет свои особенности, которые сильно искажают результат. Исключение составляют малыши старше 2 месяцев, которым по каким-либо причинам нельзя было делать . В таком случае, их сначала обязательно проверяют на наличие в организме возбудителя, и только при отрицательной реакции проводят вакцинацию. Делается это для того, чтобы избежать введения дополнительной дозы возбудителей, которые могут сильно усугубить ситуацию.
Дальнейшая диагностика с помощью Туберкулина проводится раз в год до 15-16 лет. Тем детям, которые проживают в местности с неблагоприятной обстановкой по туберкулезу, или в семье либо в ближайшем окружении есть инфицированные, препарат вводится дважды в год, то есть каждые 6 месяцев, пока не пройдет угроза заражения. При наличии у ребенка туберкулеза, туберкулинодиагностика проводится 3-4 раза в год до полного исчезновения симптомов. Аналогичная схема действует и для Диаскинтеста.

Согласно инструкции по применению Туберкулина, правильное введение проводится следующим образом: предплечье визуально делится на три части и строго подкожно в центр средней части вводится необходимая доза. При этом сразу образуется водянистый бугорок, который в народе называется «пуговкой». Через 48-72 часа проверяют реакцию при помощи канцелярской линейки и, в зависимости от размера, делают выводы о наличии или отсутствии туберкулезной палочки.

Как правило, размеры папулы снимают прозрачной линейкой. Через нее четче видны края уплотнения.

Реакция на данный препарат бывает трех основных видов:

• отрицательная, при которой размер папулы до 1 мм или вовсе отсутствует;
• сомнительная – от 2 до 4 мм;
• положительная – свыше 5 мм.

Положительная реакция на Туберкулин, в свою очередь, делится на:

• слабоположительную (5-9 мм);
• среднюю (10-14 мм), которая проявляется у детей из группы риска и при контакте с больными с открытой формой туберкулеза;
• выраженную (15-16 мм);
• резко выраженную или гиперергическую (от 17 мм);
• визикулонекротическая, при которой наблюдается омертвление ткани и образование гнойничков.

Кроме того, существует ложноположительная реакция. Она относится к сомнительной и может возникать, если у ребенка есть аллергия на что-либо. Также ее вызывает любое недавно перенесенное инфекционное заболевание. В этих случаях рекомендуется наблюдение за состоянием ребенка, часто назначаются препараты для повышения иммунитета.

В некоторых случаях, особенно у ребенка, склонного к аллергии, может появиться общее недомогание, лимфадениты и лимфангоиты, зуд и боль в месте укола, головная боль, повышение температуры. При гиперчувствительности к препарату могут появиться пузырьки и некроз прилегающих тканей, а также анафилактический шок.

Как ухаживать за пробой

До момента снятия замеров место укола нельзя чесать, мазать кремом и тереть мочалкой во время купания. Мочить пробу можно, но стараться в эти дни купаться под душем. При этом, ее не нужно заклеивать пластырем или обматывать пленкой, как делали раньше наши мамы и бабушки. Вода никак не повлияет на результат. Это предубеждение осталось после Пирке, когда Туберкулин втирался в царапину на коже. Сейчас же место введения данного препарата либо его аналога Диаскинтеста закрывается своеобразной пробкой из свернувшейся капельки крови. Единственное, что не рекомендуется – это принимать ванну и, по возможности, воздержаться от купания в открытых водоемах и посещения бассейна.

Противопоказания

Процедуру не проводят в следующих случаях:

• инфекционный карантин в детском учреждении;
• проявление аллергии;
• обострение хронических или соматических заболеваний, а также 30 дней после исчезновения симптомов;
• эпилепсия;
• индивидуальная непереносимость препарата;
• кожные болезни;
• бронхиальная астма;

Постановка пробы согласовывается с , поскольку после введения профилактической инъекции должно пройти не менее 30 дней. Перед введением Туберкулина или его аналога Диаскинтеста желательно не употреблять новые продукты, чтобы исключить возможность появления аллергической реакции и, соответственно, искаженных результатов. По этой же причине, за пару дней до процедуры постараться не давать ребенку те продукты, которые заведомо могут оказать негативное воздействие. Особенно это относится к детям-аллергикам.

Альтернатива Туберкулину

Одним из более информативных аналогов Туберкулину является Диаскинтест, о котором уже не раз упоминалось выше. Он тоже вводится подкожно и представляет собой такую же бесцветную жидкость. В его состав входят искусственно созданные белки ESAT6/CFP10. Именно они реагируют на наличие в организме палочки Коха, выявляют вирус с точностью до 90% и практически полностью исключают ложноположительную реакцию.

Диаскинтест применяется для диагностики заболевания во всех возрастных категориях, начиная с 1 года.

Скрин-тест с его помощью проводится в качестве аналога Туберкулину, если есть индивидуальная непереносимость, а также в следующих случаях:

• если пациент входит в группу риска;
• при положительной реакции на проведенную пробу Манту, чтобы подтвердить или опровергнуть наличие вируса;
• для контроля и корректировки лечения от туберкулеза;
• при прямом контакте с носителем вируса.

Диаскинтест не применяется для отбора пациентов для первичной постановки БЦЖ или ревакцинации. Он с осторожностью, только по медицинским показателям, вводится беременным, и полностью разрешен в период лактации. Другими противопоказаниями служат те же факторы, что и при Туберкулине.

Кроме Диаскинтеста, высокоточным аналогом пробы для диагностики туберкулеза служит полимерная цепная реакция, которая позволяет обнаружить микобактерии в любом биологическом материале. Такой способ мало распространен из-за дороговизны и технической сложности. Еще один аналог – это иммуноферментный анализ, при котором исследуется венозная кровь. Этот метод малоэффективен в районах, где широко распространена туберкулезная инфекция.

Видео

Чем раньше выявлено заболевание, тем легче оно поддается лечению. Это касается и такого опасного и смертельного недуга, как туберкулез. Благодаря туберкулинодиагностике и Диаскинтесту, стало возможным обнаружить его на самых ранних сроках и приступить к лечению. Смотрите на видео принцип действия диагностического препарата, и почему так важно не отказываться от этой процедуры.

Вы знакомы с Туберкулином или его аналогом Диаскинтестом не понаслышке? Тогда ждем ваши комментарии, из которых наши посетители смогут почерпнуть для себя много полезной информации.

Состав: сухой очищенный белковый дериват туберкулина (PPD). Стандарт очищенного туберкулина содержит в 1 мл разведенного препарата 50000 международных, или туберкулиновых, единиц (ТЕ).

Назначение: для диагностики туберкулеза.

Способ применения: внутрикожно в область средней трети внутренней поверхности предплечья в объеме 0,1 мл. Учет пробы производят через 42 часа. Реакция считается положительной при наличии инфильтрата не менее 5 мм в диаметре.

Условия хранения: в темном сухом месте при +2° - +8°С.

Срок годности: 5 лет.

Очищенный туберкулин в стандартном разведении

Состав: раствор очищенного туберкулина в стандартном разведении с активностью 2,5 или 10 ТЕ в 0,1 мл с фенолом в качестве консерванта и твином - 80 в качестве детергента, обеспечивающего стабилизацию биологической активности препарата.

Назначение: для диагностики туберкулеза.

Способ применения: внутрикожно (для пробы Манту).

Условия хранения: в сухом месте при 0º - +4ºС.

Срок годности: 1 год.

Лептоспирозная вакцина концентрированная инактивированная жидкая

Состав: взвесь инактивированных концентрированных культур лептоспир четырех серологических групп: L. interrogans Icterohaemorraghiae copenhageni, L. interrogans Grippotyphosa grippotyphosa, L. interrogans Pomona mozdoc, L. interrogans Sejroe sejroe

Назначение: для профилактики лептоспирозов.

Способ применения: Вакцину вводят подкожно в область нижнего угла лопатки. Перед введением ампулу с препаратом тщательно встряхивают. Вакцинацию проводят однократно дозой 0,5 мл. Ревакцинацию проводят через 1 год однократно дозой 0,5 мл.

Условия хранения:

Срок годности: 1,5 года.

Иммуноглобулин противолептоспирозный

Состав: гамма-глобулиновая фракция из крови гипериммунизированных волов, содержащей антитела к лептоспирам (гриппотифоза, помона, иктерогеморрагический и др., всего 6 серогрупп).

Назначение: для лечения лептоспироза с 8-летнего возраста.

Способ применения: внутримышечно в дозе от 3 до 10 мл в зависимости от возраста и тяжести заболевания после предварительной десенсибилизации организма подкожным введением 0,1 мл разведенного 1:10, а затем 0,1 мл неразведенного препарата. В последующие дни вводят по 5-10 мл. Курс лечения 3 дня.

Условия хранения: в темном сухом месте при +2º - +8ºС.

Срок годности: 2 года.

Аллерген токсоплазмин

Состав: антигенный комплекс, полученный из перитонеального экссудата белых мышей, зараженных токсоплазмами.

Назначение: для диагностики токсоплазмоза.

Способ применения: строго внутрикожно в область латеральной стороны плеча в дозе 0,1 мл; на 5-7 дм дистальнее ставят контроль с физиологическим раствором. Учет реакции производят через 24 часа, через 38 часов в положительном случае интенсивность ее не уменьшается. При наличии гиперемии и инфильтрата более 20 мм в диаметре – реакция резко положительная (++++), 15-20 мм - положительная (+++), 10-14 мм - слабо положительная (++), при диаметре менее 10 мм - реакция отрицательная. При положительных реакциях местные изменения на коже сохраняются 3-5 дней.

Условия хранения: в темном сухом месте при +4º - +8ºС.

Срок годности: 1 год.

БАКТЕРИЙНЫЕ ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ

Содержимое (Table of Contents)

ФС.3.3.1.0023.15 Туберкулин очищенный (ППД) (аллерген туберкулезный очищенный)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Туберкулин очищенный (ППД) ФС.3.3.1.0023.15

(аллерген туберкулезный очищенный) Взамен ГФ Х, ст. 705,

ФС 42-3302-96,

ФС 42-3303-96

Настоящая фармакопейная статья распространяется на туберкулин очищенный (аллерген туберкулезный очищенный), который представляет собой очищенный туберкулопротеин ППД (PPD — purified protein derivative ), полученный из инактивированных нагреванием фильтратов культур микобактерий туберкулеза (МБТ) человеческого и бычьего типов, очищенных ультрафильтрацией или другим адекватным методом от бактериальных клеток, с последующим осаждением трихлоруксусной кислотой (ТХУ). Внутрикожное введение туберкулина (проба Манту) выявляет наличие гиперчувствительности замедленного типа, которая является следствием сенсибилизации организма при вакцинации БЦЖ или заражении микобактериями туберкулеза. Препарат предназначен для диагностики туберкулеза, определения инфицированности населения микобактериями туберкулеза и отбора контингентов для вакцинации и ревакцинации против туберкулеза.

ПРОИЗВОДСТВО

Работа с микобактериями должна проводиться в помещениях, оборудованных автономной приточно-вытяжной вентиляцией, изолированных от помещений, где наличие микобактерий не допускается. Питательные среды перед посевом микобактерий должны быть проверены на стерильность. Выросшие на поверхности жидкой синтетической среды в виде складчатых пленок культуры микобактерий инактивируют автоклавированием при температуре 121 °С в течение не менее 30 мин или текучим паром при температуре 100 °С в течение 1 ч, фильтруют и концентрируют ультрафильтрацией.

Осаждение туберкулопротеина проводят 50 % раствором ТХУ; осадок отмывают убывающими концентрациями ТХУ, обрабатывают спиртом и эфиром, сушат, проверяют на стерильность и подлинность. После получения положительных результатов сводят в единую серию порошка-полуфабриката (субстанцию). Последующее сведение таких серий в единую серию субстанции является одним из методов получения стандартного препарата длительного срока хранения (20 и более лет). Субстанцию используют для производства туберкулина очищенного в стандартном разведении (2 ТЕ в 0,1 мл), предназначенного для массовой туберкулинодиагностики, или туберкулина очищенного, лиофилизата, предназначенного для индивидуальной туберкулинодиагностики (в ампуле 50000 ТЕ).

Предварительно серию субстанции тестируют на стерильность, отсутствие сенсибилизирующих свойств, специфическую безопасность (отсутствие живых микобактерий туберкулеза), специфическую активность – определение дозы-навески, содержащей 50000 ТЕ. Специфическую активность туберкулинов выражают в туберкулиновых единицах (ТЕ), эквивалентных международным туберкулиновым единицам (TU).

Емкость со смесью порошков (субстанцией) хранят в эксикаторе в темном сухом месте. Каждые 5 лет субстанция подлежит повторному испытанию на стерильность и специфическую активность на животных (подтверждение дозы-навески).

ИСПЫТАНИЯ СУБСТАНЦИИ

Стерильность

Субстанция должна быть стерильной. Субстанцию растворяют в 0,9 % растворе натрия хлорида из расчета 1 мг в 1 мл. Определение проводят в соответствии с .

Содержание белка

Должно быть не ниже 75 %. Определение проводят колориметрическим методом в соответствии с ОФС «Определение общего азота с реактивом Несслера в иммунобиологических лекарственных препаратах».

Специфическая активность

Установление дозы-навески субстанции ППД, содержащей 50000 ТЕ . Определение проводят на 18 сенсибилизированных морских свинках путем сопоставления активности разведений навесок порошка (субстанции) с активностью стандартного образца (СО) ППД (СО специфической биологической активности очищенного туберкулина). Сенсибилизируют животных внутрикожным введением в область живота (в 2 – 4 места) вакцины БЦЖ или убитых нагреванием микобактерий туберкулеза в неполном адьюванте Фрейнда (0,5 – 1 мг микобактерий на 1 животное).

Три навески исследуемой субстанции ППД, массой не менее 50 мг каждая, растворяют в фосфатном буферном растворе, рН (7,4 ± 0,05) таким образом, чтобы в 1 мл субстанции ППД содержалось на 20 % ниже и выше дозы навески СО ППД (получают 3 основных раствора). Сравнивают специфическую активность основного раствора с СО ППД, проводя испытание на 6 сенсибилизированных морских свинках. Для этого из основного раствора готовят разведения 1:40; 1:200 и 1:1000 и титруют относительно 5; 25 и 125 ТЕ СО, вводя внутрикожно по 0,1 мл каждого разведения сенсибилизированным морским свинкам в группе по методу случайной выборки (например, метод латинских квадратов). Ответные реакции учитывают через 24 ч. Статистический анализ основан на том, что зависимость lg «доза – эффект» имеет линейный характер. Вычисляют средний угол наклона линий и подсчитывают логарифм относительной активности (lg R) — расстояние между параллельными линиями зависимости доза – эффект. Относительная активность (R) должна быть равна (1,0 ± 0,2) при доверительных границах в пределах от 75 до 130 % (Р = 0,95). За доверительные границы принимают ± 2 стандартные ошибки логарифма относительной активности. Если бóльшая испытуемая навеска имеет по сравнению с СО ППД меньшую величину, следует увеличить навески и провести титрование. Если на меньшую навеску реакции будут с большей величиной, по сравнению с СО ППД, то следует провести титрование, используя уменьшенные навески порошка испытуемой субстанции.

Специфическая безвредность

Отсутствие живых микобактерий туберкулеза определяют на морских свинках, содержащихся в условиях, исключающих их контаминацию живыми микобактериями туберкулеза. Раствор субстанции, содержащей 50000 ТЕ/мл в фосфатном буфере без консерванта и стабилизатора, в объеме 10 мл центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин. Верхний слой надосадочной жидкости (около 8 мл) удаляют, осадок ресуспендируют и вводят внутрибрюшинно по 1 мл 2 морским свинкам массой 250 – 300 г, за которыми наблюдают 42 сут. Животные должны оставаться здоровыми. Через 42 сут морских свинок вскрывают и проводят макроскопическое, гистологическое и бактериологическое исследование внутренних органов (селезенки, легких, печени и лимфатических узлов). При макроскопическом и микроскопическом исследовании не должно быть обнаружено патологических признаков, характерных для туберкулезной инфекции. Для бактериологического (культурального) исследования тщательно гомогенизируют лимфатические узлы (все вместе), селезенку, ¼ часть печени и одно легкое. Гомогенизаты обрабатывают в течение 10 мин 5 % раствором серной кислоты, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин, ресуспендируют в 0,9 % растворе натрия хлорида и засевают на яичную среду Левенштейна-Йенсена (не менее 5 пробирок для каждого органа). Посевы выдерживают в течение 45 сут при температуре 37 °С. Рост колоний микобактерий на поверхности среды должен отсутствовать.

Сенсибилизирующие свойства

Должны отсутствовать. Морским свинкам (3 особи) массой 300 – 350 г вводят внутрикожно трехкратно с интервалом 5 сут по 125 ТЕ в 0,1 мл разведения субстанции. Спустя 15 сут этим и 3 интактным морским свинкам вводят внутрикожно по 500 ТЕ в 0,1 мл испытуемой субстанции. Разведения 125 и 500 ТЕ готовят из основного раствора субстанции, используя 0,9 % раствор натрия хлорида. Ответную реакцию учитывают через 24 ч, измеряя 2 взаимно перпендикулярных диаметра эритемы. Реакции у первых 3 морских свинок не должны отличаться от реакций у контрольных животных (p > 05). Животных содержат в условиях, исключающих контаминацию микобактериями.

ИСПЫТАНИЕ ТУБЕРКУЛИНА

Описание

Туберкулин очищенный в стандартном разведении – бесцветная прозрачная жидкость без посторонних включений. Туберкулин очищенный (лиофилизат) – пористая масса или аморфный порошок серовато-белого или кремового цвета, который для проведения испытаний разводят в 1 мл прилагаемого растворителя.

Подлинность

Вызывает при внутрикожном введении морским свинкам, сенсибилизированным вакциной БЦЖ, 12 – 16-суточной культурой БЦЖ или убитыми Mycobacterium tuberculosis , положительные реакции (как описано в разделе «Специфическая активность»).

Прозрачность

Должен быть прозрачным. Определение проводят визуально в соответствии с .

Цветность

Должен быть бесцветным. Определение проводят визуально в соответствии с .

рН

От 7,35 до 7,45. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Стерильность

Должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с методом прямого посева или мембранной фильтрации.

Аномальная токсичност ь

Должен быть нетоксичным. Определение проводят в соответствии с . Вводят внутрибрюшинно 5 белым мышам массой 17 — 20 г тест-дозу в объеме 0,5 мл; покожно 2 морским свинкам массой 250 – 300 г тест-дозу в объеме 1 мл. Период наблюдения за животными составляет 7 сут.

Специфическая активность

Индекс специфической активности (I) туберкулина очищенного в стандартном разведении (отношение суммы реакций на испытуемый препарат к сумме реакций на СО ППД должен находиться в пределах от 0,95 до 1,05 при отсутствии достоверных различий между средними реакциями на стандартный и испытуемый образцы. Испытание проводят на 6 морских свинках, белокожих или альбиносах, массой (350 ± 50) г, сенсибилизированных, как описано выше, для определения дозы-навески субстанции. На каждом боку ставят по 4 пробы (отдельными шприцами) с 2 ТЕ в 0,1 мл испытуемой серии и 2 ТЕ СО ППД, чередуя предварительно закодированные по методу случайной выборки 8 шприцев с препаратами. Реакции регистрируют через 24 ч.

Относительная активность (R) очищенного туберкулина, лиофилизата, должна быть равна (1,0 ± 0,2) при доверительных границах в пределах от 75 до 130 % (Р = 0,95). Из основного разведения испытуемой серии, содержащего 50000 ТЕ в 1 мл (в ампулу добавляют 1 мл прилагаемого растворителя), готовят 3 разведения: 5; 25 и 125 ТЕ в 0,1 мл, используя для этой цели 0,9 % раствор натрия хлорида. Определение проводят по разделу «Специфическая активность — определение дозы навески субстанции», используя 5; 25 и 125 ТЕ в 0,1 мл СО ППД.

Если результат испытания выходит за допустимые пределы, испытание повторяют. Результаты первого и повторного испытаний усредняют.

Производственные штаммы

Для приготовления применяют туберкулиногенные штаммы микобактерий туберкулеза M. tuber c ulosis Dt/Strain , и/или Т-3480 и M. bovis “Vallee” из Государственной коллекции ПБА. Используют не более 2 пассажей на плотной питательной среде для выращивания микобактерий, не более 2 пассажей на жидкой картофельной среде и не более 8 пассажей на синтетической среде Линниковой-Могилевского.

Аллерген туберкулёзный очищенный

Инструкция по применению.

Аллерген туберкулезный очищенный в стандартном разведении (очищенный туберкулин в стандартном разведении), раствор для внутрикожного введения.

Очищенный туберкулин в стандартном разведении представляет собой смесь фильтратов убитых нагреванием культур микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов, очищенных путем ультрафильтрации, осажденных трихлоруксусной кислотой, обработанных этиловым спиртом и эфиром для наркоза, растворенную в стабилизирующем растворителе. Одна доза (0,1 мл) препарата содержит: активное вещество - аллерген туберкулопротеин - 2 ТЕ (туберкулиновые единицы); вспомогательные вещества - натрия гидрофосфата гептагидрат - 0,783 мг, натрия хлорид - 0,457 мг, калия дигидрофосфат - 0,063 мг, полисорбат - 80 (стабилизатор) - 0,005 мг, фенол (консервант) - 0,25 мг.

Препарат имеет вид бесцветной прозрачной жидкости, не содержащей осадка и посторонних примесей.

Фармакотерапевтическая группа.

МИБП - аллерген.

Код АТХ. V01АА20.

Биологические и иммунологические свойства.

Активное вещество препарата аллерген – туберкулопротеин, вызывает при постановке внутрикожной туберкулиновой пробы у инфицированных или вакцинированных лиц специфическую реакцию гиперчувствительности замедленного типа в виде местной реакции - гиперемии и инфильтрата (папулы).

Назначение.

Препарат предназначен для массовой туберкулинодиагностики:

• отбор лиц для ревакцинации БЦЖ, а также перед первичной вакцинацией детей в возрасте 2 мес и более;
• диагностика туберкулеза, в там числе для раннего выявления начальных и локальных форм туберкулеза у детей и подростков;
• определение инфицирования микобактериями туберкулеза.

Способ применения и дозировка.

Применяют для постановки внутрикожной пробы Манту. Препарат вводят строго внутрикожно. Пробу Манту ставят пациентам обязательно в положении сидя, т.к. у эмоционально лабильных лиц инъекция может стать причиной обморока. Для проведения внутрикожной пробы применяют однограммовые туберкулиновые шприцы разового использования с короткими тонкими иглами.

Запрещается применять для пробы Манту шприцы и иглы с истекшим сроком годности, инсулиновые шприцы.

Ампулу с препаратом тщательно обтирают марлей, смоченной 70° этиловым спиртом, затем шейку ампулы подпиливают ампульным ножом и отламывают. В шприц с иглой № 0845 набирают 0,2 мл, т. е. 2 дозы туберкулина, насаживают тонкую иглу, выпускают раствор до метки 0,1 мл в стерильный ватный тампон. Ампулу после вскрытия допускается хранить в асептических условиях не более 2 ч.

На внутренней поверхности средней трети предплечья участок кожи обрабатывают 70° этиловым спиртом и просушивают стерильной ватой. Медработник левой рукой фиксирует снизу кожу предплечья пациента так, чтобы на внутренней поверхности она была натянута. Тонкую иглу срезом вверх вводят в верхние слои кожи параллельно ее поверхности - внутрикожно. После введения иглы в кожу из шприца вводят строго по делению шкалы 0,1 мл препарата, т.е. 1 дозу (2 ТЕ). При правильной технике введения в коже образуется папула беловатого цвета в виде "лимонной корочки", размером 7 - 10 мм, в диаметре. Для каждого обследуемого употребляют отдельный стерильный шприц и иглу.

Пробу Манту ставит по назначению врача специально обученная медсестра, имеющая документ - допуск к проведению туберкулинодиагностики.

Учет результатов.

Результаты туберкулиновой пробы оценивает врач или специально обученная медсестра. Результат пробы Манту оценивают через 72 ч путем измерения размера инфильтрата (папулы) в мм. Прозрачной линейкой с миллиметровыми делениями измеряют и регистрируют поперечный (по отношению к оси предплечья) размер инфильтрата. Гиперемию учитывают только в случае отсутствия инфильтрата. Ответная реакция на пробу Манту считается:

• отрицательной - при полном отсутствии инфильтрата (папулы) и гиперемии или при наличии уколочной реакции (до 1 мм);
• сомнительной - при инфильтрате размером (2-4 мм) или только гиперемии любого размера без инфильтрата;
• положительной - при наличии инфильтрата диаметром 5 мм и более;
• гиперергической - у детей и подростков реакция с диаметром инфильтрата 17 мм и более, у взрослых - 21 мм и более, а также везикулонекротические реакции независимо от размера инфильтрата с лимфангоитом или без него.

Реакция на введение туберкулина.

Реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) зависит от уровня специфической реактивности организма. Пик ГЗТ наступает через 48-72 ч, к этому времени проявление местной реакции немедленного типа (гиперемия), исчезает.

Противопоказания для постановки туберкулиновой пробы:

Распространенные кожные заболевания, острые, хронические инфекционные и соматические заболевания в период обострения; аллергические состояния (ревматизм в острой и подострой фазах, бронхиальная астма, идиосинкразии с выраженными кожными проявлениями в период обострения), эпилепсия. Проба Манту ставится через 1 мес после исчезновения всех клинических симптомов или сразу после снятия карантина. Не допускается проведение пробы Манту в тех детских коллективах, где имеется карантин по детским инфекциям. Профилактические прививки могут повлиять на чувствительность к туберкулину. Исходя из этого, туберкулинодиагностику необходимо планировать до проведения профилактических прививок против различных инфекций. В случае, если профилактическая прививка была проведена, то туберкулинодиагностика должна осуществляться не ранее, чем через 1 мес после прививки.

С целью выявления противопоказаний врач (медицинская сестра) в день постановки туберкулиновых проб проводят опрос и осмотр лиц, подлежащих пробе.

Побочное действие.

Иногда отмечается недомогание, головная боль, повышение температуры тела. У отдельных лиц, с высокой степенью ГЗТ к туберкулину местная реакция может сопровождаться лимфаденитом.

Взаимодействие с другими лекарственными препаратами.

Здоровым лицам с сомнительной или положительной реакцией на пробу Манту и детям с отрицательной реакцией на туберкулин, но не подлежащим вакцинации БЦЖ, все профилактические прививки можно проводить непосредственно после оценки результатов пробы Манту.