Иммуноферментный анализ (ИФА)Enzyme immunoassay (EIA). Реферат: Принципы иммуноферментного анализа, основные виды ИФА, применение в диагностике Что такое анализ крови на ифа

21.10.2019

ИФА — это современное лабораторное исследование, в ходе которого ведется поиск специфических антител в крови (либо антигенов) к конкретным заболеваниям с целью выявления не только этиологии, но и стадии болезни.

поиск специфических антител к любому инфекционному заболеванию;
поиск антигенов каких-либо инфекционных заболеваний;
исследование гормонального статуса пациента;
обследование на предмет наличия аутоиммунных заболеваний.

Как и у любого метода лабораторной диагностики ИФА имеет свои преимущества и свои недостатки. К преимуществам метода относятся:

высокая специфичность и чувствительность метода (более 90%);
возможность определения заболевания и отслеживания динамики процесса, то есть сравнение количества антител в разных временных промежутках;
доступность и скорость данного исследования;
не инвазивный способ забора материала не исследование;

Недостатком метода является тот факт, что в ходе анализа удается выявить не самого возбудителя заболевания, а только иммунный ответ на него (антитела).

Суть метода ИФА

Выделяют несколько разновидностей ИФА: прямой, непрямой, метод блокирования, конкурентный. Однако на практике чаще всего используется гетерогенный твердофазный иммунный анализ или ELISA.

Основу иммуноферментного анализа составляет иммунная реакция антигена и антитела с образованием иммунного комплекса, в результате чего происходит изменение ферментативной активности специфических меток на поверхности антител.

По сути, этот процесс можно разделить на несколько этапов:

на поверхности лунок планшета тест-системы находится очищенный антиген определенного возбудителя. При добавлении сыворотки крови животного происходит специфическая реакция между этим антигеном и искомым антителом;
далее, в лунку добавляется особый хромоген (конъюгат, меченный пероксидазой). Происходит ферментативная реакция, результатом которой является образование окрашенного вещества в лунке планшета. Интенсивность окраски его зависит от количества содержащихся в сыворотке животного иммуноглобулинов (антител);
далее происходит оценка результата. С помощью многоканального спектрофотометра, происходит сравнение оптической плотности исследуемого материала с оптической плотностью контрольных проб и математическая обработка результатов. Количество антител у пациента напрямую зависит от высоты оптической плотности данной лунки.

Нужно помнить: для каждой тест-системы разрабатываются индивидуальные показатели для учета результатов, показатели нормы и патологии («референтные значения»). Это нужно учитывать при оценке результатов каждого конкретного исследования.

Некорректно интерпретировать результаты одной лаборатории по «референтным значениям» другой лаборатории. Также некорректно сравнивать результаты разных лабораторий между собой.

При оценке результатов на конкретные инфекции имеет значение класс обнаруженных антител и их количество. От этого зависит не только вопрос этиологии инфекции, но и предполагаемая стадия заболевания (острая, хроническая), а также наличие активной инфекции (острой или обострения хронической) на момент обследования.

Каковы приблизительные сроки появления антител?

Самыми ранними антителами являются IgM. Выявить их можно через 1-3 недели после возможного инфицирования, что характеризует острую фазу инфекционного процесса. Вторая ситуация появления антител IgM – обострение хронического процесса. IgM циркулируют в среднем около 3х месяцев, затем их количество постепенно исчезает. Однако у некоторых пациентов следовые количества IgM могут обнаруживаться в течение 1-2х лет с момента инфицирования.

С 4й недели после инфицирования начинают появляться антитела IgG. При большинстве инфекций титр их постепенно увеличивается с максимумом в разные сроки (в среднем через 1,5-2 мес), далее титр остается на невысоком уровне и указывает на иммунитет. При некоторых заболеваниях уровень IgG не бывает высоким.

Варианты обнаружения антител

Изолированное обнаружение антител IgM предполагает наличие первичного инфицирования.
Одновременное выявление в крови IgM и IgG характерно для первичного инфицирования в предыдущие 2-3 месяца, а также при обострении хронического заболевания.
Выявление изолированно IgG может указывать как на иммунитет к данному заболеванию, так и на хроническую инфекцию. Во второй ситуации имеет значение и количество антител (титр), и изменение этого титра в динамике. Обычно исследования проводят с интервалом в 2-4-6 недель.

Анализ ИФА (иммуноферментное исследование) - современная диагностическая процедура, направленная на выявление в крови специфических антител к возбудителям ряда заболеваний, определение стадии развития патологии и ее этиологии. Применяется как метод контроля за процессом лечения и его эффективностью. В процессе исследования анализируются качественные и количественные показатели.

Метод ИФА обладает высокой информативностью, точность результатов составляет более 96%. Диагностика доступна практически в любой лаборатории и медицинском учреждении.

Основные показания

Иммуноферментное исследование назначается с целью подтверждения наличия инфекционных заболеваний, передающихся половым путем:

трихомониаза;
хламидиоза;
уреаплазмоза;
сифилиса и др.

Также ИФА применяется для диагностики вирусных заболеваний:

герпеса;
герпеса 4 типа (вирус Эпштейна-Барра);
вирусного гепатита;
цитомегаловирусной инфекции.

Как подготовиться к исследованию

Биологическим материалом для исследования служит кровь. За несколько дней до ее сдачи исключается прием медикаментозных препаратов. За 14 дней останавливается прием антибиотиков, противогельминтных и противовирусных средств.

Забор материала осуществляется утром натощак. За час до процедуры разрешается выпить стакан воды без газа, прием пищи исключается.

Особенности анализа

Для проведения исследования берется венозная кровь, в объеме не менее 5 мл. В отдельных случаях в качестве биоматериала используется спинномозговой ликвор, амниотическая жидкость или содержимое стекловидного тела.

Забор крови осуществляется при помощи инъекционной иглы, строго натощак, с целью избежания ложноположительных результатов. За 12 часов следует отказаться от курения и приема алкогольных напитков. При употреблении наркотических веществ результаты анализа искажаются.

Если в заключении указаны отрицательные значения иммуноглобулинов G, А, М, это говорит о начальной фазе развития патологического процесса либо о его отсутствии. Такой результат регистрируется при полном выздоровлении на фоне проведенной терапии.

Отрицательный результат IgM и IgA и положительный IgG говорят о формировании иммунитета после инфекционного заболевания или вакцинации.

Положительный результат IgM и отрицательный или положительный результат IgG, IgA свидетельствуют о наличии острой инфекционной патологии.

Анализ ИФА проводится достаточно быстро, результаты готовы через сутки после забора материала.

В современной лабораторной диагностике инфекционных болезней широкое применения нашел метод иммуноферментного исследования крови (ИФА), основанный на обнаружении специфических, характерных для возбудителей антител.

В чем суть метода?

Чтобы это понять, следует знать, как работает иммунная система человека, что такое антиген, антитела, какие функции они выполняют.

Антиген в нашем организме представляет собой молекулу, которая специфично связывается с антителом. Он переносит определенную информацию о клетке.
Когда в кровь попадает чужеродный антиген, начинают вырабатываться антитела (иммуноглобулины Ig), которые распознают его и стремятся уничтожить.
Такое взаимодействие называется иммунным комплексом, на котором и основан метод диагностики ИФА.
Анализ позволяет определить уровень гормонов, иммуноглобулинов, иммунологических комплексов и других биологически активных веществ, поэтому важен для комплексной диагностики .

Кому показана диагностика?

Специалист может назначить исследование с целью:

По сравнению с другими методами исследования ИФА обладает целым рядом преимуществ:

Задайте свой вопрос врачу клинической лабораторной диагностики

Анна Поняева. Закончила нижегородскую медицинскую академию (2007-2014) и Ординатуру по клинико-лабораторной диагностике (2014-2016).

Из недостатков можно отметить возможную неточность расшифровки . Иногда анализ показывает ложноотрицательный или ложноположительный результат, особенно при неправильной подготовке или нарушении техники выполнения.

Как выполняется?

Процедура ничем не отличается от взятия материала для .

После назначения анализа пациент направляется в лабораторию для забора венозной крови. Процедура проводятся утром на голодный желудок.
Материал отправляется в лабораторию, где из крови получают сыворотку, в которой находятся антитела.
Сыворотку помещают в пробирки с наборами антигенов. В практике таких наборов применяется много. Это могут быть разные аллергены (пыльца, шерсть, цитрусовые, молоко и другие), возбудители инфекционных и вирусных заболеваний и другие.
После получения реакции остатки сыворотки сливают. Количество антител определяют при помощи специальных индикаторов.

Сроки изготовления анализа

Срок выполнения зависит от конкретной лаборатории. Некоторые лаборатории предоставляют результаты в течении 1-2 дней , другие в течение 1 недели. Задержки могут быть из-за накопления определенного количества сывороток.

Подготовка к исследованию

Перед сдачей анализа следует придерживаться простых правил подготовки:

Исключить прием любых медикаментозных средств накануне анализа. Если это невозможно, обязательно поставьте в известность врача, назначающего диагностику. Особое внимание уделяется лекарствам от аллергии. Если пациент принимает антигистаминные препараты, следует проконсультироваться с врачом, за сколько до начала исследование нужно их отменить. Это касается и некоторых лекарств для щитовидной железы. Иначе концентрация ТТГ может быть определена неправильно и результат нормы и патологии будет получен неверно. Как правило, в норме антибактериальные, противовирусные, антигистаминные препараты прекращают принимать за 10-16 дней до диагностики .
Кровь забирается строго натощак . Последний прием пищи в норме должен быть за 8-12 часов до поездки в лабораторию.
Нельзя принимать алкогольные напитки и курить, иначе это повлияет на норму результатов.
Следует исключить любые стрессовые факторы, физические нагрузки. Обязательно хорошо выспаться.

Все, что вам необходимо знать про анализ на примере одной из лабораторий

Что может повлиять на результаты?

Анализ ИФА — достаточно точный метод исследования. Погрешности возникают в случаях:

нарушении процедуры взятия материала;
при неправильной транспортировки и хранении материала;
во время приема некоторых медикаментозных средств (препараты для щитовидной железы, например, которые могут повлиять на концентрацию ТТГ);
при наличии скрытых заболеваний (в том числе ЗППП, хламидии, например), нарушениях обмена веществ, иммунодефиците;
в период новорожденности, когда в норме в организме присутствуют еще материнские антитела.

Расшифровка, значения (нормы и патологии)

Когда анализ будет готов, пациент получает бланк, где указываются отрицательные (-) и положительные (+) результаты определения каждого класса иммуноглобулинов. Интерпретация может быть такая:

На выздоровление пациента указывают отрицательный результат IgM , без определения IgA, IgG.
Хроническое инфекционное заболевание подразумевает расшифровка: (-) IgM и отрицательный, положительный IgG, IgA.
Об отсутствии защитной реакции к инфекциям указывают (-) значения IgM, IgG, IgA.
Острая инфекция обнаруживается при отрицательном или положительном IgG и IgA, (+) IgM.
Постинфекционный иммунитет при (-) IgM, IgA и положительном значении IgG.
Обострение хронического заболевания — (+) показателях IgM, IgG, IgA.

Наглядная демонстрация ИФА анализа

Где сделать?

Анализ крови методом ифа считается востребованной диагностикой и предлагается различными лабораториями, клиниками города.

В Москве анализ ИФА можно сделать:

в лаборатории Ниармедик,
Инвитро,
Царской клинике,
Дельтаклинике,
ЛДЦ Кутузовском,
МедЦентрСервисе,
сети Онклиник,
Чудо докторе,
Семейном докторе,
К+31,
ООО Медицине и других.

В Санкт-Петербурге анализ ИФА проводится

в Мэдисе,
Американской медицинской клинике,
Клинике доктора Филатова,
Medem,
Клинике Доктора Пеля,
Лека-Фарм,
Инклиник,
Экспрессе и других.

Очень полезный учебный фильм про анализ ИФА

Стоимость исследования

Складывается от количества нужных маркеров. Чем больше маркеров, тем выше цена.

Цена на определение антител к

цитомегаловирусу Igm/IgG варьируется в пределах 350-700 рублей,
к микоплазме 340-520 рублей,
к кандиде 320-450 рублей,
Анти-Хламидия tr. IgA + Анти-Хламидия tr. IgG 1000-1300,
антитела класса IgM к Хламидии 500-600 рублей и т.д.
Забор крови в среднем составляет 150-250 рублей.

Некоторые клиники и лаборатории предоставляют услугу отправки результатов по электронной почте. Услуга бесплатна.

Диагностика ИФА занимает особое место в диагностике заболеваний.

Она характеризуется широким спектром действия , быстротой и удобством проведения, высокой точностью результатов, приемлемой стоимостью. Она востребована, поэтому доступна в разных клиниках и лабораториях города.

Содержание

Для оценки способности организма сопротивляться инфекционным болезням или для определения фазы патологии применяют анализ крови. Метод ИФА занимает важное место среди лабораторных исследований, он помогает всесторонне изучить деятельность защитной функции крови, определить иммунодефицит при инфекционных заболевания, недугах крови, гормональных, аутоиммунных процессах.

Что такое иммуноферментный анализ крови

Этот метод относится к лабораторным исследованиям, определяет наличие защитных факторов крови белковой природы (антител) к определенным болезнетворным агентам (антигенам) . Иммуноферментный анализ крови определяет иммуноглобулины, которые могут обнаруживаться в виде иммунокомплексов. Появляются они при возникновении сложных нейрогуморальных реакций иммунной защиты человека, которые становятся ответом на внедрение чужеродных антигенов.

Против каждого вида болезнетворного агента производятся в организме специфические антитела. Далее происходит связывание патологического микроорганизма или антигена, образуется комплексное соединение «антиген-антитело». Затем оно нейтрализуется, происходит ферментативный лизис, реакция фагоцитоза, и заканчивается процесс выводом из организма. Наличие конкретных комплексов, определяющееся ИФА, говорит о виде возбудителя, вредного вещества у больного.

Классы иммуноглобулинов

Учеными обнаружено и изучено 5 видов иммуноглобулинов: IgE, IgD, IgG, IgM, IgА . Существуют и другие классы, но они находятся еще на стадии исследования, и не до конца выяснена их роль. В практической медицине важное значение имеют А, М, G. Информативность, точность определения базируется на временных промежутках, за которые они появляются, достигают максимума и исчезают.

Показания к исследованию крови методом ИФА

При помощи этого анализа можно оценивать эффективность лечения, проводить комплексное исследование перед трансплантологическими операциями, определять состояние иммунодефицита и антитела к более 600 видов аллергенов . Исследование крови методом ИФА использует в качестве дополнительного способа обнаружения онкологических клеток. Назначают анализ при необходимости обнаружения антител к микробам, которые провоцируют венерические патологии:

трихомониаз;
сифилис;
токсоплазмоз;
микоплазмоз;
уреаплазмоз.

При глистных инвазиях в анализе ИФА будет отмечен рост количества иммуноглобулинов. Проводится исследования для подтверждения наличия у больного:

вируса Эпштейна-Барра;
герпетических инфекций;
цитомегаловируса;
группы вирусных гепатитов.

Иммуноферментное исследование крови не единственный вариант для определения иммуноглобулинов. Иногда для этого исследования делают забор спинномозговой жидкости, ткани стекловидного тела, околоплодных вод. При использовании крови набирают ее из локтевой вены при помощи инъекционной иглы. Сдавать анализ необходимо натощак, перед ИФА не рекомендуется принимать медицинские препараты, которые могут повлиять на результат. Следует отказаться от алкоголя, курения, употребления наркотических веществ перед сдачей биоматериала. Варианты результатов теста:

При отрицательных показателях иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA, врачи говорят об отсутствии патологии или начальной стадии. Такой же результат (отрицательный) будет после полного выздоровления по прошествии длительного периода.
Если IgG проявляется положительно, а IgM и IgA не обнаружены, это указывает на образование иммунитета после прививки или инфекционной болезни.
При высоких титрах IgM и отрицательных IgA, IgG ставят диагноз острого инфекционного заболевания.
При положительном показателе IgG, IgM, IgA врачи говорят об острой фазе рецидива уже имеющегося хронического недуга.
При хронической инфекции, которая находится на стадии стихания (ремиссии), анализ ИФА показывает отрицательные титры IgM, а IgA и IgG будут положительными.

Преимущества и недостатки ИФА анализа

Основным отрицательным моментом этого исследования является вероятность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Причиной недостоверности становится прием медикаментов, технические недочеты лаборатории. Фальсифицировать анализ может процесс нарушения метаболизма в организме. Главными достоинствами анализа ИФА являются:

точность, диагностическая специфичность;
невысокая себестоимость анализа;
скорость получения результатов;
возможность динамического контроля стадии патологии, эффективности лечения;
простота исследования;
возможность выполнять массовые обследования очагов инфекции;
безболезненность, безопасность для больного;
применение при обработке информационных технологий.